猪源肠外致病性大肠杆菌的分离鉴定和毒力分析
猪源肠外致病性大肠杆菌的分离鉴定和毒力分析[20200507184523]
摘要： 自2013年至今从病料中经麦康凯分离纯化，陆续分离到75株大肠杆菌。根据猪源肠外致病性大肠杆菌(Extraintestinal Pathogenic E. coli, ExPEC)的iutA、papC/papA、hlyD、fyuA、vaT、Fim5等5个特征性毒力基因设计引物，经PCR检测，确定58株为猪源肠外致病性大肠杆菌，根据常规分群将其分为B1，A，B2，D四个群系。后对这58株ExPEC进行了药敏试验，发现ExPEC对大多数抗生素都呈普遍耐药；溶血性检测表明只有4株菌有β溶血能力；以BALB/c小鼠为动物模型，测定强毒力群菌株的致病力，最终筛选到半数致死量为9.1×105 CFU的强毒株JX131101。低拷贝质粒的提取初步表明携带的质粒数和耐药性有一定相关性，与毒力间的联系并不清楚。试验结果表明了猪源的ExPEC发病率日趋增长，需加以防控。
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关键字:猪肠外致病性大肠杆菌；分离鉴定；毒力基因检测；药敏试验；小鼠致病性
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）2
1材料与方法2
1.1病料 2
1.2实验动物 2
1.3主要试剂和试剂盒 2
1.4培养基和主要溶液配制 2
1.5试验器材 2
1.6细菌的分离3
1.7细菌的纯化培养3
1.8细菌基因组（DNA）的提取3
1.9引物3
1.9.1毒力因子引物3
1.9.2分型引物4
1.10毒力因子的检测 4
1.11 毒力群分群试验4
1.12细菌16SrDNA测序试验 4
1.13药敏试验4
1.14溶血试验5
1.15动物试验5
1.15.1 细菌培养 5
1.15.2细菌致病力试验 5
1.15.3小鼠半数致死量（LD50）测定5
1.16质粒谱耐药相关性分析5
1.17多位点序列分型（MLST）5
2结果与分析6
2.1猪肠外致病性大肠杆菌的分离与鉴定6
2.2毒力因子的检测6
2.3 毒力群分群试验8
2.4药敏试验8
2.5 溶血试验9
2.6动物试验5
2.6.1细菌致病力试验10
2.6.2小鼠半数致死量（LD50）测定10
2.7质粒谱耐药相关性分析10
2.8多位点序列分型（MLST）结果10
3 讨论 12
致 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
谢13
参考文献13
附录A 15
附录B 16
猪源肠外致病性大肠杆菌的分离鉴定与毒力分析
摘要： 自2013年至今从病料中经麦康凯分离纯化，陆续分离到75株大肠杆菌。根据猪源肠外致病性大肠杆菌(Extraintestinal Pathogenic E. coli, ExPEC)的iutA、papC/papA、hlyD、fyuA、vaT、Fim5等5个特征性毒力基因设计引物，经PCR检测，确定58株为猪源肠外致病性大肠杆菌，根据常规分群将其分为B1，A，B2，D四个群系。后对这58株ExPEC进行了药敏试验，发现ExPEC对大多数抗生素都呈普遍耐药；溶血性检测表明只有4株菌有β溶血能力；以BALB/c小鼠为动物模型，测定强毒力群菌株的致病力，最终筛选到半数致死量为9.1×105 CFU的强毒株JX131101。低拷贝质粒的提取初步表明携带的质粒数和耐药性有一定相关性，与毒力间的联系并不清楚。试验结果表明了猪源的ExPEC发病率日趋增长，需加以防控。
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关键字:猪肠外致病性大肠杆菌；分离鉴定；毒力基因检测；药敏试验；小鼠致病性
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）2
1材料与方法2
1.1病料 2
1.2实验动物 2
1.3主要试剂和试剂盒 2
1.4培养基和主要溶液配制 2
1.5试验器材 2
1.6细菌的分离3
1.7细菌的纯化培养3
1.8细菌基因组（DNA）的提取3
1.9引物3
1.9.1毒力因子引物3
1.9.2分型引物4
1.10毒力因子的检测 4
1.11 毒力群分群试验4
1.12细菌16SrDNA测序试验 4
1.13药敏试验4
1.14溶血试验5
1.15动物试验5
1.15.1 细菌培养 5
1.15.2细菌致病力试验 5
1.15.3小鼠半数致死量（LD50）测定5
1.16质粒谱耐药相关性分析5
1.17多位点序列分型（MLST）5
2结果与分析6
2.1猪肠外致病性大肠杆菌的分离与鉴定6
2.2毒力因子的检测6
2.3 毒力群分群试验8
2.4药敏试验8
2.5 溶血试验9
2.6动物试验5
2.6.1细菌致病力试验10
2.6.2小鼠半数致死量（LD50）测定10
2.7质粒谱耐药相关性分析10
2.8多位点序列分型（MLST）结果10
3 讨论 12
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参考文献13
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附录B 16
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