母鼠日粮中添加丁酸钠对子代肝脏能量代谢的影响
母体的营养对子代的生长发育有着相当重要的影响，本实验以大鼠为研究对象，在母鼠妊娠期和泌乳期日粮中添加丁酸钠，子鼠断奶时采样，通过测量子鼠生化指标以及用荧光定量PCR检测子鼠肝脏能量代谢相关基因的表达来阐明丁酸钠对子代能量代谢的影响。试验结果子代鼠体重无显著差异，丁酸处理组肝脏重有增加的趋势（P = 0.053），血液中葡萄糖、甘油三酯等指标均无显著差异。子代鼠线粒体中编码基因NADH脱氢酶亚基ND1， COX1，ATP合成酶的基因表达均显著增加，CPT1a和UCP2表达量增加，脂肪酸氧化增强。实验结果表明丁酸钠饲喂母鼠可以显著影响断奶时子鼠的肝脏能量代谢。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 2
1.1试验动物及样品采集 2
1.2 实验饲料配方 2
1.3血浆中生化指标的测定 2
1.3.1主要试剂2
1.3.2 血浆中生化指标的测定2
1.4 Realtime PCR检测肝脏中基因的表达2
1.4.1 主要试剂2
1.4.2组织总RNA的提取 3
1.4.3 反转录 3
1.4.4实时荧光相对定量PCR3
1.4.5 数据分析及统计 3
2 结果与分析 4
2.1丁酸钠饲喂对子代体重肝重的影响 4
2.2丁酸钠饲喂母鼠对子代肝脏生化指标的影响4
2.3基因分析结果 4
3 讨论 5
3.1能量代谢相关基因5
3.2丁酸钠对子代的影响5
致谢5
参考文献6
母鼠日粮中添加丁酸钠对子代鼠肝脏能量代谢的影响
动物药学 周碧玉
引言
生命早期的营养经历，潜在的影响着子代调节能量平衡的神经内分泌系统的发育。母源性激素作为传递母源环境信息的媒介，在子代生长发育过程中扮演着十分重要的角色，例如性腺激素、糖皮质激素和促生长类激素等[1] 。母体适应环境过程中产生的这些激素水平的波动就成为 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
一种母仔信号传递的介质，在子代胚胎发育过程中得到放大，影响一些关键调节通路的发育和“调定点”的设置，使后代的表型发生改变，生长成不同的个体[2]。
丁酸是一种主要的短链脂肪酸(SCFA)。主要来自大肠中厌氧梭菌对碳水化合物和蛋白质的酵解作用，是结肠上皮细胞能量的主要来源。据文献报道，丁酸作为一种生物调节剂，丁酸在维持细胞的分化和结肠上皮的完整性、提高动物生产性能方面发挥着重要作用[3]。因其具有游离性和挥发性的特点，饲料生产中将其制成相对稳定的钠盐——丁酸钠(Sodium butyrate)[4]。丁酸钠水解成丁酸后具有广泛的生理功能，如作为肠细胞能量源、促进肠细胞分化增殖，改进小肠形态促进消化吸收等[5]。另有研究表明，丁酸以β羟基丁酸的形式进入肝脏和乳腺组织， 参与体内物质代谢，合成乳脂和体脂[68]。关于丁酸在动物肠道中的作用研究较多，但是目前关于丁酸对肝脏中能量代谢影响研究甚少。孕期母鼠食用丁酸钠后，子代鼠肝脏能量的变化尚不清楚，所以我们设计了这个实验，通过研究线粒体中与能量代谢相关的编码酶的基因CPT1，UCP2，ND1，COX1等的表达等来研究母鼠日粮中添加丁酸钠对子代鼠肝脏中能量代谢的影响。
1 材料与方法
1.1 试验动物及样品采集
7080日龄的雌鼠，体重约300克20只，饲喂基础日粮。饲养适应一周后，与雄鼠1：2合笼，控制温度在2426℃，12h小时黑夜观察，取母鼠阴道涂片，在显微镜下观察是否有精子来判断母鼠配种情况。将配上的雌鼠分为两组，保证每组有8只妊娠成功。将两组雌鼠中的一组饲喂基础日粮作为对照，如表11，饲料配方。另一组饲喂添加了1%丁酸钠的日粮作为实验组直至子鼠断奶，如表12配方。实验中采用自由饮水、采食。母鼠产仔后对新生子鼠称重，剔除较弱的子鼠，保留每组五子雌鼠，五只雄鼠。饲喂至子鼠断奶后采集抗凝血，分离血浆，于 20℃保存。采集肝脏，至于液氮中迅速冷冻，于 70℃保存，待后续实验。
1.2 饲料配方
表11繁殖型基础日粮
质量比
能值cal/g
能量比
粗蛋白
22.00%
4005.68
25.00%
粗脂肪
6.50%
9002.31
16.60%
碳水化合物
51.50%
3997.28
58.40%
其他
20.00%
0.00
0.00%
合计
100.00%
100.00%
表12丁酸钠饲料配方
对照组
丁酸钠组
基础料/kg
100
99
丁酸钠/g
1
合计
100
100
1.3 血浆中生化指标的测定
1.3.1 主要试剂
全自动生化分析仪：日立7020
1.3.2 血液样品的采集
子鼠出生后约21天断奶后，后腔静脉采血，分装如高压过的离心管中，常温3000r/min，10min离心，分理出血清，用尖嘴吸管取上层血清，分装于离心管中,置20℃冰箱中保存，用于血液指标的测定。
1.3.2 血浆中生化指标的测定
血浆中生化指标的测定通过全自动生化分析仪测定。
1.4 Realtime PCR检测肝脏中基因的表达
1.4.1 主要试剂
Trizol试剂盒：上海英维捷生物工程有限公司生产
反转录酶MMLV：Promega公司生产
随机引物，DNA酶，RNA酶抑制剂，SYBR Green RealTime PCR Marster Mix ：大连宝成生物工程有限公司
基因表达检测所用的引物设计使用Primer Premier 5.0软件，并由上海杰瑞生物工程有限责任公司合成。
1.4.2 组织总RNA的提取
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 2
1.1试验动物及样品采集 2
1.2 实验饲料配方 2
1.3血浆中生化指标的测定 2
1.3.1主要试剂2
1.3.2 血浆中生化指标的测定2
1.4 Realtime PCR检测肝脏中基因的表达2
1.4.1 主要试剂2
1.4.2组织总RNA的提取 3
1.4.3 反转录 3
1.4.4实时荧光相对定量PCR3
1.4.5 数据分析及统计 3
2 结果与分析 4
2.1丁酸钠饲喂对子代体重肝重的影响 4
2.2丁酸钠饲喂母鼠对子代肝脏生化指标的影响4
2.3基因分析结果 4
3 讨论 5
3.1能量代谢相关基因5
3.2丁酸钠对子代的影响5
致谢5
参考文献6
母鼠日粮中添加丁酸钠对子代鼠肝脏能量代谢的影响
动物药学 周碧玉
引言
生命早期的营养经历，潜在的影响着子代调节能量平衡的神经内分泌系统的发育。母源性激素作为传递母源环境信息的媒介，在子代生长发育过程中扮演着十分重要的角色，例如性腺激素、糖皮质激素和促生长类激素等[1] 。母体适应环境过程中产生的这些激素水平的波动就成为 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
一种母仔信号传递的介质，在子代胚胎发育过程中得到放大，影响一些关键调节通路的发育和“调定点”的设置，使后代的表型发生改变，生长成不同的个体[2]。
丁酸是一种主要的短链脂肪酸(SCFA)。主要来自大肠中厌氧梭菌对碳水化合物和蛋白质的酵解作用，是结肠上皮细胞能量的主要来源。据文献报道，丁酸作为一种生物调节剂，丁酸在维持细胞的分化和结肠上皮的完整性、提高动物生产性能方面发挥着重要作用[3]。因其具有游离性和挥发性的特点，饲料生产中将其制成相对稳定的钠盐——丁酸钠(Sodium butyrate)[4]。丁酸钠水解成丁酸后具有广泛的生理功能，如作为肠细胞能量源、促进肠细胞分化增殖，改进小肠形态促进消化吸收等[5]。另有研究表明，丁酸以β羟基丁酸的形式进入肝脏和乳腺组织， 参与体内物质代谢，合成乳脂和体脂[68]。关于丁酸在动物肠道中的作用研究较多，但是目前关于丁酸对肝脏中能量代谢影响研究甚少。孕期母鼠食用丁酸钠后，子代鼠肝脏能量的变化尚不清楚，所以我们设计了这个实验，通过研究线粒体中与能量代谢相关的编码酶的基因CPT1，UCP2，ND1，COX1等的表达等来研究母鼠日粮中添加丁酸钠对子代鼠肝脏中能量代谢的影响。
1 材料与方法
1.1 试验动物及样品采集
7080日龄的雌鼠，体重约300克20只，饲喂基础日粮。饲养适应一周后，与雄鼠1：2合笼，控制温度在2426℃，12h小时黑夜观察，取母鼠阴道涂片，在显微镜下观察是否有精子来判断母鼠配种情况。将配上的雌鼠分为两组，保证每组有8只妊娠成功。将两组雌鼠中的一组饲喂基础日粮作为对照，如表11，饲料配方。另一组饲喂添加了1%丁酸钠的日粮作为实验组直至子鼠断奶，如表12配方。实验中采用自由饮水、采食。母鼠产仔后对新生子鼠称重，剔除较弱的子鼠，保留每组五子雌鼠，五只雄鼠。饲喂至子鼠断奶后采集抗凝血，分离血浆，于 20℃保存。采集肝脏，至于液氮中迅速冷冻，于 70℃保存，待后续实验。
1.2 饲料配方
表11繁殖型基础日粮
质量比
能值cal/g
能量比
粗蛋白
22.00%
4005.68
25.00%
粗脂肪
6.50%
9002.31
16.60%
碳水化合物
51.50%
3997.28
58.40%
其他
20.00%
0.00
0.00%
合计
100.00%
100.00%
表12丁酸钠饲料配方
对照组
丁酸钠组
基础料/kg
100
99
丁酸钠/g
1
合计
100
100
1.3 血浆中生化指标的测定
1.3.1 主要试剂
全自动生化分析仪：日立7020
1.3.2 血液样品的采集
子鼠出生后约21天断奶后，后腔静脉采血，分装如高压过的离心管中，常温3000r/min，10min离心，分理出血清，用尖嘴吸管取上层血清，分装于离心管中,置20℃冰箱中保存，用于血液指标的测定。
1.3.2 血浆中生化指标的测定
血浆中生化指标的测定通过全自动生化分析仪测定。
1.4 Realtime PCR检测肝脏中基因的表达
1.4.1 主要试剂
Trizol试剂盒：上海英维捷生物工程有限公司生产
反转录酶MMLV：Promega公司生产
随机引物，DNA酶，RNA酶抑制剂，SYBR Green RealTime PCR Marster Mix ：大连宝成生物工程有限公司
基因表达检测所用的引物设计使用Primer Premier 5.0软件，并由上海杰瑞生物工程有限责任公司合成。
1.4.2 组织总RNA的提取
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