细菌脂多糖对大鼠血液炎症因子和氧化指标的影响
脂多糖（LPS）是格兰氏阴性菌细胞的一种活跃的组成成分，其可以激活机体的炎症反应。然而，脂多糖对大鼠血液炎症因子及氧化指标的影响目前报道不多。本研究的目的是通过不同浓度的LPS诱导大鼠发生炎症反应，检测大鼠血液炎症因子及氧化指标水平。将大鼠随机分为四组，即对照组和LPS组（3、10、15毫克/千克体重），对照组注射生理盐水，LPS组分别注射相应浓度的LPS试剂。通过酶联免疫吸附试验、黄嘌呤氧化酶法和乳酸脱氢酶（LDH）的测定方法分析血液中IL-1β和IL-6的分泌量，LDH的活性以及SOD和MDA的量。我们的试验表明，在一定量LPS的诱导下,24小时后大鼠的两种促炎因子IL-1β和IL-6的水平上升；相对于0mg/kg剂量组，10-15mg/kg剂量组中LDH 活性显著增强（1.5-1.8倍）；不同剂量的LPS能够增强大鼠血液中的MDA的水平，降低血清中的SOD的活性，5mg/kg剂量组MDA的水平相对于0mg/kg剂量组呈现显著差异（P<0.05）。SOD的活性和MDA水平在剂量为10mg/kg时相对于0mg/kg时相比呈现出现显著差异（P<0.05）。试验表明，LPS应激能够诱导大鼠的炎症反应；同时，LPS应激能够诱发氧化应激。
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract: 2
Keywords： 3
引言 3
1 材料和方法 3
1.1动物 3
1.2动物处理和样品准备 3
1.3 指标测定 4
1.3.1IL1和IL6的测量 4
1.3.2 LDH活性测定 4
1.3.3 SOD和MDA的测量 4
2 统计分析 4
3结果 4
3.1 LPS对大鼠血清炎性细胞因子的影响 4
3.2 LPS对大鼠LDH活性的影响 4
3.3 LPS对大鼠血清MDA含量以及SOD活性的影响 4
4 讨论 5
致谢 7
参考文献 8
细菌脂多糖对大鼠血液炎症因子及氧化指标的影响
引言
炎症是一种对于组织损伤或者微生物入侵机体时，机体发生的局部，保护性的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
反应现象[2]。众多种类的细胞以及活性成分参与了这个过程。炎症初期，多种炎症因子经炎性细胞释放后，对损伤因子进行稀释、杀伤以及清除，同时，炎症因子也参与了机体受损部位的组织再生，促进伤口的修复和愈合。适当的炎症反应会帮助机体清除损伤，抵御外来感染，促进伤口愈合。脂多糖（LPS）是革兰氏阴性细菌细胞的一种活跃的组成成分[1,3]，是与机体组织长期共生的微生物，机体在受到革兰氏阴性细菌的感染时，LPS作用于细胞膜受体，通过细胞内信号传递级联使基因表达发生变化，LPS介导内皮细胞、平滑肌细胞核成纤维细胞，上皮细胞等实质细胞以及单核巨噬细胞激活，趋化因子，生长因子和其他多种因子如白细胞介素，肿瘤坏死因子等的合成和释放。LPS是革兰氏阴性细菌主要的致病成分，可激活几乎所有的真核细胞发生形态、代谢和基因表达变化，导致宿主细胞因子失控性表达，介导严重感染，多脏器损伤，败血症休克等疾病的发生发展[4,5,6]。然而，脂多糖作为一种应激源其可诱导大鼠的炎症因子产生，但其对机体氧化应激指标方面的报道较少。本研究就是通过脂多糖诱导大鼠炎症反应，评估脂多糖对大鼠血液中炎症因子及氧化指标的影响。
1材料和方法
动物
来自于青龙山实验室动物工厂的性成熟SD雌鼠7080天，体重250300g。大鼠饲养在单独的笼子里，提供自由饮食，1212h明暗周期，温度控制在2325℃。
1.2动物处理和样品准备
大鼠被随机分为四组，如下所示：
对照组（n=5）；LPS组（0、3、10和15毫克/千克体重，腹腔注射，n=5/剂量；在LPS处理24小时后，将大鼠用戊巴比妥钠麻醉（4mg/kg,iv），然后使用断颈法让老鼠安乐死。采集血液常温离心，3000g持续30分钟后，提取血清，将血清保存在80℃冰箱中，以备后续试验。
1.3 指标测量
1.3.1 IL1β和IL6的测量
使用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒（R&D，中国上海），测定血清中IL1β及IL6水平，结果用pg/ml表示。
1.3.2 LDH活性测定
使用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定血浆中的LDH水平（中国南京建成生物工程有限公司），使用严格按照说明进行，结果以U/L表示。
1.3.3 SOD和MDA的测量
血清中总超氧化物歧化酶（TSOD）的活性测定利用黄嘌呤氧化酶法测定，利用分光光度计在550nm条件下测定样品的吸光率，结果以U/ml表示。丙二醛的测定，利用在吸光度为532nm的硫代巴比土酸（TBA）法，结论的单位表示为nmol/ml。试验过程严格按照说明书进行，SOD和MDA测定试剂盒购自中国南京建成生物工程研究所。
2 统计分析
所有的结果表示为平均值±SE，统计分析使用方差分析，结果具有统计显著性，p<0.05。
3 结果
3.1 LPS对大鼠血清炎性细胞因子的影响
本实验通过ELISA方法分析了不同剂量的LPS（015mg/kg BW）对大鼠血液中IL1β和IL6水平的影响。结果表明使用一定剂量的LPS处理24小时后，大鼠血清中IL1β以及IL6(图1)的水平上升，且炎症水平呈剂量依赖性增加。
/
图1.不同浓度LPS对大鼠血清炎症因子的影响
(*表示P<0.05, **表示P<0.01；下同)
3.2 LPS对大鼠LDH活性的影响
LDH的水平反应机体的损伤情况，本试验中分析了不同浓度LPS诱导组血清中LDH的活性。相对于0mg/kg的LPS剂量，1015mg/kg的LPS会引起大鼠血清中LDH的活性显著增强（P<0.01；图2）。
/
图2.不同浓度LPS对大鼠血清LDH活性的影响
3.3 LPS对大鼠血清MDA含量以及SOD活性的影响
不同剂量的LPS能够增强MDA的水平和降低血清中SOD的活性，MDA的水平在5mg/kg时相对于0mg/kg时相比呈现出显著差异（P<0.05；图3a）。SOD的活性和MDA水平在剂量为10mg/kg时相对于0mg/kg时相比呈现出现显著差异（P<0.05；图3b）。以上结果说明LPS能诱发大鼠的氧化应激。
/
图3a.不同浓度LPS对大鼠血清MDA含量的影响
/
图3b.不同浓度LPS对大鼠血清SOD活性的影响
4 讨论
在本试验中，研究了不同浓度LPS诱导下大鼠血液中的炎症因子和氧化指标的变化。结果表明，不同浓度的LPS的诱导下，各指标间发生了一下的变化：（1）正常大鼠血液中的IL1β和IL6的含量都发生了显著性的变化。（2）LPS可诱导大鼠血液中LDH活性显著增强。（3）LPS能够诱发大鼠的氧化应激，其表现为大鼠血液中MDA的水平显著增强，大鼠血清中的SOD活性显著减低。
细菌脂多糖（LPS）是革兰氏阴性细菌细胞的一种活跃的组成成分[1,3]，是与机体组织长期共生的微生物，机体在受到革兰氏阴性细菌的感染时，LPS作用于细胞膜受体，通过细胞内信号传递级联使基因表达发生变化，LPS介导内皮细胞、平滑肌细胞核成纤维细胞，上皮细胞等实质细胞以及单核巨噬细胞激活，诱导炎症前细胞因子（proinflammatory cytokines），趋化因子（chemokines），生长因子（growth factors）和其他多种因子如白细胞介素（interleukin IL）如IL1β、IL6等，肿瘤坏死因子(tumornecrosis；TNF),如TNFα等的合成和释放。LPS是革兰氏阴性细菌主要的致病成分，可激活几乎所有的真核细胞发生形态、代谢和基因表达变化，导致宿主细胞因子失控性表达，介导严重感染，多脏器损伤，败血症休克等疾病的发生发展。在本实验中，选取LPS作为免疫应激器。在体外进行的单核细胞/巨噬细胞的LPS处理，诱发像肿瘤坏死因子α（TNFα）和白细胞介素1α（IL1α），白细胞介素1β(IL1β)、白细胞介素6（IL6）等细胞因子的分泌。本实验中主要选取检测IL1β和IL6是免疫调节因子，通常有促进免疫的功能[7]。IL1β和IL6具有协同作用，都能诱导B细胞分化和产生抗体，并诱导T细胞活化增殖、分化，参与机体的免疫应答，是炎性反应的促发剂。在本试验结果中得到，LPS应激下，能IL1β和IL6的水平均升高，说明不同的浓度下的LPS能够刺激巨噬细胞释放促炎细胞因子，比如：IL1β和IL6。
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract: 2
Keywords： 3
引言 3
1 材料和方法 3
1.1动物 3
1.2动物处理和样品准备 3
1.3 指标测定 4
1.3.1IL1和IL6的测量 4
1.3.2 LDH活性测定 4
1.3.3 SOD和MDA的测量 4
2 统计分析 4
3结果 4
3.1 LPS对大鼠血清炎性细胞因子的影响 4
3.2 LPS对大鼠LDH活性的影响 4
3.3 LPS对大鼠血清MDA含量以及SOD活性的影响 4
4 讨论 5
致谢 7
参考文献 8
细菌脂多糖对大鼠血液炎症因子及氧化指标的影响
引言
炎症是一种对于组织损伤或者微生物入侵机体时，机体发生的局部，保护性的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
反应现象[2]。众多种类的细胞以及活性成分参与了这个过程。炎症初期，多种炎症因子经炎性细胞释放后，对损伤因子进行稀释、杀伤以及清除，同时，炎症因子也参与了机体受损部位的组织再生，促进伤口的修复和愈合。适当的炎症反应会帮助机体清除损伤，抵御外来感染，促进伤口愈合。脂多糖（LPS）是革兰氏阴性细菌细胞的一种活跃的组成成分[1,3]，是与机体组织长期共生的微生物，机体在受到革兰氏阴性细菌的感染时，LPS作用于细胞膜受体，通过细胞内信号传递级联使基因表达发生变化，LPS介导内皮细胞、平滑肌细胞核成纤维细胞，上皮细胞等实质细胞以及单核巨噬细胞激活，趋化因子，生长因子和其他多种因子如白细胞介素，肿瘤坏死因子等的合成和释放。LPS是革兰氏阴性细菌主要的致病成分，可激活几乎所有的真核细胞发生形态、代谢和基因表达变化，导致宿主细胞因子失控性表达，介导严重感染，多脏器损伤，败血症休克等疾病的发生发展[4,5,6]。然而，脂多糖作为一种应激源其可诱导大鼠的炎症因子产生，但其对机体氧化应激指标方面的报道较少。本研究就是通过脂多糖诱导大鼠炎症反应，评估脂多糖对大鼠血液中炎症因子及氧化指标的影响。
1材料和方法
动物
来自于青龙山实验室动物工厂的性成熟SD雌鼠7080天，体重250300g。大鼠饲养在单独的笼子里，提供自由饮食，1212h明暗周期，温度控制在2325℃。
1.2动物处理和样品准备
大鼠被随机分为四组，如下所示：
对照组（n=5）；LPS组（0、3、10和15毫克/千克体重，腹腔注射，n=5/剂量；在LPS处理24小时后，将大鼠用戊巴比妥钠麻醉（4mg/kg,iv），然后使用断颈法让老鼠安乐死。采集血液常温离心，3000g持续30分钟后，提取血清，将血清保存在80℃冰箱中，以备后续试验。
1.3 指标测量
1.3.1 IL1β和IL6的测量
使用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒（R&D，中国上海），测定血清中IL1β及IL6水平，结果用pg/ml表示。
1.3.2 LDH活性测定
使用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定血浆中的LDH水平（中国南京建成生物工程有限公司），使用严格按照说明进行，结果以U/L表示。
1.3.3 SOD和MDA的测量
血清中总超氧化物歧化酶（TSOD）的活性测定利用黄嘌呤氧化酶法测定，利用分光光度计在550nm条件下测定样品的吸光率，结果以U/ml表示。丙二醛的测定，利用在吸光度为532nm的硫代巴比土酸（TBA）法，结论的单位表示为nmol/ml。试验过程严格按照说明书进行，SOD和MDA测定试剂盒购自中国南京建成生物工程研究所。
2 统计分析
所有的结果表示为平均值±SE，统计分析使用方差分析，结果具有统计显著性，p<0.05。
3 结果
3.1 LPS对大鼠血清炎性细胞因子的影响
本实验通过ELISA方法分析了不同剂量的LPS（015mg/kg BW）对大鼠血液中IL1β和IL6水平的影响。结果表明使用一定剂量的LPS处理24小时后，大鼠血清中IL1β以及IL6(图1)的水平上升，且炎症水平呈剂量依赖性增加。
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图1.不同浓度LPS对大鼠血清炎症因子的影响
(*表示P<0.05, **表示P<0.01；下同)
3.2 LPS对大鼠LDH活性的影响
LDH的水平反应机体的损伤情况，本试验中分析了不同浓度LPS诱导组血清中LDH的活性。相对于0mg/kg的LPS剂量，1015mg/kg的LPS会引起大鼠血清中LDH的活性显著增强（P<0.01；图2）。
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图2.不同浓度LPS对大鼠血清LDH活性的影响
3.3 LPS对大鼠血清MDA含量以及SOD活性的影响
不同剂量的LPS能够增强MDA的水平和降低血清中SOD的活性，MDA的水平在5mg/kg时相对于0mg/kg时相比呈现出显著差异（P<0.05；图3a）。SOD的活性和MDA水平在剂量为10mg/kg时相对于0mg/kg时相比呈现出现显著差异（P<0.05；图3b）。以上结果说明LPS能诱发大鼠的氧化应激。
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图3a.不同浓度LPS对大鼠血清MDA含量的影响
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图3b.不同浓度LPS对大鼠血清SOD活性的影响
4 讨论
在本试验中，研究了不同浓度LPS诱导下大鼠血液中的炎症因子和氧化指标的变化。结果表明，不同浓度的LPS的诱导下，各指标间发生了一下的变化：（1）正常大鼠血液中的IL1β和IL6的含量都发生了显著性的变化。（2）LPS可诱导大鼠血液中LDH活性显著增强。（3）LPS能够诱发大鼠的氧化应激，其表现为大鼠血液中MDA的水平显著增强，大鼠血清中的SOD活性显著减低。
细菌脂多糖（LPS）是革兰氏阴性细菌细胞的一种活跃的组成成分[1,3]，是与机体组织长期共生的微生物，机体在受到革兰氏阴性细菌的感染时，LPS作用于细胞膜受体，通过细胞内信号传递级联使基因表达发生变化，LPS介导内皮细胞、平滑肌细胞核成纤维细胞，上皮细胞等实质细胞以及单核巨噬细胞激活，诱导炎症前细胞因子（proinflammatory cytokines），趋化因子（chemokines），生长因子（growth factors）和其他多种因子如白细胞介素（interleukin IL）如IL1β、IL6等，肿瘤坏死因子(tumornecrosis；TNF),如TNFα等的合成和释放。LPS是革兰氏阴性细菌主要的致病成分，可激活几乎所有的真核细胞发生形态、代谢和基因表达变化，导致宿主细胞因子失控性表达，介导严重感染，多脏器损伤，败血症休克等疾病的发生发展。在本实验中，选取LPS作为免疫应激器。在体外进行的单核细胞/巨噬细胞的LPS处理，诱发像肿瘤坏死因子α（TNFα）和白细胞介素1α（IL1α），白细胞介素1β(IL1β)、白细胞介素6（IL6）等细胞因子的分泌。本实验中主要选取检测IL1β和IL6是免疫调节因子，通常有促进免疫的功能[7]。IL1β和IL6具有协同作用，都能诱导B细胞分化和产生抗体，并诱导T细胞活化增殖、分化，参与机体的免疫应答，是炎性反应的促发剂。在本试验结果中得到，LPS应激下，能IL1β和IL6的水平均升高，说明不同的浓度下的LPS能够刺激巨噬细胞释放促炎细胞因子，比如：IL1β和IL6。
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