饲粮中添加海藻粉对湖羊肝脏脂肪酸组成及其代谢相关基因表达的影响
本试验旨在研究饲粮中添加5%海藻粉对湖羊肝脏脂肪酸组成的影响，并测定脂肪酸代谢相关基因在肝脏组织中的表达变化，进而探讨海藻粉对肝脏脂代谢的影响机制。选择40只体重为（18.35±1.39）kg的湖羊公羔，随机分为4组，每组10只。设计4种日粮水平饲喂湖羊公羔，分别为对照组1（C1），对照组1+5%海藻粉（C1+Algae），对照组2（C2），对照组2+5%海藻粉（C2+Algae）。试验期70 d，结束后集中屠宰并采集肝脏组织样，利用气相色谱仪对肝脏脂肪酸进行检测，并通过荧光定量PCR仪测定肝脏脂代谢相关基因（PPARα、PPARγ、SREBP1、ELOVL2、ELOVL5、FADS5、CPT1a、FASN、SCD、L-FABP）的表达水平。结果表明，在饲粮中添加5%的海藻粉可显著提高湖羊肝脏中n-3不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids，PUFAs）的含量（P<0.05）；显著降低单不饱和脂肪酸（Monounsaturated fatty acid，MUFAs）、饱和脂肪酸（Saturated fatty acid，SFAs）的含量及n-6/n-3 PUFA的比值（P<0.05），并显著提高了PUFA/SFA（P/S）的比值（P<0.05）；此外，饲粮中添加5%的海藻粉显著增加了湖羊肝脏组织中PPARα、ELOVL2、ELOVL5、FADS5、CPT1a、FASN和L-FABP的表达水平（P<0.05），而显著降低了SCD和SREBP1基因的表达水平（P<0.05）。综上所述，饲料中添加5%海藻粉可提高肝脏中n-3 PUFAs的含量，且对脂代谢相关基因的表达水平产生一定影响，为生产富含PUFAs的高品质羊肉提供理论依据。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 错误！未定义书签。
Key words 1
引言 2
1材料与方法 2
1.1试验材料 2
1.1.1试验动物 2
1.1.2试验试剂 2
1.1.3试验主要仪器及设备 3
1.2试验设计 3
1.3湖羊肝脏脂肪酸的提取与测定 3
1.4总RNA的提取及完整性检测 3
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
1.4.1RNA的提取 4
1.4.2 RNA浓度及纯度的检测 4
1.4.3反转录 4
1.4.4普通PCR 4
1.4.5 PCR引物的设计与合成 5
1.5实时荧光定量PCR检测 5
1.6统计与分析 6
2结果 6
2.1海藻粉对湖羊肝脏脂肪酸组成的影响 6
2.2海藻粉对湖羊肝脏脂代谢相关基因表达水平的影响 7
3讨论 9
3.1海藻粉对湖羊肝脏脂肪酸组成的影响 9
3.2海藻粉对湖羊肝脏脂代谢相关基因表达水平的影响 9
致谢 11
参考文献： 12
饲粮中添加海藻粉对湖羊肝脏脂肪酸组成
及其代谢相关基因表达的影响
动物科学 王婷
引言
近年来，随着人们生活水平的不断提高及自身保健意识的增强，羊肉因含脂肪、胆固醇少，蛋白质、钙、钾和维生素B1等丰富，深受消费者的喜爱。湖羊由于其优良的生长、繁殖等经济性状而受到人们极大的关注，是为数不多的、能适应南方高温高湿环境的肉用绵羊品种之一，且湖羊肉质鲜嫩细美，耐粗饲适应性强，已逐渐成为我国许多地区发展肉羊产业的首选母本绵羊品种。但与发达国家相比，我国的高端羊肉供应少，羊肉的品质仍有很大的改进空间，只有不断丰富市场中高端羊肉产品的数量和种类，才能真正满足当前消费者对健康、绿色及保健羊肉产品的需求。因此，通过一定的营养调控方法研究和开发高附加值的高品质羊肉，对于我国未来养羊业的可持续发展具有十分重要的意义[1]。
膳食中脂肪酸的组成与人类健康密切相关，过量摄入饱和脂肪酸（Saturated fatty acid, SFAs）可增加人类血液脂蛋白中胆固醇的含量，有损人体健康，致使人体易患各种心血管疾病，甚至是癌症。而多不饱和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acids, PUFAs）则有降低这种风险的作用[2]，特别是n3系列PUFAs，对于人类和哺乳动物的正常生长发育和健康极其重要，不仅可以起到软化血管降低心脏病发生的作用，而且还对一些肿瘤细胞的生长具有抑制作用。通过营养调控手段来提高畜禽产品中PUFAs含量对提高其品质、丰富市场具有重大意义。海藻粉中富含n3PUFAs，在鸡、奶牛、猪和鱼虾等饲料中添加不同比例海藻粉可提亮肉色，提高生长速度，增加肌间脂肪沉积和饲料转化率，但在肉羊育肥的研究还鲜有报道。
因此，本试验以湖羊为试验对象，在其饲粮中添加5%海藻粉，探索其对湖羊肝脏脂肪酸组成及脂肪酸代谢相关基因表达的影响，为畜牧生产中进行合理营养调控，提高羊肉的食用价值具有重要的意义。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试验动物
选取40只三月龄、体重接近（18.35±1.39 kg）、健康状况良好的湖羊公羔。
图1 试验动物
Fig1.Experimental animal
1.1.2试验试剂及耗材
Trizol 试剂（Invitrogen公司）
普通PCR试剂盒（2×Taq PCR Master Mix，南京博尔迪）
反转录试剂盒 （TaKaRa; No. RR047A）
荧光定量试剂盒（TaKaRa; No.DRR820A）
C19:0内标（No.74208,SigmaAldrich Inc., St.Louis, MO, USA）
琼脂糖（南京寿德试剂公司）
八联管：ABI公司
1.1.3试验主要仪器及设备
荧光定量PCR仪器（StepOne plus，ABI公司）
PCR扩增仪（美国Biorad公司）
生物分光光度计（Thermo，NANO DROP ND1000）
气相色谱仪（HewlettPackard, Avondale, PA, USA）
1.2试验设计
根据体重将试验动物随机分成4个组，对照组1（C1），对照组1+5%海藻粉（C1+Alage），对照组2（C2），对照组2+5%（C2+Alage）海藻粉。试验对照组饲粮参照国内肉羊饲养标准（NY/T8162004）日增重150 g/d的营养需要配制。整个试验周期为70 d，其中预饲期为10 d，正饲期60 d。试验前清洗并消毒羊舍，并对试验羊统一驱虫、健胃，每天饲喂两次（07:00、16:00左右进行），自由采食，自由饮水。试验结束后每组随机挑选5只进行屠宰，采集肝脏组织，80℃保存备用。
图2. 试验设计示意图
Figure 2.Schematic representation of the experiment design
1.3湖羊肝脏脂肪酸的提取与测定
取湖羊肝脏组织，绞碎后进行真空冷冻干燥，然后将其快速磨碎，装入密封袋保存备用。分别准确称取冻干且磨碎后的肝脏组织样品（约0.2 g），加入到带有螺口的25 mL消化管底部，加4 mL氯乙酰甲醇（甲醇与氯乙酰的体积比为10：1）和5 mL含有1 mg/mL C19:0内标的正己烷溶液，震荡1 min，放到80℃水浴2 h，室温冷却后，加7%（w/v）的K2CO3 4 mL，漩涡混匀，静止10 min，1500 r/min离心5 min，取上清液，气相色谱仪分析样品中脂肪酸组成。气相色谱分析条件：毛细管柱是CPSil88（100 m×0.25 mm×0.25 μm），进样后温度在180℃保持45 min，然后以10℃/min的速度升至215℃，保持17 min，进样口温度与火焰离子探测器的温度都为250℃，40:1分流比，以高纯氦气做为载气[3]。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 错误！未定义书签。
Key words 1
引言 2
1材料与方法 2
1.1试验材料 2
1.1.1试验动物 2
1.1.2试验试剂 2
1.1.3试验主要仪器及设备 3
1.2试验设计 3
1.3湖羊肝脏脂肪酸的提取与测定 3
1.4总RNA的提取及完整性检测 3
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
1.4.1RNA的提取 4
1.4.2 RNA浓度及纯度的检测 4
1.4.3反转录 4
1.4.4普通PCR 4
1.4.5 PCR引物的设计与合成 5
1.5实时荧光定量PCR检测 5
1.6统计与分析 6
2结果 6
2.1海藻粉对湖羊肝脏脂肪酸组成的影响 6
2.2海藻粉对湖羊肝脏脂代谢相关基因表达水平的影响 7
3讨论 9
3.1海藻粉对湖羊肝脏脂肪酸组成的影响 9
3.2海藻粉对湖羊肝脏脂代谢相关基因表达水平的影响 9
致谢 11
参考文献： 12
饲粮中添加海藻粉对湖羊肝脏脂肪酸组成
及其代谢相关基因表达的影响
动物科学 王婷
引言
近年来，随着人们生活水平的不断提高及自身保健意识的增强，羊肉因含脂肪、胆固醇少，蛋白质、钙、钾和维生素B1等丰富，深受消费者的喜爱。湖羊由于其优良的生长、繁殖等经济性状而受到人们极大的关注，是为数不多的、能适应南方高温高湿环境的肉用绵羊品种之一，且湖羊肉质鲜嫩细美，耐粗饲适应性强，已逐渐成为我国许多地区发展肉羊产业的首选母本绵羊品种。但与发达国家相比，我国的高端羊肉供应少，羊肉的品质仍有很大的改进空间，只有不断丰富市场中高端羊肉产品的数量和种类，才能真正满足当前消费者对健康、绿色及保健羊肉产品的需求。因此，通过一定的营养调控方法研究和开发高附加值的高品质羊肉，对于我国未来养羊业的可持续发展具有十分重要的意义[1]。
膳食中脂肪酸的组成与人类健康密切相关，过量摄入饱和脂肪酸（Saturated fatty acid, SFAs）可增加人类血液脂蛋白中胆固醇的含量，有损人体健康，致使人体易患各种心血管疾病，甚至是癌症。而多不饱和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acids, PUFAs）则有降低这种风险的作用[2]，特别是n3系列PUFAs，对于人类和哺乳动物的正常生长发育和健康极其重要，不仅可以起到软化血管降低心脏病发生的作用，而且还对一些肿瘤细胞的生长具有抑制作用。通过营养调控手段来提高畜禽产品中PUFAs含量对提高其品质、丰富市场具有重大意义。海藻粉中富含n3PUFAs，在鸡、奶牛、猪和鱼虾等饲料中添加不同比例海藻粉可提亮肉色，提高生长速度，增加肌间脂肪沉积和饲料转化率，但在肉羊育肥的研究还鲜有报道。
因此，本试验以湖羊为试验对象，在其饲粮中添加5%海藻粉，探索其对湖羊肝脏脂肪酸组成及脂肪酸代谢相关基因表达的影响，为畜牧生产中进行合理营养调控，提高羊肉的食用价值具有重要的意义。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试验动物
选取40只三月龄、体重接近（18.35±1.39 kg）、健康状况良好的湖羊公羔。
图1 试验动物
Fig1.Experimental animal
1.1.2试验试剂及耗材
Trizol 试剂（Invitrogen公司）
普通PCR试剂盒（2×Taq PCR Master Mix，南京博尔迪）
反转录试剂盒 （TaKaRa; No. RR047A）
荧光定量试剂盒（TaKaRa; No.DRR820A）
C19:0内标（No.74208,SigmaAldrich Inc., St.Louis, MO, USA）
琼脂糖（南京寿德试剂公司）
八联管：ABI公司
1.1.3试验主要仪器及设备
荧光定量PCR仪器（StepOne plus，ABI公司）
PCR扩增仪（美国Biorad公司）
生物分光光度计（Thermo，NANO DROP ND1000）
气相色谱仪（HewlettPackard, Avondale, PA, USA）
1.2试验设计
根据体重将试验动物随机分成4个组，对照组1（C1），对照组1+5%海藻粉（C1+Alage），对照组2（C2），对照组2+5%（C2+Alage）海藻粉。试验对照组饲粮参照国内肉羊饲养标准（NY/T8162004）日增重150 g/d的营养需要配制。整个试验周期为70 d，其中预饲期为10 d，正饲期60 d。试验前清洗并消毒羊舍，并对试验羊统一驱虫、健胃，每天饲喂两次（07:00、16:00左右进行），自由采食，自由饮水。试验结束后每组随机挑选5只进行屠宰，采集肝脏组织，80℃保存备用。
图2. 试验设计示意图
Figure 2.Schematic representation of the experiment design
1.3湖羊肝脏脂肪酸的提取与测定
取湖羊肝脏组织，绞碎后进行真空冷冻干燥，然后将其快速磨碎，装入密封袋保存备用。分别准确称取冻干且磨碎后的肝脏组织样品（约0.2 g），加入到带有螺口的25 mL消化管底部，加4 mL氯乙酰甲醇（甲醇与氯乙酰的体积比为10：1）和5 mL含有1 mg/mL C19:0内标的正己烷溶液，震荡1 min，放到80℃水浴2 h，室温冷却后，加7%（w/v）的K2CO3 4 mL，漩涡混匀，静止10 min，1500 r/min离心5 min，取上清液，气相色谱仪分析样品中脂肪酸组成。气相色谱分析条件：毛细管柱是CPSil88（100 m×0.25 mm×0.25 μm），进样后温度在180℃保持45 min，然后以10℃/min的速度升至215℃，保持17 min，进样口温度与火焰离子探测器的温度都为250℃，40:1分流比，以高纯氦气做为载气[3]。
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