束缚应激对雄性小鼠生殖的影响
应激反应是生物学名词，是指生物在受到刺激后马上做出反应以便适应该环境，是一种典型的非特异性反应。而束缚应激与人类身心性疾病的过程有相似性，因而逐渐成为应激研究中的热点之一。近年的研究使人们对束缚应激有了更为深入的了解。但是束缚应激对机体的影响及其作用机理仍有诸多不清楚的地方。本课题为研究束缚应激对雄性动物生殖的影响,将10只40日龄健康ICR雄性小鼠,随机分成2个小组对照组（Control）和束缚应激组（RS）。2周后用4%水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠然后处死，采取睾丸，经固定、包埋制成石蜡切片，切片分别进行H&E染色和免疫组化，用于睾丸组织学观察。结果表明，在实验观察中小鼠的体重、进食量、饮水量、睾丸的重量、睾酮浓度精子密度均显著低于对照组（P<0.05）；而睾丸组织学观察显示，RS组的睾丸间质细胞水肿、基底膜破裂、间隙增加。由此推测，通过束缚应激明显抑制精子的发生，束缚应激对雄性的繁殖有不利的影响。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验动物及试验设计2
1.1.1实验动物2
1.1.2试验设计2
1.2 测量体重、采食量、饮水量、性腺指数、精子密度和睾酮浓度 3
1.3组织学分析 3
1.3.1 组织包埋和石蜡切片3
1.3.2苏木精伊红染色和生精细胞3
1.4数据处理和照片4
2结果与分析4
2.1进食量和饮水量 4
2.2体重、睾丸重量、精子密度、性腺指数和睾酮浓度 4
2.3 H&E染色观察组织细胞 5
3讨论6
致谢7
参考文献7
束缚应激对雄性小鼠生殖的影响
引言
应激是生物体在各种内外环境因素及社会、心理因素刺激时所出现的全身性非特异性适应反应，又称为应激反应。应激是当今世界不可避免的现象，会导致许多生理和心理的变化[1]。研究报道应激对动物繁殖有不利影响，应激条件下，如感染、剧烈运动、营养不良诱发各种生殖疾病如不孕，形成有缺陷的卵母细 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
胞致使受胎率降低。应激的结果可能会影响生殖过程中的性行为、排卵、胚胎着床的表达、神经内分泌系统的控制[2,3]
应激一词来源于英文stress，原意为“压力”、“紧张”、“应力”等。这一概念最早是由Hans Selye博士提出的,他提出：在身体受到侵袭（与侵袭的因素无关）所表现出的非特异性的临床症状，称为泛适应综合征（GAS）。随后Wolf提出了完整的应激概念。20世纪70年代，Mason提出心理应激学说，用以解释一些心理疾病的产生机制[4]。应激可以由不同的生理、心理及综合因素引起。在研究中经常使用的是应激混合型，例如：束缚应激是一种生理和心理的应激，限制运动，将动物从其群体中分离出来，生理和神经内分泌的改变，适应压力和快速恢复[5]。在生物体受到负荷时，引起下丘脑 垂体前叶肾上腺皮质系（HPA）为主轴的与刺激的特异性无关的一系列个体防卫性非特异性反应。下丘脑、垂体和肾上腺髓质是由下丘脑肾上腺髓质系统分泌肾上腺素的。
引起非特异性反应的刺激因素，除能引起机体发生特异性反应，还能引起机体发生非特异性的GAS，即应激反应。并且，将能够诱发为受到非特异性反应的刺激因素称为应激源（stressor),应激因素或应激因子，亦即干扰了机体稳衡性的刺激。可分为生理性应激刺激和精神性应激刺激。环境中那些仅能引起特异性反应，不能引起非特异性反应的刺激不能称为应激因子，而是特异性刺激[6]。
睾丸的主要功能包括分泌雄激素、精子发生和精子储存等，精子的储存离不开支持细胞的发育和增殖，下面主要简述睾丸与精子发生以及雄激素分泌之间的关系。
精子发生过程指睾丸细胞内，由B型精原细胞减数分裂形成精子的过程。J. J. Buzzard使用免疫组化的相关方法检测小鼠睾丸细胞内TR基因的表达，发现在生精调节过程和粗线期的初级精母细胞中都有TRα1的表达 [7]。支持细胞的增殖和分化，功能的发挥都受到促卵泡激素(FSH)的调节，有研究指出，在家禽的下丘脑垂体甲状腺轴中的促甲状腺激素可结合FSH的转录启动子，调控FSH基因的表达，TH的效应也加强了支持细胞的增殖和功能[8]，这可能显示了在哺乳动物中，TH也可能对FSH的合成和分泌有潜在的效应。在雄激素和FSH的介导下，TH和精子发生的关系也随着研究的进行得到解释，TH介导精原细胞的减数分裂，又同时促进支持细胞的增殖，由精原细胞产生的成熟精子，保存在有支持细胞生长的曲精小管内。
雄激素由睾丸支持细胞分泌，其中涉及类固醇的代谢和生成过程，而体内TH的水平会影响促黄体素（LH）的分泌，促黄体素又能促进支持细胞的类固醇生成过程，同时也就激发了支持细胞分泌睾酮等雄激素的功能。因此，从胆固醇到一系列类固醇的转化过程中的任何变化都能引起睾丸分泌睾酮能力的变化。
应激反应是动物机体在长期进化过程中形成的一种生理反应。FightFlight Syndrome（FFS）作为应激的结果是被Walter Cannon第一次提出的[9]。束缚应激会影响动物的睾丸功能，使其生精小管收到损伤，精子密度也会随之受到影响。精子密度又称精子浓度（sperm concentration）,是指每毫升精液中所含的精子数量，一般精液量多的动物每毫升所含精子数少；精液量少的动物每毫升所含精子数多。精子密度也因动物年龄、种类的差异而有变化。应激能明显抑制睾丸生精功能，降低睾丸大小和重量，抑制精子发生的各个阶段和成熟程度。以往的研究表明，束缚应激会降低血清睾酮的浓度[10]。目前常用的束缚应激造访模式是将动物置于圆柱形筒内，在筒身上有相对足够的呼吸孔，以便动物呼吸，筒底部有一孔，足以使动物尾部伸出进行自由活动。这种方式既将动物束缚于固定物中，达到束缚刺激的作用，也满足动物拥有一定的自由空间。此外，根据束缚刺激的时长，束缚应激可分为急性刺激和慢性刺激[11,12]。
近年的研究使人们对束缚应激有了更为深入的了解。但是束缚应激对机体的影响及其作用机理仍有诸多不清楚的地方[13]。本研究旨在探究束缚应激对雄性小鼠生殖的影响，从而为后续束缚应激影响小鼠生殖研究提供事实理论依据。
1材料与方法
1.1 实验动物及试验设计
1.1.1实验动物
试验共准备10只40日龄健康雄性ICR小鼠（购自南京青龙山实验动物研究所）。
1.1.2试验设计
在实验开始前至少7天的时间将实验环境保持以12h光照，12h黑暗为周期，湿度在60–70%和室温在2223℃，为小鼠饲喂标准平衡的老鼠饲料和饮用水提供自由采食。使小鼠变得适应环境。7天后将10只小鼠分成对照组和实验组两组，实验组小鼠限制在50ml的锥形离心管中每天4h连续15天（图1），两组都同时不供应食物和水。15天后将所有试验小鼠用4%水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠然后处死，收集睾丸和附睾并称重，睾丸一部分存储在?80℃，而另一部分固定在4%多聚甲醛用作组织学分析。附睾用于精子密度检测。
图1 束缚应激
1.2 测量体重、采食量、饮水量、性腺指数、精子密度和睾酮浓度
每日测定两组的体重、采食量及饮水量。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验动物及试验设计2
1.1.1实验动物2
1.1.2试验设计2
1.2 测量体重、采食量、饮水量、性腺指数、精子密度和睾酮浓度 3
1.3组织学分析 3
1.3.1 组织包埋和石蜡切片3
1.3.2苏木精伊红染色和生精细胞3
1.4数据处理和照片4
2结果与分析4
2.1进食量和饮水量 4
2.2体重、睾丸重量、精子密度、性腺指数和睾酮浓度 4
2.3 H&E染色观察组织细胞 5
3讨论6
致谢7
参考文献7
束缚应激对雄性小鼠生殖的影响
引言
应激是生物体在各种内外环境因素及社会、心理因素刺激时所出现的全身性非特异性适应反应，又称为应激反应。应激是当今世界不可避免的现象，会导致许多生理和心理的变化[1]。研究报道应激对动物繁殖有不利影响，应激条件下，如感染、剧烈运动、营养不良诱发各种生殖疾病如不孕，形成有缺陷的卵母细 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
胞致使受胎率降低。应激的结果可能会影响生殖过程中的性行为、排卵、胚胎着床的表达、神经内分泌系统的控制[2,3]
应激一词来源于英文stress，原意为“压力”、“紧张”、“应力”等。这一概念最早是由Hans Selye博士提出的,他提出：在身体受到侵袭（与侵袭的因素无关）所表现出的非特异性的临床症状，称为泛适应综合征（GAS）。随后Wolf提出了完整的应激概念。20世纪70年代，Mason提出心理应激学说，用以解释一些心理疾病的产生机制[4]。应激可以由不同的生理、心理及综合因素引起。在研究中经常使用的是应激混合型，例如：束缚应激是一种生理和心理的应激，限制运动，将动物从其群体中分离出来，生理和神经内分泌的改变，适应压力和快速恢复[5]。在生物体受到负荷时，引起下丘脑 垂体前叶肾上腺皮质系（HPA）为主轴的与刺激的特异性无关的一系列个体防卫性非特异性反应。下丘脑、垂体和肾上腺髓质是由下丘脑肾上腺髓质系统分泌肾上腺素的。
引起非特异性反应的刺激因素，除能引起机体发生特异性反应，还能引起机体发生非特异性的GAS，即应激反应。并且，将能够诱发为受到非特异性反应的刺激因素称为应激源（stressor),应激因素或应激因子，亦即干扰了机体稳衡性的刺激。可分为生理性应激刺激和精神性应激刺激。环境中那些仅能引起特异性反应，不能引起非特异性反应的刺激不能称为应激因子，而是特异性刺激[6]。
睾丸的主要功能包括分泌雄激素、精子发生和精子储存等，精子的储存离不开支持细胞的发育和增殖，下面主要简述睾丸与精子发生以及雄激素分泌之间的关系。
精子发生过程指睾丸细胞内，由B型精原细胞减数分裂形成精子的过程。J. J. Buzzard使用免疫组化的相关方法检测小鼠睾丸细胞内TR基因的表达，发现在生精调节过程和粗线期的初级精母细胞中都有TRα1的表达 [7]。支持细胞的增殖和分化，功能的发挥都受到促卵泡激素(FSH)的调节，有研究指出，在家禽的下丘脑垂体甲状腺轴中的促甲状腺激素可结合FSH的转录启动子，调控FSH基因的表达，TH的效应也加强了支持细胞的增殖和功能[8]，这可能显示了在哺乳动物中，TH也可能对FSH的合成和分泌有潜在的效应。在雄激素和FSH的介导下，TH和精子发生的关系也随着研究的进行得到解释，TH介导精原细胞的减数分裂，又同时促进支持细胞的增殖，由精原细胞产生的成熟精子，保存在有支持细胞生长的曲精小管内。
雄激素由睾丸支持细胞分泌，其中涉及类固醇的代谢和生成过程，而体内TH的水平会影响促黄体素（LH）的分泌，促黄体素又能促进支持细胞的类固醇生成过程，同时也就激发了支持细胞分泌睾酮等雄激素的功能。因此，从胆固醇到一系列类固醇的转化过程中的任何变化都能引起睾丸分泌睾酮能力的变化。
应激反应是动物机体在长期进化过程中形成的一种生理反应。FightFlight Syndrome（FFS）作为应激的结果是被Walter Cannon第一次提出的[9]。束缚应激会影响动物的睾丸功能，使其生精小管收到损伤，精子密度也会随之受到影响。精子密度又称精子浓度（sperm concentration）,是指每毫升精液中所含的精子数量，一般精液量多的动物每毫升所含精子数少；精液量少的动物每毫升所含精子数多。精子密度也因动物年龄、种类的差异而有变化。应激能明显抑制睾丸生精功能，降低睾丸大小和重量，抑制精子发生的各个阶段和成熟程度。以往的研究表明，束缚应激会降低血清睾酮的浓度[10]。目前常用的束缚应激造访模式是将动物置于圆柱形筒内，在筒身上有相对足够的呼吸孔，以便动物呼吸，筒底部有一孔，足以使动物尾部伸出进行自由活动。这种方式既将动物束缚于固定物中，达到束缚刺激的作用，也满足动物拥有一定的自由空间。此外，根据束缚刺激的时长，束缚应激可分为急性刺激和慢性刺激[11,12]。
近年的研究使人们对束缚应激有了更为深入的了解。但是束缚应激对机体的影响及其作用机理仍有诸多不清楚的地方[13]。本研究旨在探究束缚应激对雄性小鼠生殖的影响，从而为后续束缚应激影响小鼠生殖研究提供事实理论依据。
1材料与方法
1.1 实验动物及试验设计
1.1.1实验动物
试验共准备10只40日龄健康雄性ICR小鼠（购自南京青龙山实验动物研究所）。
1.1.2试验设计
在实验开始前至少7天的时间将实验环境保持以12h光照，12h黑暗为周期，湿度在60–70%和室温在2223℃，为小鼠饲喂标准平衡的老鼠饲料和饮用水提供自由采食。使小鼠变得适应环境。7天后将10只小鼠分成对照组和实验组两组，实验组小鼠限制在50ml的锥形离心管中每天4h连续15天（图1），两组都同时不供应食物和水。15天后将所有试验小鼠用4%水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠然后处死，收集睾丸和附睾并称重，睾丸一部分存储在?80℃，而另一部分固定在4%多聚甲醛用作组织学分析。附睾用于精子密度检测。
图1 束缚应激
1.2 测量体重、采食量、饮水量、性腺指数、精子密度和睾酮浓度
每日测定两组的体重、采食量及饮水量。
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