束缚应激对小鼠卵巢卵泡发育的影响
为了探究束缚应激对小鼠卵巢卵泡的影响，我们选用10只3周龄健康普通ICR小鼠，随机分成两组，分别为（1）应激组每天管中束缚4小时；（2）对照组空白对照。两周后处死，采取卵巢，经固定、包埋制成石蜡切片，切片分别进行H&E染色，用于卵泡计数、黄体计数。结果表明，应激组闭锁卵泡数显著高于对照组（p<0.05）；应激组原始卵泡所占比例、黄体所占比例显著低于对照组（p<0.05）；应激组次级卵泡所占比例、有腔卵泡所占比例显著高于对照组（p<0.05），但有初级泡所占比例没有显著差异。由此推测，束缚应激影响小鼠各级卵泡数的发育。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验动物及试验设计2
1.1.1实验动物2
1.1.2试验设计2
1.2组织包埋和石蜡切片3
1.3苏木精伊红染色和卵泡计数3
1.4小鼠卵巢各级卵泡的特征3
1.5数据处理和照片4
2结果与分析4
2.1 H&E染色结果、各级卵泡形态及卵泡数4
2.2各级卵泡及黄体所占比例情况5
3 讨论6
3.1束缚应激对卵巢卵泡发育的影响 6
致谢6
参考文献6
束缚应激对小鼠卵巢卵泡发育的影响
引言
应激是在这个现代世界的必然现象。紧张的情况下可能会导致许多生理和心理的变化[1]。应激会对机体产生多种影响，可以包括对神经系统、内分泌系统、免疫系统三个方面[2]，从而影响机体。现代人生活节奏快，生活压力大，从而形成了各个方面的应激，2004年，中国科学院心理研究所对社会转型期不同职业群体心理健康的研究显示，近70%的受调查者感觉到压力的困扰[3]。现代社会各种女性不育症屡见不鲜，她们的生殖系统对应激的敏感度很高[3]。
应激是指机体对刺激所产生的非特异性应答反应的总和。应激的发展一般可分为三个阶段，即惊恐反应或动员阶段、抵御或适应阶段和衰竭阶段。慢性应激会使下丘脑垂体肾上腺（HPA）轴持续处于激活状态，而HPA轴的过度激 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
活对下丘脑垂体性腺（HPG）轴起抑制作用[3]。HPA轴的持续激活使促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）和抗利尿激素分泌量的持续增加[4]。CRH量的增加通过HPA轴逐级放大，从而促进糖皮质激素的增多[5]。应激可在HPG轴三个水平对生殖系统产生影响：一是抑制下丘脑GnRH的分泌，二是影响垂体FSH、RH的分泌，三是改变促性腺激素对性腺类固醇激素分泌的促进作用[6]。
卵泡作为女性生殖的主体，由一个卵细胞及周围的颗粒细胞和卵泡膜细胞组成。它即受着HPG轴的影响，又受着垂体内多种细胞自分泌/旁分泌、肽类细胞因子的调节[7]。原始卵泡在激素作用下开始发育，要么经过卵泡的募集（recruitment）、选择（selection）、优势化（dominance）成为成熟卵泡，要么在发育的各个阶段中发生卵泡闭锁。根据卵泡发育各个阶段的特征，卵泡分为原始卵泡(Primordial follicle)、初级卵泡(Primary follicle)、次级卵泡 (Secondary follicle)、三级卵泡(tertiary follicle)和成熟卵泡(Mature follicle)。根据卵泡是否成腔，也可以分为腔前卵泡(preantral follicle)和有腔卵泡(antral follicle)，其中腔前卵泡包括原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡这三个阶段；有腔卵泡包括三级卵泡和成熟卵泡这两个阶段[9]。原始卵泡卵母细胞均发育停滞在第一次成熟分裂前期，其聚集在卵巢的皮质部，称为原始卵泡库。它是由卵母细胞和一层扁平的颗粒细胞前体细胞包裹而成，绝大多数原始卵泡在储存或发育过程中退化。初级卵泡的颗粒细胞由原来的扁平装变为立方体或柱状。在初级卵泡发育过程中，FSH受体开始在颗粒细胞中表达。次级卵泡周围的颗粒细胞变为圆柱状，由原来的一层变为两层或两层以上，这些颗粒细胞与卵母细胞膜紧紧相连，随着卵泡的生长，颗粒细胞与卵泡膜之间形成透明带。卵泡膜细胞开始出现，在LH作用下，卵泡膜细胞分泌雄激素，雄激素在颗粒细胞作用下转化为雌激素。三级卵泡的颗粒细胞之间出现间隙，随着间隙的增多，逐渐形成卵泡腔，卵母细胞则被挤到一边，被颗粒细胞包裹，形成半岛状突起，称为卵丘。其余的颗粒细胞形成颗粒细胞壁。在颗粒细胞壁外围形成内外两层的卵泡膜。成熟卵泡就是快要排卵的卵泡。当卵泡发生闭锁时，颗粒细胞和卵母细胞的染色体发生浓缩，核膜发生起皱，颗粒细胞离散悬浮于卵泡液中，卵丘细胞发生分解，透明带玻璃化增厚。成熟卵泡破裂排卵后开始黄体化形成黄体，是由颗粒细胞和膜细胞增殖分化形成一个富含血管的内分泌细胞团。
卵泡的发育受多种因素的影响，FSH调控卵细胞生长、发育，LH协同FSH调控卵泡的发育，如雌激素的产生是LH协同FSH的结果。LH同时促进卵泡的最后成熟与排卵，但总体上FSH调节起主要作用[8]。类固醇激素(雌激素、孕激素和雄激素)能直接调节卵泡发育，已经证明，雌激素是卵泡获得对FSH反应的必需物质[8]，也就是说雌激素可以调节颗粒细胞的功能。颗粒细胞合成可能受雄激素调节，而且高水平雄激素是卵泡退变和闭锁的信号 [8]。在卵巢中存在一类亲水性的非类固醇物质，包括抑制素(inLhibin，INH)、活化素(activin，ACT)和卵泡抑素(follistatin，FS)，它们通过内分泌机制调节FSH的分泌，并且通过旁分泌和自分泌机制在卵巢局部微调节卵泡的发育、闭锁及黄体化等过程[9]。胰岛素样生长因子(IGF)对卵泡发育、成熟、卵泡有促进作用，并参与优势卵泡的选择[9]。生长因子对卵泡的生长发育有调节作用[8]。表皮生长因子（EGF）可刺激卵巢颗粒细胞DNA合成，促进其分裂和分化，提高卵母细胞受精率及受精后胚胎的发育力[8，9]。白细胞介素1（IL1）具有抑制卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的作用[9]。胰岛素能激活原始卵泡生长发育[10]。卵泡闭锁的实质是细胞凋亡[10]，其调控受多种因素影响，和卵泡发育的影响因子相似，在次不再叙述。
本研究旨在探究束缚应激对小鼠卵泡发育的影响，比较研究在束缚因素影响下小鼠卵泡发育的不同之处，探究束缚应激是否对小鼠卵巢卵泡不同阶段产生影响，从而为后续束缚应激影响小鼠卵泡发育的机制研究提供理论依据。
1材料与方法
1.1实验动物及试验设计
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验动物及试验设计2
1.1.1实验动物2
1.1.2试验设计2
1.2组织包埋和石蜡切片3
1.3苏木精伊红染色和卵泡计数3
1.4小鼠卵巢各级卵泡的特征3
1.5数据处理和照片4
2结果与分析4
2.1 H&E染色结果、各级卵泡形态及卵泡数4
2.2各级卵泡及黄体所占比例情况5
3 讨论6
3.1束缚应激对卵巢卵泡发育的影响 6
致谢6
参考文献6
束缚应激对小鼠卵巢卵泡发育的影响
引言
应激是在这个现代世界的必然现象。紧张的情况下可能会导致许多生理和心理的变化[1]。应激会对机体产生多种影响，可以包括对神经系统、内分泌系统、免疫系统三个方面[2]，从而影响机体。现代人生活节奏快，生活压力大，从而形成了各个方面的应激，2004年，中国科学院心理研究所对社会转型期不同职业群体心理健康的研究显示，近70%的受调查者感觉到压力的困扰[3]。现代社会各种女性不育症屡见不鲜，她们的生殖系统对应激的敏感度很高[3]。
应激是指机体对刺激所产生的非特异性应答反应的总和。应激的发展一般可分为三个阶段，即惊恐反应或动员阶段、抵御或适应阶段和衰竭阶段。慢性应激会使下丘脑垂体肾上腺（HPA）轴持续处于激活状态，而HPA轴的过度激 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
活对下丘脑垂体性腺（HPG）轴起抑制作用[3]。HPA轴的持续激活使促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）和抗利尿激素分泌量的持续增加[4]。CRH量的增加通过HPA轴逐级放大，从而促进糖皮质激素的增多[5]。应激可在HPG轴三个水平对生殖系统产生影响：一是抑制下丘脑GnRH的分泌，二是影响垂体FSH、RH的分泌，三是改变促性腺激素对性腺类固醇激素分泌的促进作用[6]。
卵泡作为女性生殖的主体，由一个卵细胞及周围的颗粒细胞和卵泡膜细胞组成。它即受着HPG轴的影响，又受着垂体内多种细胞自分泌/旁分泌、肽类细胞因子的调节[7]。原始卵泡在激素作用下开始发育，要么经过卵泡的募集（recruitment）、选择（selection）、优势化（dominance）成为成熟卵泡，要么在发育的各个阶段中发生卵泡闭锁。根据卵泡发育各个阶段的特征，卵泡分为原始卵泡(Primordial follicle)、初级卵泡(Primary follicle)、次级卵泡 (Secondary follicle)、三级卵泡(tertiary follicle)和成熟卵泡(Mature follicle)。根据卵泡是否成腔，也可以分为腔前卵泡(preantral follicle)和有腔卵泡(antral follicle)，其中腔前卵泡包括原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡这三个阶段；有腔卵泡包括三级卵泡和成熟卵泡这两个阶段[9]。原始卵泡卵母细胞均发育停滞在第一次成熟分裂前期，其聚集在卵巢的皮质部，称为原始卵泡库。它是由卵母细胞和一层扁平的颗粒细胞前体细胞包裹而成，绝大多数原始卵泡在储存或发育过程中退化。初级卵泡的颗粒细胞由原来的扁平装变为立方体或柱状。在初级卵泡发育过程中，FSH受体开始在颗粒细胞中表达。次级卵泡周围的颗粒细胞变为圆柱状，由原来的一层变为两层或两层以上，这些颗粒细胞与卵母细胞膜紧紧相连，随着卵泡的生长，颗粒细胞与卵泡膜之间形成透明带。卵泡膜细胞开始出现，在LH作用下，卵泡膜细胞分泌雄激素，雄激素在颗粒细胞作用下转化为雌激素。三级卵泡的颗粒细胞之间出现间隙，随着间隙的增多，逐渐形成卵泡腔，卵母细胞则被挤到一边，被颗粒细胞包裹，形成半岛状突起，称为卵丘。其余的颗粒细胞形成颗粒细胞壁。在颗粒细胞壁外围形成内外两层的卵泡膜。成熟卵泡就是快要排卵的卵泡。当卵泡发生闭锁时，颗粒细胞和卵母细胞的染色体发生浓缩，核膜发生起皱，颗粒细胞离散悬浮于卵泡液中，卵丘细胞发生分解，透明带玻璃化增厚。成熟卵泡破裂排卵后开始黄体化形成黄体，是由颗粒细胞和膜细胞增殖分化形成一个富含血管的内分泌细胞团。
卵泡的发育受多种因素的影响，FSH调控卵细胞生长、发育，LH协同FSH调控卵泡的发育，如雌激素的产生是LH协同FSH的结果。LH同时促进卵泡的最后成熟与排卵，但总体上FSH调节起主要作用[8]。类固醇激素(雌激素、孕激素和雄激素)能直接调节卵泡发育，已经证明，雌激素是卵泡获得对FSH反应的必需物质[8]，也就是说雌激素可以调节颗粒细胞的功能。颗粒细胞合成可能受雄激素调节，而且高水平雄激素是卵泡退变和闭锁的信号 [8]。在卵巢中存在一类亲水性的非类固醇物质，包括抑制素(inLhibin，INH)、活化素(activin，ACT)和卵泡抑素(follistatin，FS)，它们通过内分泌机制调节FSH的分泌，并且通过旁分泌和自分泌机制在卵巢局部微调节卵泡的发育、闭锁及黄体化等过程[9]。胰岛素样生长因子(IGF)对卵泡发育、成熟、卵泡有促进作用，并参与优势卵泡的选择[9]。生长因子对卵泡的生长发育有调节作用[8]。表皮生长因子（EGF）可刺激卵巢颗粒细胞DNA合成，促进其分裂和分化，提高卵母细胞受精率及受精后胚胎的发育力[8，9]。白细胞介素1（IL1）具有抑制卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的作用[9]。胰岛素能激活原始卵泡生长发育[10]。卵泡闭锁的实质是细胞凋亡[10]，其调控受多种因素影响，和卵泡发育的影响因子相似，在次不再叙述。
本研究旨在探究束缚应激对小鼠卵泡发育的影响，比较研究在束缚因素影响下小鼠卵泡发育的不同之处，探究束缚应激是否对小鼠卵巢卵泡不同阶段产生影响，从而为后续束缚应激影响小鼠卵泡发育的机制研究提供理论依据。
1材料与方法
1.1实验动物及试验设计
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