二花脸母猪发情周期不同阶段外周血生殖激素水平研究
二花脸猪以其卓越的产仔性能闻名于世，研究二花脸猪发情周期各种生殖激素的变化规律，对深入了解其高产特性并在育种和生产中充分利用这一优势性状具有重要意义。本试验旨在探究发情周期同一时间点不同生殖激素与二花脸母猪产仔性能的关联性。根据育种值挑选极端高产二花脸母猪5头和极端低产母猪6头作为试验样本，用酶联免疫吸附法分别测定其在发情周期不同时间点外周血浆中孕酮、雌激素、促卵泡素、促黄体素、抑制素A及抑制素B的含量。试验结果表明，发情周期第18 d高产组二花脸母猪血浆中雌激素水平显著高于低产组；而试验过程中同一时间其他激素的水平均无显著差异。由此可推断，二花脸猪发情前期较高的雌激素水平可能与其高产性能有关。据此可从发情周期激素水平方面初步解析二花脸群体内引起高低产仔数差异的生理原因。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 试验动物2
1.2 血样采集2
1.3 激素测定2
1.4 统计分析3
2 结果与分析3
2.1 血浆各激素水平变化3
2.1.1 孕酮3
2.1.2 雌二醇3
2.1.3 促卵泡素3
2.1.4 促黄体素3
2.1.5 抑制素A、抑制素B3
2.2 总结3
3 讨论5
3.1 二花脸母猪外周血浆中生殖激素的变化规律5
3.2 雌激素水平与产仔性能的关系5
3.3 试验局限性以及尚待研究的问题5
致谢6
参考文献6
表1 高低产二花脸母猪发情不同时期血浆孕酮、雌二醇、促卵泡素、促黄体素、抑制素A、抑制素B浓度的变化4
二花脸母猪发情周期不同阶段外周血生殖激素水平研究
引言
二花脸猪是目前世界已知最高产的猪种，平均窝产仔数为15.69头，史上最高单胎产仔数高达42头，是珍贵的猪遗传资源。除高产仔数以外，二花脸还具有性成熟早、发情征候明显、排卵数多、受胎率高、繁殖利用年限长等一系列繁殖性能特点。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
包括二花脸猪在内的中国太湖流域地方猪种因其高繁殖性能已受到国际遗传育种界的普遍重视。多年以来，国内外学者通过对太湖流域地方猪种的研究及与其他猪种的比较，发现雌激素、孕酮、促性腺激素、抑制素等与母猪卵泡发育、排卵和妊娠密切相关的生殖激素的分泌规律，与太湖流域地方猪种的高繁殖力密切相关。
据曾国庆等的测定，二花脸母猪血浆中LH、17β雌二醇和孕酮含量的变化，形成了二花脸猪卵泡成熟率高、排卵数多、胚胎着床率高的特性[1]。赵明珍等报道，梅山母猪高繁殖力主要与其发情周期血清中较高的E2水平和黄体期较高的P4水平有关[2]。Foxcroft（1992）报道，梅山猪促性腺激素合成和释放与外国猪存在较大的品种差异[3]。综合国内外众多研究者的发现，二花脸、梅山猪、枫泾猪等地方猪种在发情周期较高的雌激素、FSH、LH水平可能是其排卵率较高的直接原因[4,5,6]。
抑制素主要通过垂体反馈作用影响母猪的排卵数和产仔数。朱化彬等（1995）的研究结果表明，高产枫泾猪卵泡液和卵巢组织中抑制素的相对含量在发情周期和妊娠期都极显著地低于长白猪[7]。王根林等人研究发现，二花脸等太湖流域地方猪种发情期低抑制素和高雌激素水平的协调作用可以减弱对FSH的负反馈抑制,促进垂体促性腺激素的分泌，从而促使二花脸猪卵泡的发育成熟和排卵[8]。
太湖流域地方猪种的胚胎存活率较高与妊娠过程中其雌激素和孕酮的变化规律有密切关系。焦淑贤等以及Hunter等的研究证实，枫泾猪、梅山猪等猪种发情周期中雌二醇和孕酮浓度的变化为妊娠期胚胎着床提供了良好的条件，使得早期胚胎的死亡率大大降低[6,9]。梅山猪黄体早期孕激素含量的提高与胚胎存活间存在一定的正相关关系[10]。
探究二花脸猪发情周期各种生殖激素的分泌特性，对深入认识其高产特性，以及在育种和生产中充分利用二花脸猪的这一优势性状并进一步提升二花脸种内繁殖性能具有重要意义。
本实验以二花脸猪为研究对象，采集其外周血，通过测定高低产二花脸母猪在发情周期不同时间点外周血浆生殖激素的水平，探究二花脸母猪发情周期内血浆生殖激素变化与其繁殖性能的关系。
1 材料与方法
1．1 试验动物
本试验选用来自江苏苏州常熟国家级二花脸保种场的二花脸母猪。通过对保种场内94头经产母猪往年繁殖记录的收集，利用DMU软件计算总产仔数的估计育种值，根据育种值排序从中挑选极端高产母猪5头、极端低产母猪6头作为试验样本。
1．2 血样采集
以选用的二花脸母猪开始发情为第0 d，在第0 d9时和15时分别进行一次耳静脉采血，第1 d、第2 d、第10 d、第18 d、第19 d、第20 d上午9时分别采集一次。用加有抗凝剂（EDTANa2）的采血管采集母猪前腔静脉的静脉血5 mL，采集的血样静置30 min后，用离心机以3500 r/min的转速离心15 min，取上清液为血浆。将分离出的血浆在20℃的温度条件下保存待测。
1．3 激素测定
利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒检测血浆中雌二醇（E2）、孕酮（P）、促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、抑制素A(INHA)、抑制素B(INHB)的含量。
ELISA是酶免疫测定技术的一种，用酶标记抗体或抗抗体进行的抗原抗体反应，以底物被酶催化后的显色深浅来反应待检样品中抗原或抗体的含量。其原理是酶促反应的高效性与抗原抗体反应的特异性相结合。本试验使用双抗夹心法。具体步骤如下：
（1）标准品的稀释与加样：分别设空白孔和待测样品孔，空白对照孔内不加样品及酶标试剂。在酶标包被板上待测样品孔中先加入40μL样品稀释液，然后再加10μL待测样品，5倍稀释样品。加样时将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
（2）温育：用封板膜封板后，置于37℃条件下温育30分钟。
（3）洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）稀释。小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加稀释后的洗涤液200μL，静置30秒后弃去，重复5次后拍干。
（4）加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外。然后重复温育及洗涤过程。
（5）显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，在37℃避光条件下显色15分钟。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 试验动物2
1.2 血样采集2
1.3 激素测定2
1.4 统计分析3
2 结果与分析3
2.1 血浆各激素水平变化3
2.1.1 孕酮3
2.1.2 雌二醇3
2.1.3 促卵泡素3
2.1.4 促黄体素3
2.1.5 抑制素A、抑制素B3
2.2 总结3
3 讨论5
3.1 二花脸母猪外周血浆中生殖激素的变化规律5
3.2 雌激素水平与产仔性能的关系5
3.3 试验局限性以及尚待研究的问题5
致谢6
参考文献6
表1 高低产二花脸母猪发情不同时期血浆孕酮、雌二醇、促卵泡素、促黄体素、抑制素A、抑制素B浓度的变化4
二花脸母猪发情周期不同阶段外周血生殖激素水平研究
引言
二花脸猪是目前世界已知最高产的猪种，平均窝产仔数为15.69头，史上最高单胎产仔数高达42头，是珍贵的猪遗传资源。除高产仔数以外，二花脸还具有性成熟早、发情征候明显、排卵数多、受胎率高、繁殖利用年限长等一系列繁殖性能特点。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
包括二花脸猪在内的中国太湖流域地方猪种因其高繁殖性能已受到国际遗传育种界的普遍重视。多年以来，国内外学者通过对太湖流域地方猪种的研究及与其他猪种的比较，发现雌激素、孕酮、促性腺激素、抑制素等与母猪卵泡发育、排卵和妊娠密切相关的生殖激素的分泌规律，与太湖流域地方猪种的高繁殖力密切相关。
据曾国庆等的测定，二花脸母猪血浆中LH、17β雌二醇和孕酮含量的变化，形成了二花脸猪卵泡成熟率高、排卵数多、胚胎着床率高的特性[1]。赵明珍等报道，梅山母猪高繁殖力主要与其发情周期血清中较高的E2水平和黄体期较高的P4水平有关[2]。Foxcroft（1992）报道，梅山猪促性腺激素合成和释放与外国猪存在较大的品种差异[3]。综合国内外众多研究者的发现，二花脸、梅山猪、枫泾猪等地方猪种在发情周期较高的雌激素、FSH、LH水平可能是其排卵率较高的直接原因[4,5,6]。
抑制素主要通过垂体反馈作用影响母猪的排卵数和产仔数。朱化彬等（1995）的研究结果表明，高产枫泾猪卵泡液和卵巢组织中抑制素的相对含量在发情周期和妊娠期都极显著地低于长白猪[7]。王根林等人研究发现，二花脸等太湖流域地方猪种发情期低抑制素和高雌激素水平的协调作用可以减弱对FSH的负反馈抑制,促进垂体促性腺激素的分泌，从而促使二花脸猪卵泡的发育成熟和排卵[8]。
太湖流域地方猪种的胚胎存活率较高与妊娠过程中其雌激素和孕酮的变化规律有密切关系。焦淑贤等以及Hunter等的研究证实，枫泾猪、梅山猪等猪种发情周期中雌二醇和孕酮浓度的变化为妊娠期胚胎着床提供了良好的条件，使得早期胚胎的死亡率大大降低[6,9]。梅山猪黄体早期孕激素含量的提高与胚胎存活间存在一定的正相关关系[10]。
探究二花脸猪发情周期各种生殖激素的分泌特性，对深入认识其高产特性，以及在育种和生产中充分利用二花脸猪的这一优势性状并进一步提升二花脸种内繁殖性能具有重要意义。
本实验以二花脸猪为研究对象，采集其外周血，通过测定高低产二花脸母猪在发情周期不同时间点外周血浆生殖激素的水平，探究二花脸母猪发情周期内血浆生殖激素变化与其繁殖性能的关系。
1 材料与方法
1．1 试验动物
本试验选用来自江苏苏州常熟国家级二花脸保种场的二花脸母猪。通过对保种场内94头经产母猪往年繁殖记录的收集，利用DMU软件计算总产仔数的估计育种值，根据育种值排序从中挑选极端高产母猪5头、极端低产母猪6头作为试验样本。
1．2 血样采集
以选用的二花脸母猪开始发情为第0 d，在第0 d9时和15时分别进行一次耳静脉采血，第1 d、第2 d、第10 d、第18 d、第19 d、第20 d上午9时分别采集一次。用加有抗凝剂（EDTANa2）的采血管采集母猪前腔静脉的静脉血5 mL，采集的血样静置30 min后，用离心机以3500 r/min的转速离心15 min，取上清液为血浆。将分离出的血浆在20℃的温度条件下保存待测。
1．3 激素测定
利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒检测血浆中雌二醇（E2）、孕酮（P）、促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、抑制素A(INHA)、抑制素B(INHB)的含量。
ELISA是酶免疫测定技术的一种，用酶标记抗体或抗抗体进行的抗原抗体反应，以底物被酶催化后的显色深浅来反应待检样品中抗原或抗体的含量。其原理是酶促反应的高效性与抗原抗体反应的特异性相结合。本试验使用双抗夹心法。具体步骤如下：
（1）标准品的稀释与加样：分别设空白孔和待测样品孔，空白对照孔内不加样品及酶标试剂。在酶标包被板上待测样品孔中先加入40μL样品稀释液，然后再加10μL待测样品，5倍稀释样品。加样时将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
（2）温育：用封板膜封板后，置于37℃条件下温育30分钟。
（3）洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）稀释。小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加稀释后的洗涤液200μL，静置30秒后弃去，重复5次后拍干。
（4）加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外。然后重复温育及洗涤过程。
（5）显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，在37℃避光条件下显色15分钟。
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