犬脾脏b超检查及在犬吉氏巴贝斯虫感染后脾脏大小监测中的应用
为了找出一个合理可行的B 超测量犬脾脏大小的方法并用于犬吉氏巴贝斯虫感染后脾脏大小的监测，本研究随机选择了六只健康比格犬，对其T、R、P、血象、脾脏初始的形态结构和大小、身体的感染状态进行了检查和统计，确立一个较为可行的B超测量脾脏大小方法。随后对这6 只健康犬进行人工接种犬吉氏巴贝斯虫。感染2-3 天后通过血涂片和PCR 检测其是否感染成功，成功后通过B 超监测犬感染后一个月内的脾脏形态、结构、大小的变化，得到了脾脏变大，感染后期会出现部分坏死萎缩的结果，并掌握了一个B 超监测脾脏大小变化的方法。该结果可以为兽医临床脾脏病例的B 超检查提供技术支持，并对犬吉氏巴贝斯虫的感染的判断提供帮助。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验材料 2
1.1.1实验动物2
1.1.2主要试剂2
1.1.3主要仪器设备2
1.2实验方法3
1.2.1试验前犬的健康检测3
1.2.2健康试验犬的脾脏大小测量及探查方法的确定3
1.2.3动物模型的建立3
1.2.4病犬的脾脏大小监测3
2 结果与分析3
2.1犬脾脏B超的检测方法的确立4
2.2试验犬人工感染巴贝斯虫4
2.3试验犬脾脏大小和形态结构的监测4
3讨论 5
致谢6
参考文献6
犬脾脏B超检查及在犬吉氏巴贝斯虫感染后脾脏大小监测中应用
引言
引言
不论兽医还是临床医生，起初都认为脾脏对于机体的生命活动可有可无，相关病症大都采取了脾脏切除的方式予以治疗，以改善机体状态。随着科学的进步，人类对生命的探索更加的深入，人们终于认识到脾脏的存在是有它的道理的。脾脏是机体最大的免疫器官，占全身淋巴组织总量的25%，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，是机体细胞免疫和体液免疫的中心，可以反映机体的健康状态。此外脾脏有滤血和储血的功能。脾内的大量巨噬细胞可以清除衰老的血细胞（比如红细胞）、抗原和异物。侵入机体血 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
内的抗原，可在脾内激发免疫反应[1]。此外，脾脏还具有调节内分泌的功能。
脾脏的医学地位提高，就要求我们需要有足够的技术和手段去监测这个器官。同时，近年来犬吉氏巴贝斯虫成高发趋势，环境的优化同时也给蜱虫和巴贝斯虫的滋生提供了条件，尤其是南京地区更是犬吉氏巴贝斯虫感染的高发区。犬巴贝斯虫病是小动物临床常见的经蜱传播的血液寄生原虫病，感染后小动物死亡率较高。这种疾病是由巴贝斯虫侵入犬的红细胞并使红细胞裂解引起发热性溶血性贫血，临床上巴贝斯虫病的特点就是发热、黏膜苍白、食欲不振、精神沉郁、贫血、黄疸、淋巴结肿大和脾肿大（严重病例会出现，有人对47只程度不一的患病犬进行统计，脾脏肿大的病例只占10.6%）[2]，严重的可因临床感染而造成广泛的器官衰竭和死亡[3]。巴贝斯虫会导致脾脏和肝脏的吞噬细胞清除被感染的红细胞[4]。而脾脏常对血液中的抗原和红细胞破坏有反应，导致单核巨噬细胞和淋巴细胞增生，故常在慢性感染和溶血性疾病时，发生增生性脾肿大[5]。所以监测脾脏的变化对于该病的诊断和病情的分析也很重要。
B超作为一种方便快捷无损伤的影像检查方式，被广泛应用到小动物腹腔器官的检测中，由于B超可以清晰的显示出脾脏的全部轮廓以及实质组织的变化，所以成为了检查脾脏的首选影像学方式[6]。本研究希望可以掌握一种较为可行的B超监测脾脏大小、形态结构的方法而对脾脏疾病乃至全身疾病的推断提供的帮助，同时应用于犬吉氏巴贝斯虫感染的诊断与病情监测中。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验动物
购买健康比格犬6只，4只母犬，2只公犬，体重在810 kg之间，无感染巴贝斯虫病史。买入后经血涂片镜检和PCRRFLP 检测犬巴贝斯虫阴性，检测方法参考Yao 等[7]所述的方法。对试验犬进行16号编号，分笼饲养，饲喂普通商品狗粮，饲养于大学实验动物中心。
1.1.2 主要试剂
胞裂解缓冲液（10 mmol/L TrisHCl（pH 8.0），0.1 mol/L EDTA（pH 8.0），0.5% （m/V）SDS，10 mol/L醋酸铵，70%乙醇，50×TAE电泳缓冲液（242g/L Tris，57.1ml/L冰醋酸，100 mL 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）），蛋白酶K（10mg/mL）等由实验室自行配制。2×Taq PCR MasterMix、ddH2O、DNA Marker I等购自天根生化科技（北京）有限公司。吉姆萨染色试剂盒等购自南京建成生物科技有限公司；TM100 型医用超声耦合剂，购自天津西苑寺制作所。
1.1.3 主要仪器设备
低温冷冻离心机5417R，购自eppendoff；Veriti? 96 PCR 仪购自美国 Applied Biosystems）；电泳槽；配胶模具及与其对应的梳子，电泳仪电源（型号：DYY7C型）购自北京市六一仪器厂；凝胶成像系统（美国 BioRad）；兽用B型超声仪（百胜，mylab400VET），探头型号CA1123凸阵探头。
1.2 试验方法
1.2.1 试验前犬的健康检测
试验前检测6只比格犬是否处于健康状态，分别测量6只犬的T、R、P、精神状态、体况，并触诊脾脏，采集实验犬的血液进行血涂片镜检（吉姆萨染色），做血常规分析，参考Yao等人的文献[7]并按照PCR 试剂盒的说明书进行PCR 检测实验犬巴贝斯虫感染是否为阴性。
1.2.2 健康试验犬的脾脏大小测量及探查方法的确定
B超测量试验犬人工接种之前的正常脾脏大小。脾脏位于左季肋区后外方肋弓深处，是质地柔软的网状内皮细胞器官。脾可分为光滑隆凸的膈面、和凹陷的脏面两面。脏面前上方与胃底相连，后下方与左肾和左肾上腺相连。神经、血管自脏面中央的脾门处出入脾脏。脾脏除与胰腺连接处和脾门处外，均被腹膜包裹[4]。
检查脾脏形态结构和解剖位置的方法：打开B超机，调节参数为小动物腹腔探查的参数，探头选用CA1123。犬仰卧保定，腹部剃毛，涂布耦合剂，在左腹侧平行于左侧肋弓下方一至两指宽处，探头轻触体壁，沿肋骨方向前后左右移动探头，找到脾脏后使探头横切脾脏并沿其走向向前滑动探头，找到脾头和胃，然后向后滑动探头直到探查至脾尾结束，观测整个脾脏的解剖位置和形态结构。
确定检查脾脏大小的方法：利用多普勒血流探测的辅助找到脾门，然后调节探头使其横切脾脏，将其定位至显示器中央，冻结图像；完成脾门探查后继续向后移动探头找到脾尾并定位至显示器中央，转动探头使之纵切脾脏，冻结图像。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验材料 2
1.1.1实验动物2
1.1.2主要试剂2
1.1.3主要仪器设备2
1.2实验方法3
1.2.1试验前犬的健康检测3
1.2.2健康试验犬的脾脏大小测量及探查方法的确定3
1.2.3动物模型的建立3
1.2.4病犬的脾脏大小监测3
2 结果与分析3
2.1犬脾脏B超的检测方法的确立4
2.2试验犬人工感染巴贝斯虫4
2.3试验犬脾脏大小和形态结构的监测4
3讨论 5
致谢6
参考文献6
犬脾脏B超检查及在犬吉氏巴贝斯虫感染后脾脏大小监测中应用
引言
引言
不论兽医还是临床医生，起初都认为脾脏对于机体的生命活动可有可无，相关病症大都采取了脾脏切除的方式予以治疗，以改善机体状态。随着科学的进步，人类对生命的探索更加的深入，人们终于认识到脾脏的存在是有它的道理的。脾脏是机体最大的免疫器官，占全身淋巴组织总量的25%，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，是机体细胞免疫和体液免疫的中心，可以反映机体的健康状态。此外脾脏有滤血和储血的功能。脾内的大量巨噬细胞可以清除衰老的血细胞（比如红细胞）、抗原和异物。侵入机体血 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
内的抗原，可在脾内激发免疫反应[1]。此外，脾脏还具有调节内分泌的功能。
脾脏的医学地位提高，就要求我们需要有足够的技术和手段去监测这个器官。同时，近年来犬吉氏巴贝斯虫成高发趋势，环境的优化同时也给蜱虫和巴贝斯虫的滋生提供了条件，尤其是南京地区更是犬吉氏巴贝斯虫感染的高发区。犬巴贝斯虫病是小动物临床常见的经蜱传播的血液寄生原虫病，感染后小动物死亡率较高。这种疾病是由巴贝斯虫侵入犬的红细胞并使红细胞裂解引起发热性溶血性贫血，临床上巴贝斯虫病的特点就是发热、黏膜苍白、食欲不振、精神沉郁、贫血、黄疸、淋巴结肿大和脾肿大（严重病例会出现，有人对47只程度不一的患病犬进行统计，脾脏肿大的病例只占10.6%）[2]，严重的可因临床感染而造成广泛的器官衰竭和死亡[3]。巴贝斯虫会导致脾脏和肝脏的吞噬细胞清除被感染的红细胞[4]。而脾脏常对血液中的抗原和红细胞破坏有反应，导致单核巨噬细胞和淋巴细胞增生，故常在慢性感染和溶血性疾病时，发生增生性脾肿大[5]。所以监测脾脏的变化对于该病的诊断和病情的分析也很重要。
B超作为一种方便快捷无损伤的影像检查方式，被广泛应用到小动物腹腔器官的检测中，由于B超可以清晰的显示出脾脏的全部轮廓以及实质组织的变化，所以成为了检查脾脏的首选影像学方式[6]。本研究希望可以掌握一种较为可行的B超监测脾脏大小、形态结构的方法而对脾脏疾病乃至全身疾病的推断提供的帮助，同时应用于犬吉氏巴贝斯虫感染的诊断与病情监测中。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验动物
购买健康比格犬6只，4只母犬，2只公犬，体重在810 kg之间，无感染巴贝斯虫病史。买入后经血涂片镜检和PCRRFLP 检测犬巴贝斯虫阴性，检测方法参考Yao 等[7]所述的方法。对试验犬进行16号编号，分笼饲养，饲喂普通商品狗粮，饲养于大学实验动物中心。
1.1.2 主要试剂
胞裂解缓冲液（10 mmol/L TrisHCl（pH 8.0），0.1 mol/L EDTA（pH 8.0），0.5% （m/V）SDS，10 mol/L醋酸铵，70%乙醇，50×TAE电泳缓冲液（242g/L Tris，57.1ml/L冰醋酸，100 mL 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）），蛋白酶K（10mg/mL）等由实验室自行配制。2×Taq PCR MasterMix、ddH2O、DNA Marker I等购自天根生化科技（北京）有限公司。吉姆萨染色试剂盒等购自南京建成生物科技有限公司；TM100 型医用超声耦合剂，购自天津西苑寺制作所。
1.1.3 主要仪器设备
低温冷冻离心机5417R，购自eppendoff；Veriti? 96 PCR 仪购自美国 Applied Biosystems）；电泳槽；配胶模具及与其对应的梳子，电泳仪电源（型号：DYY7C型）购自北京市六一仪器厂；凝胶成像系统（美国 BioRad）；兽用B型超声仪（百胜，mylab400VET），探头型号CA1123凸阵探头。
1.2 试验方法
1.2.1 试验前犬的健康检测
试验前检测6只比格犬是否处于健康状态，分别测量6只犬的T、R、P、精神状态、体况，并触诊脾脏，采集实验犬的血液进行血涂片镜检（吉姆萨染色），做血常规分析，参考Yao等人的文献[7]并按照PCR 试剂盒的说明书进行PCR 检测实验犬巴贝斯虫感染是否为阴性。
1.2.2 健康试验犬的脾脏大小测量及探查方法的确定
B超测量试验犬人工接种之前的正常脾脏大小。脾脏位于左季肋区后外方肋弓深处，是质地柔软的网状内皮细胞器官。脾可分为光滑隆凸的膈面、和凹陷的脏面两面。脏面前上方与胃底相连，后下方与左肾和左肾上腺相连。神经、血管自脏面中央的脾门处出入脾脏。脾脏除与胰腺连接处和脾门处外，均被腹膜包裹[4]。
检查脾脏形态结构和解剖位置的方法：打开B超机，调节参数为小动物腹腔探查的参数，探头选用CA1123。犬仰卧保定，腹部剃毛，涂布耦合剂，在左腹侧平行于左侧肋弓下方一至两指宽处，探头轻触体壁，沿肋骨方向前后左右移动探头，找到脾脏后使探头横切脾脏并沿其走向向前滑动探头，找到脾头和胃，然后向后滑动探头直到探查至脾尾结束，观测整个脾脏的解剖位置和形态结构。
确定检查脾脏大小的方法：利用多普勒血流探测的辅助找到脾门，然后调节探头使其横切脾脏，将其定位至显示器中央，冻结图像；完成脾门探查后继续向后移动探头找到脾尾并定位至显示器中央，转动探头使之纵切脾脏，冻结图像。
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