猪肉制品中莱克多巴胺检测方法的研究
本文采用了液相色谱串联质谱法和酶联免疫吸附法测定猪肉制品中的莱克多巴胺含量。使用液相色谱串联法将样品用β-葡萄糖醛甙酶溶液酶解，再用乙酸铵缓冲溶液冲洗，经过滤和离心后，取上清液用MCX固相萃取柱净化，使用液相色谱串联质谱仪进行测定，最后再使用外标峰面积法定量。结果显示线性方程为Y=4.9638*X-0.1438，线性相关系数为0.99977238，回收率在86~106%之间。使用酶联免疫吸附法对莱克多巴胺的残留进行特异性、检测限以及回收率的精密度测试。将样本加入Cl-甲醇混合液离心，再加入复溶工作液，进行检测，结果显示采用酶联免疫吸附法检测的样品特异性良好，检测限为（0.28±0.3）μg/kg，回收率在81.9%~87.1%之间。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料与试剂 2
1．1．1 仪器法检测莱克多巴胺所用材料与试剂2
1．1．1 生物法检测莱克多巴胺所用材料与试剂2
1.2 仪器与设备 2
1.3 标准物质 2
1.4 实验方法 2
1.4.1仪器法测莱克多巴胺的方法2
1.4.2 生物法测莱克多巴胺的方法3
1.5 计算方法 4
1.5.1 仪器法检测莱克多巴胺结果计算方法4
1.5.2 生物法检测莱克多巴胺结果计算方法4
2 结果与分析4
2.1 仪器分析法的结果4
2.1.1 方法的线性范围4
2.1.2 试验结果6
2.2生物分析法结果6
2.2.1 绘制标准曲线7
2.2.2 特异性与检测限的测定7
2.2.3 回收率与RSD%7
3 讨论7
3.1 为什么选用GCMS和ELISA7
3.2 前处理方法的注意点8
3.3 两种方法的结果11
3.4 实地检验过程中的问题11
3.5 检验样品的取样问题11
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
致谢12
参考文献12
图1 莱克多巴胺标准曲线5
图2 莱克多巴胺质谱图5
图3 基质匹配加标莱克多巴胺的样品LCMS多反应监测质量色谱图6
图4 莱克多巴胺酶联免疫反应试剂盒的标准曲线7
表1 梯度3
表2 MRM条件和保留时间3
表3 回收率及RSD%6
表4 回收率及RSD%7
猪肉制品中莱克多巴胺检测方法的研究
引言
目录
然而，近几年我国进出口岸仍然屡次在进口猪肉制品中检测出RCT的存在。对于猪肉制品，在RCT监控过程中，检测是最重要的一个环节。自我国多部门将莱克多巴胺列为违禁药物以来，我国已建立了一系列不同的检测标准，如国标、农业部标准、商务部标准等十几个标准，方法主要有气相色谱质谱联合分析法（gas chromatography combined with mass spectrometry, GC/MS）((((，液相色谱质谱联合分析法（liquid chromatography combined with mass spectrometry, LC/MS）((((，高效液相法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)((((，酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbentassay, ELISA）((((((((等。本文根据前期对比和分析，选择了较为常用，灵敏度较高的两种分析方法，LC/MS和ELISA来检测样品中的莱克多巴胺。由于猪肉制品是我国重要的畜产品，每年都有庞大的进口量。故文本采用以上两种常用方法对猪肉制品中的含有的莱克多巴胺进行检测。
1 材料与方法
1．1 材料与试剂
1．1．1 仪器法检测莱克多巴胺所用材料的与试剂 甲醇（HPLC级，>99.9%，Fisher Scientific）；乙醇钠(分析纯AR，国药化学试剂有限公司)；氢氧化钠（分析纯AR，国药化学试剂有限公司）；高氯酸（优级纯GR，国药化学试剂有限公司）；乙腈（HPLC级，Fisher Scientific）；β葡萄糖醛甙酶（Fisher Scientific）；丙乙醇（HPLC级，Fisher Scientific）；乙酸乙酯（HPLC级，Fisher Scientific）。市购猪肉罐头。
1．1．2 生物法检测莱克多巴胺所用的材料与试剂 去离子水；氯化钠（分析纯AR，国药化学试剂有限公司）；甲醇（分析纯AR，国药化学试剂有限公司）；浓盐酸（分析纯AR，国药化学试剂有限公司）；氢氧化钠（分析纯AR，国药化学试剂有限公司）。市购猪肉罐头。
1．2 仪器与设备
由Agilent 公司生产的液质联用仪1200/6410；涡旋振荡器；高速离心机；电热恒温震荡水槽；pH计；固相萃取装置；MCM固相萃取柱：60mg/3mL；氮吹仪；由美国Therom公司生产的高速冷冻离心机（Multifuge X3R）；微孔板酶标仪（450nm/630nm,Multiskan）；由上海康华生化仪器制造厂生产的涡旋混合器（WH866）；由重庆四达实验仪器有限公司生产的生化培养箱（SHH250L）；移液器；均质器。
1. 3 标准物质
莱克多巴胺、内标莱克多巴胺D45，Chem service。标准溶液*6瓶（1ml/瓶）0,0.05,0.15,0.45,1.35,4.05ng/ml。高浓度标准品：（1ml/瓶）100ng/ml。
1. 4 实验方法
1．4．1 仪器法检测莱克多巴胺的方法 配制试剂：试剂的配制是参考GB/T222862008的标准来完成的。称取氢氧化钠40.0g用水溶解，定容到100mL，配制成10mol/L氢氧化钠溶液；取高氯酸8.7mL，加水稀释至1000mL，配制成0.1mol/L的高氯酸溶液；称取乙酸钠13.6g，用水溶解并稀释至500mL，用适量乙酸调节pH至5.2，配制成0.2mol/L乙酸钠缓冲溶液。
样品前处理，酶解：猪肉罐头取出可食用部分，各称取5g（1±0.05g）试样 ，10000r/min匀浆1min于50mL具塞离心管中，加入8mL乙酸钠缓冲液，超声10min，再加入50μL的β葡萄糖醛甙酶，超声10min，生化培养箱避光放置（37℃±1）约12h。
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摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料与试剂 2
1．1．1 仪器法检测莱克多巴胺所用材料与试剂2
1．1．1 生物法检测莱克多巴胺所用材料与试剂2
1.2 仪器与设备 2
1.3 标准物质 2
1.4 实验方法 2
1.4.1仪器法测莱克多巴胺的方法2
1.4.2 生物法测莱克多巴胺的方法3
1.5 计算方法 4
1.5.1 仪器法检测莱克多巴胺结果计算方法4
1.5.2 生物法检测莱克多巴胺结果计算方法4
2 结果与分析4
2.1 仪器分析法的结果4
2.1.1 方法的线性范围4
2.1.2 试验结果6
2.2生物分析法结果6
2.2.1 绘制标准曲线7
2.2.2 特异性与检测限的测定7
2.2.3 回收率与RSD%7
3 讨论7
3.1 为什么选用GCMS和ELISA7
3.2 前处理方法的注意点8
3.3 两种方法的结果11
3.4 实地检验过程中的问题11
3.5 检验样品的取样问题11
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
致谢12
参考文献12
图1 莱克多巴胺标准曲线5
图2 莱克多巴胺质谱图5
图3 基质匹配加标莱克多巴胺的样品LCMS多反应监测质量色谱图6
图4 莱克多巴胺酶联免疫反应试剂盒的标准曲线7
表1 梯度3
表2 MRM条件和保留时间3
表3 回收率及RSD%6
表4 回收率及RSD%7
猪肉制品中莱克多巴胺检测方法的研究
引言
目录
然而，近几年我国进出口岸仍然屡次在进口猪肉制品中检测出RCT的存在。对于猪肉制品，在RCT监控过程中，检测是最重要的一个环节。自我国多部门将莱克多巴胺列为违禁药物以来，我国已建立了一系列不同的检测标准，如国标、农业部标准、商务部标准等十几个标准，方法主要有气相色谱质谱联合分析法（gas chromatography combined with mass spectrometry, GC/MS）((((，液相色谱质谱联合分析法（liquid chromatography combined with mass spectrometry, LC/MS）((((，高效液相法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)((((，酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbentassay, ELISA）((((((((等。本文根据前期对比和分析，选择了较为常用，灵敏度较高的两种分析方法，LC/MS和ELISA来检测样品中的莱克多巴胺。由于猪肉制品是我国重要的畜产品，每年都有庞大的进口量。故文本采用以上两种常用方法对猪肉制品中的含有的莱克多巴胺进行检测。
1 材料与方法
1．1 材料与试剂
1．1．1 仪器法检测莱克多巴胺所用材料的与试剂 甲醇（HPLC级，>99.9%，Fisher Scientific）；乙醇钠(分析纯AR，国药化学试剂有限公司)；氢氧化钠（分析纯AR，国药化学试剂有限公司）；高氯酸（优级纯GR，国药化学试剂有限公司）；乙腈（HPLC级，Fisher Scientific）；β葡萄糖醛甙酶（Fisher Scientific）；丙乙醇（HPLC级，Fisher Scientific）；乙酸乙酯（HPLC级，Fisher Scientific）。市购猪肉罐头。
1．1．2 生物法检测莱克多巴胺所用的材料与试剂 去离子水；氯化钠（分析纯AR，国药化学试剂有限公司）；甲醇（分析纯AR，国药化学试剂有限公司）；浓盐酸（分析纯AR，国药化学试剂有限公司）；氢氧化钠（分析纯AR，国药化学试剂有限公司）。市购猪肉罐头。
1．2 仪器与设备
由Agilent 公司生产的液质联用仪1200/6410；涡旋振荡器；高速离心机；电热恒温震荡水槽；pH计；固相萃取装置；MCM固相萃取柱：60mg/3mL；氮吹仪；由美国Therom公司生产的高速冷冻离心机（Multifuge X3R）；微孔板酶标仪（450nm/630nm,Multiskan）；由上海康华生化仪器制造厂生产的涡旋混合器（WH866）；由重庆四达实验仪器有限公司生产的生化培养箱（SHH250L）；移液器；均质器。
1. 3 标准物质
莱克多巴胺、内标莱克多巴胺D45，Chem service。标准溶液*6瓶（1ml/瓶）0,0.05,0.15,0.45,1.35,4.05ng/ml。高浓度标准品：（1ml/瓶）100ng/ml。
1. 4 实验方法
1．4．1 仪器法检测莱克多巴胺的方法 配制试剂：试剂的配制是参考GB/T222862008的标准来完成的。称取氢氧化钠40.0g用水溶解，定容到100mL，配制成10mol/L氢氧化钠溶液；取高氯酸8.7mL，加水稀释至1000mL，配制成0.1mol/L的高氯酸溶液；称取乙酸钠13.6g，用水溶解并稀释至500mL，用适量乙酸调节pH至5.2，配制成0.2mol/L乙酸钠缓冲溶液。
样品前处理，酶解：猪肉罐头取出可食用部分，各称取5g（1±0.05g）试样 ，10000r/min匀浆1min于50mL具塞离心管中，加入8mL乙酸钠缓冲液，超声10min，再加入50μL的β葡萄糖醛甙酶，超声10min，生化培养箱避光放置（37℃±1）约12h。
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