2015年市猪a型口蹄疫血清学调查
：采用血清学试验对上海市某区不同规模猪场的670份血清样本进行猪A型口蹄疫感染抗体检测，共检出抗体阳性血清159份，总抗体阳性率为23.73%（其中规模猪场猪抗体阳性率为24.58%，散养猪场抗体阳性率为6.32%）。结果表明上海市某区猪场均存在不同程度的猪A型口蹄疫感染，且规模猪场阳性率明显高于散养猪场。虽然目前猪A型口蹄疫感染比例不高，但是发生疫情危险性较高。本文研究数据为制订猪A型口蹄疫综合性防控措施提供依据。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1待检血清的采集和处理2
1.1.2检测试剂2
1.2方法 2
1.2.1固相竞争ELISA2
1.2.2试验操作2
1.2.3结果计算2
1.2.4检测有效性标准2
1.2.5 结果判定3
2结果与分析3
2.1结果3
3讨论 5
3.1 分析5
3.2流行情况5
3.3散户阳性率低于规模化猪场的原因分析5
3.4猪群使用牛羊用A型口蹄疫疫苗效果分析5
3.5免疫保护力6
3.6诱发因素6
3.7防控6
3.7.1疫情排查6
3.7.2预防措施6
3.7.3扑灭措施6
3.7.4建议7
致谢7
参考文献7
2015年上海市猪A型口蹄疫血清学调查
引言
口蹄疫病毒（Footandmouth?Disease?Virus，FMDV）是口蹄疫(Footandmouth Disease, FMD)的病原体[1]，口蹄疫病毒具有多型性、易变异的特点，目前可分为7个血清型，即A型、O型、C型、南非1型（SAT1）、南非2型（SAT2）、南非3型（SAT3）和亚洲Ⅰ型, 我国从1999年开始，A型、O型和亚洲Ⅰ型在各地呈地方性流行且[2]危害大。口蹄疫是牛、羊、猪等的一种急性、
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热性传染病, 是一种严重危害畜牧业正常发展、影响经济发展和社会稳定的重大动物传染病, 口蹄疫的平均致死率仅为 1%，但被感染的动物会100%发病，而且传播速度较快[3]，世界动物卫生组织（OIE)和联合国粮农组织(FAO)在国际动物卫生法典中将其列为18种A类家畜传染病之首[4,5]，我国也将其列为一类动物疫病之首[6,7]， 表明国内外对该病的关注非常之高。因此，做好该病的防控工作具有重要意义。
据中新网报道[8] ，2013年2月广东茂名的一个猪场发生口蹄疫，经国家口蹄疫参考实验室确诊为A 型口蹄疫疫情。2014年6月30日农业部新闻办公室发布，江苏省宿迁市泗洪县发生一起输入性A 型口蹄疫疫情。可见，A 型口蹄疫在猪群中的发病呈上升趋势。全世界A型口蹄疫的流行范围和毒株复杂程度仅次于O型口蹄疫，而其致病性和抗原变异性则普遍强于O型[9]。
目前A型口蹄疫关于牛、羊感染的报道较多，但对于猪A型口蹄疫感染的报道较少，为掌握和了解上海某区的猪A型口蹄疫感染情况，本课题对上海市某区猪A型口蹄疫感染情况开展了血清学调查。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 待检血清的采集和处理 待检血样共670份，分别采自松江区5个镇的散养养殖户及4个规模化猪场。2500r/min离心10min，分离血清，置20℃冰箱保存，待检。检测前血清须经56℃灭活；血清背景见表1。
表1 血清背景
来源
猪血清（份）
肉猪
母猪
规模猪场1
60
60
规模猪场2
60
60
规模猪场3
60
60
规模猪场4
60
60
镇A散养猪
30
0
镇B散养猪
50
0
镇C散养猪
30
0
镇D散养猪
50
0
镇E散养猪
30
0
1.1.2 检测试剂 口蹄疫病毒A型特异性抗体固相竞争ELISA（SPCE）检测试剂盒，生产商：IZSLER，生产批号为：SPA 012015 150327a。
1.2 方法
1.2.1 固相竞争ELISA 用固相竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）进行口蹄疫病毒A型特意性抗体检测，严格按照试剂盒说明书操作。
1.2.2 试验操作 将所有试剂置21℃平衡至试验要求（最佳温度范围1825℃）。每块96孔微量反应板各孔中加入以下试剂：在4个相对应的孔中每孔加入50μL的阴性对照（即用型）；在2个孔中分别加入50μL 1/10倍和1/30倍稀释的阳性对照（即用型）；分别将50μL的1/30倍稀释的被检样品加入到剩下的检测孔中，注意每个样本都使用不同吸头。轻轻振动微孔板；盖上反应板并在室温孵育1小时（温度范围1825℃）；可以使用不同的布局，条件是必须包括所有的对照孔（阴性和阳性对照）。不需要洗涤，每孔加入25μL适当稀释的HRPA结合物；盖上反应板并在室温孵育1小时（温度范围1825℃）；将反应板内液体倒掉，并用力拍打，除去残存的所有液体；每孔中加入200μL的洗液，在室温孵育3分钟；除去孔内液体，重复3次，最后一次孵育5分钟（共计4次）；将块板中残留的洗涤液扣拍到吸水材料上。在所有的孔中每孔加入50μL的底物/显色液（室温下平衡）；盖上反应板，室温下避光孵育20分钟，从加入第一空开始计时；按照加入第五溶液的顺序，每孔加入50μL的终止液终止反应，读数前轻轻地混匀孔中的液体。终止后，立即用酶标仪再450nm的波长下读取每个孔的光密度（OD）值。
1.2.3 结果计算 阳性对照和被检血清按照下面方法计算阻断率：阻断率%=100（血清OD/参考OD值*）*100。
注：*参考OD值=四个阴性对照孔的平均OD值。
1.2.4 检测有效性标准 阴性对照OD值必须大于1；阳性对照血清的阻断率在1/10稀释时应≥80%，再1/30稀释时应＞50%。
1.2.5 结果判定 阻断率≥50%时为阳性；阻断率＜50%时为阴性。
2 结果与分析
2.1 结果
在对670份猪血清样品进行了口蹄疫A型特异性抗体检测中，共检出口蹄疫A型阳性血清159份，总抗体阳性率为23.73%，其中免疫后的规模猪场，肉猪总抗体阳性率为34.17%，母猪总抗体阳性率为39.17%，详见表2；未免疫的规模猪场，肉猪总抗体阳性率为22.67%，母猪总抗体阳性率为22.50%，详见表3；散养猪总抗体阳性率为6.32%，详见表4。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1待检血清的采集和处理2
1.1.2检测试剂2
1.2方法 2
1.2.1固相竞争ELISA2
1.2.2试验操作2
1.2.3结果计算2
1.2.4检测有效性标准2
1.2.5 结果判定3
2结果与分析3
2.1结果3
3讨论 5
3.1 分析5
3.2流行情况5
3.3散户阳性率低于规模化猪场的原因分析5
3.4猪群使用牛羊用A型口蹄疫疫苗效果分析5
3.5免疫保护力6
3.6诱发因素6
3.7防控6
3.7.1疫情排查6
3.7.2预防措施6
3.7.3扑灭措施6
3.7.4建议7
致谢7
参考文献7
2015年上海市猪A型口蹄疫血清学调查
引言
口蹄疫病毒（Footandmouth?Disease?Virus，FMDV）是口蹄疫(Footandmouth Disease, FMD)的病原体[1]，口蹄疫病毒具有多型性、易变异的特点，目前可分为7个血清型，即A型、O型、C型、南非1型（SAT1）、南非2型（SAT2）、南非3型（SAT3）和亚洲Ⅰ型, 我国从1999年开始，A型、O型和亚洲Ⅰ型在各地呈地方性流行且[2]危害大。口蹄疫是牛、羊、猪等的一种急性、
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热性传染病, 是一种严重危害畜牧业正常发展、影响经济发展和社会稳定的重大动物传染病, 口蹄疫的平均致死率仅为 1%，但被感染的动物会100%发病，而且传播速度较快[3]，世界动物卫生组织（OIE)和联合国粮农组织(FAO)在国际动物卫生法典中将其列为18种A类家畜传染病之首[4,5]，我国也将其列为一类动物疫病之首[6,7]， 表明国内外对该病的关注非常之高。因此，做好该病的防控工作具有重要意义。
据中新网报道[8] ，2013年2月广东茂名的一个猪场发生口蹄疫，经国家口蹄疫参考实验室确诊为A 型口蹄疫疫情。2014年6月30日农业部新闻办公室发布，江苏省宿迁市泗洪县发生一起输入性A 型口蹄疫疫情。可见，A 型口蹄疫在猪群中的发病呈上升趋势。全世界A型口蹄疫的流行范围和毒株复杂程度仅次于O型口蹄疫，而其致病性和抗原变异性则普遍强于O型[9]。
目前A型口蹄疫关于牛、羊感染的报道较多，但对于猪A型口蹄疫感染的报道较少，为掌握和了解上海某区的猪A型口蹄疫感染情况，本课题对上海市某区猪A型口蹄疫感染情况开展了血清学调查。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 待检血清的采集和处理 待检血样共670份，分别采自松江区5个镇的散养养殖户及4个规模化猪场。2500r/min离心10min，分离血清，置20℃冰箱保存，待检。检测前血清须经56℃灭活；血清背景见表1。
表1 血清背景
来源
猪血清（份）
肉猪
母猪
规模猪场1
60
60
规模猪场2
60
60
规模猪场3
60
60
规模猪场4
60
60
镇A散养猪
30
0
镇B散养猪
50
0
镇C散养猪
30
0
镇D散养猪
50
0
镇E散养猪
30
0
1.1.2 检测试剂 口蹄疫病毒A型特异性抗体固相竞争ELISA（SPCE）检测试剂盒，生产商：IZSLER，生产批号为：SPA 012015 150327a。
1.2 方法
1.2.1 固相竞争ELISA 用固相竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）进行口蹄疫病毒A型特意性抗体检测，严格按照试剂盒说明书操作。
1.2.2 试验操作 将所有试剂置21℃平衡至试验要求（最佳温度范围1825℃）。每块96孔微量反应板各孔中加入以下试剂：在4个相对应的孔中每孔加入50μL的阴性对照（即用型）；在2个孔中分别加入50μL 1/10倍和1/30倍稀释的阳性对照（即用型）；分别将50μL的1/30倍稀释的被检样品加入到剩下的检测孔中，注意每个样本都使用不同吸头。轻轻振动微孔板；盖上反应板并在室温孵育1小时（温度范围1825℃）；可以使用不同的布局，条件是必须包括所有的对照孔（阴性和阳性对照）。不需要洗涤，每孔加入25μL适当稀释的HRPA结合物；盖上反应板并在室温孵育1小时（温度范围1825℃）；将反应板内液体倒掉，并用力拍打，除去残存的所有液体；每孔中加入200μL的洗液，在室温孵育3分钟；除去孔内液体，重复3次，最后一次孵育5分钟（共计4次）；将块板中残留的洗涤液扣拍到吸水材料上。在所有的孔中每孔加入50μL的底物/显色液（室温下平衡）；盖上反应板，室温下避光孵育20分钟，从加入第一空开始计时；按照加入第五溶液的顺序，每孔加入50μL的终止液终止反应，读数前轻轻地混匀孔中的液体。终止后，立即用酶标仪再450nm的波长下读取每个孔的光密度（OD）值。
1.2.3 结果计算 阳性对照和被检血清按照下面方法计算阻断率：阻断率%=100（血清OD/参考OD值*）*100。
注：*参考OD值=四个阴性对照孔的平均OD值。
1.2.4 检测有效性标准 阴性对照OD值必须大于1；阳性对照血清的阻断率在1/10稀释时应≥80%，再1/30稀释时应＞50%。
1.2.5 结果判定 阻断率≥50%时为阳性；阻断率＜50%时为阴性。
2 结果与分析
2.1 结果
在对670份猪血清样品进行了口蹄疫A型特异性抗体检测中，共检出口蹄疫A型阳性血清159份，总抗体阳性率为23.73%，其中免疫后的规模猪场，肉猪总抗体阳性率为34.17%，母猪总抗体阳性率为39.17%，详见表2；未免疫的规模猪场，肉猪总抗体阳性率为22.67%，母猪总抗体阳性率为22.50%，详见表3；散养猪总抗体阳性率为6.32%，详见表4。
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