H7亚型禽流感病毒HA基因的原核表达(1)
H7亚型禽流感病毒HA基因的原核表达(1)[20200507191030]
摘要：为了表达H7亚型禽流感病毒HA基因，从NCBI数据库下载H7N9型禽流感病毒HA全基因序列，合成HA基因并将其插入原核表达载体PET32a中，构建重组表达质粒。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21与rosetta菌中，用IPTG诱导表达，寻找最佳的表达条件，用Western-blot进行鉴定。本次试验的结果表明HA基因成功表达并且具有反应原性，可以通过亲和层析纯化蛋白，后续可以应用间接ELISA或胶体金等不同方法用于鸡群H7N9禽流感病毒抗体的检测。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
关键字:H7N9禽流感病毒；HA基因；PET32a；原核表达
目录
摘要4
关键词4
Abstract4
Key words4
引言4
1 材料与方法5
1.1 材料5
1.1.1 质粒、细胞 5
1.1.2 工具酶5
1.1.3 试剂5
1.2 方法6
1.2.1 分析HA蛋白亲水性与抗原性6
1.2.2 双酶切鉴定6
1.2.3 感受态BL21制备6
1.2.4 质粒转化感受态大肠杆菌BL216
1.2.5 重组表达菌的IPTG诱导表达6
1.2.6 SDS-PAGE6
1.2.7 重组蛋白的Western-Blot鉴定7
1.2.8 曝光7
2 结果7
2 1 HA蛋白亲水性与抗原性分析7
2.2 重组质粒pET32a(+)-HA与pET32a空载体酶切8
2.3 重组基因表达9
2.3.1 重组质粒转化BL21中表达9
2.3.2 重组质粒转化Rosetta中表达9
2.4 Western-Blot 鉴定 10
3 讨论11
致谢12
参考文献12
附录12
图1HA蛋白亲水性与抗原性分析8
图2重组质粒pET32a(+)-HA8
图3pET32a空载体酶切图8
图4重组质粒转化BL21中表达9
图5重组蛋白与空载体37℃不同诱导时9
图6重组蛋白与空载体低温诱导10
图7重组蛋白裂解10
图8重组蛋白的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
Western-blot鉴定（HIS单抗）11
图9重组蛋白的Western-blot鉴定（H7阳性血清） 11
H7亚型禽流感病毒HA基因的原核表达
摘要：为了表达H7亚型禽流感病毒HA基因，从NCBI数据库下载H7N9型禽流感病毒HA全基因序列，合成HA基因并将其插入原核表达载体PET32a中，构建重组表达质粒。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21与rosetta菌中，用IPTG诱导表达，寻找最佳的表达条件，用Western-blot进行鉴定。本次试验的结果表明HA基因成功表达并且具有反应原性，可以通过亲和层析纯化蛋白，后续可以应用间接ELISA或胶体金等不同方法用于鸡群H7N9禽流感病毒抗体的检测。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
关键字:H7N9禽流感病毒；HA基因；PET32a；原核表达
目录
摘要4
关键词4
Abstract4
Key words4
引言4
1 材料与方法5
1.1 材料5
1.1.1 质粒、细胞 5
1.1.2 工具酶5
1.1.3 试剂5
1.2 方法6
1.2.1 分析HA蛋白亲水性与抗原性6
1.2.2 双酶切鉴定6
1.2.3 感受态BL21制备6
1.2.4 质粒转化感受态大肠杆菌BL216
1.2.5 重组表达菌的IPTG诱导表达6
1.2.6 SDS-PAGE6
1.2.7 重组蛋白的Western-Blot鉴定7
1.2.8 曝光7
2 结果7
2 1 HA蛋白亲水性与抗原性分析7
2.2 重组质粒pET32a(+)-HA与pET32a空载体酶切8
2.3 重组基因表达9
2.3.1 重组质粒转化BL21中表达9
2.3.2 重组质粒转化Rosetta中表达9
2.4 Western-Blot 鉴定 10
3 讨论11
致谢12
参考文献12
附录12
图1HA蛋白亲水性与抗原性分析8
图2重组质粒pET32a(+)-HA8
图3pET32a空载体酶切图8
图4重组质粒转化BL21中表达9
图5重组蛋白与空载体37℃不同诱导时9
图6重组蛋白与空载体低温诱导10
图7重组蛋白裂解10
图8重组蛋白的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
Western-blot鉴定（HIS单抗）11
图9重组蛋白的Western-blot鉴定（H7阳性血清） 11
H7亚型禽流感病毒HA基因的原核表达
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/dwyx/963.html
