某地区猫多囊肾病调查
多囊肾病作为一种常染色体显性遗传病，因肾脏的代偿性导致病情发现不及时，因肾脏功能的不可逆性导致目前没有特异性治疗方式，所以患有多囊肾病的猫只能延缓其病情，而最终仍将导致猫因慢性肾衰竭而死亡。因此对于本病的提前诊断治疗与杜绝本病的发生极为重要。本试验通过B超检查与基因分析来确诊PKD，分析PKD的流行与PKD1基因突变的存在。结果显示在南京地区通过超声检查确定的猫PKD患病率为8.16%，患病猫性别比为雄性雌性=71。基因检测未检测出阳性样品。结果表明，南京地区猫患有多囊肾病的概率低于国外，推测因为南京地区波斯猫及其相关品种等较少。雄性猫相对于雌性猫而言具有较高的外显子29上点突变概率。综上研究表明，进一步提高B超检查技术，同时通过基因分析手段为提前检测出猫患有PKD提供了可能性。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Keywords 1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1. 试验材料 2
1.1.1. 病例的收集与样品采集 2
1.1.2. 主要试剂 2
1.1.3. 主要仪器设备 2
1.2. 方法 2
1.2.1. B超检查 2
1.2.2. 猫样品DNA提取 2
1.2.3. PKD1基因PCR扩增 3
1.2.4. PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测 3
1.2.5. PCR产物中性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 3
1.2.6. PCR产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 4
1.2.7. 聚丙烯酰胺凝胶银染 4
1.2.8. PCR产物测序 5
2. 结果 5
2.1. 患病猫B超检查结果 5
2.2. 样品收集及DNA提取 7
2.3. PKD1 PCR扩增、电泳检测 7
2.4. PKD1基因突变的统计与分析 8
2.5. DNA测序结果的统计与分析 8
3. 讨论 9
3.1. B超结果讨论 9
3.2. 基因分析结果讨论 10
致谢 10 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
参考文献 11
南京地区猫多囊肾病调查
引言
引言
多囊肾病（polycystic kidney disease，PKD）又叫Potter综合征、Perlmann综合征、先天性肾囊肿瘤病。多囊病是一种发展缓慢的常染色体显性遣传性多囊肾病（autosomal dominant polycystic kidney disease，ADPKD）。该病多发于波斯猫及其相关品种猫，也见于喜马拉雅猫和其他长毛猫品种等[1]。因为为常染色体显性遗传所以患有多囊肾病的猫的幼仔有一半的概率会遗传上此病。它是由PKD1基因的外显子29的3284位（CA）的突变导致的[2]。该突变导致终止密码子在mRNA中提前出现而提前停止转录[3]。在波斯猫及其相关品种的猫中发现这CA的颠换是杂合的，没有纯合子（homozygous）后代是因为其在子宫中就会出现严重的病变，导致流产、死产，不可能生产（也有例外能发育到3个月，但概率极低）。故此，患有PKD的猫，大部分是被父母其中一方所影响的杂合子（heterozygous）。杂合子虽然携带一条突变基因和一条正常基因，但是正常基因必然被影响而变异。
因为多囊肾病无法用药将其彻底根治，只能按照肾衰竭的方式对症治疗。且因为动物的肾脏代偿能力十分强大，只有肾脏剩下25%功能时，才会发生肾脏指标的下降[4]，所以一旦怀疑猫患有多囊肾病的遗传基因时必须及时进行诊断和治疗。因此我们对南京地区猫PKD1基因的突变情况进行检测，旨在研究猫PKD1基因突变的携带与该病发病的关系，并且分析该病是否与猫品种、性别、生活习惯有关，以期尽早的通过超声检查和或基因检测的方式来诊断该疾病，并进行针对性的预防或通过绝育手段杜绝PKD1基因的遗传。
材料与方法
试验材料
病例的收集与样品采集
本次试验的所用的病例全部来自于大学动物医院有限责任公司。采集了35份来医院就诊的患病猫或打疫苗的健康猫样品，其中包括31份血液样品和4份口腔拭子样品。
头静脉采集血液样品，抗凝，其中有10份使用EDTA抗凝，21份使用肝素锂抗凝。口腔拭子的采集方法是用棉签在猫的口腔内适当刮取唾液和掉落的口腔上皮细胞，置于含有1 mL生理盐水的离心管中，剧烈震荡使细胞分散。将样品本置于20℃冰箱，冷冻保存。35份样品按照采样时间编号为：112、1A12A、1B11B。
主要试剂
细胞裂解缓冲液（10 mmol/L TrisHCl，0.1 mol/L EDTA，0.5% SDS），10 mol/L醋酸铵，5×Tris硼酸电泳缓冲液（贮藏液1L： Tris碱54 g，硼酸27.5 g，0.5 mol/LEDTA20 mL ），10%过硫酸铵，50×Tris乙酸电泳缓冲液（贮藏液1L：Tris碱242 g ，冰醋酸57.1 mL，0.5 mol/L EDTA100 mL ），蔗糖上样缓冲液（1%SDS，50%蔗糖，0.05%溴酚蓝），甲酰胺上样缓冲液（98%去离子甲酰胺，10mmol/LEDTA(pH8.0)，0.025%二甲苯青，0.025%溴酚蓝），银染固定液，银染染色液，银染显色液。
苯酚、核酸染色剂、TEMED、丙烯酰胺、N，N’亚甲基双丙烯酰胺等购自北京索莱宝科技有限公司。琼脂糖购自南京生兴生物科技有限公司。蛋白酶K、2×Taq PCR MasterMix、ddH2O、DNA Marker I等购自天根生化科技（北京）有限公司。
主要仪器设备
MyLab40 彩超购自百胜医疗；5417R低温冷冻离心机购自德国eppendoff；Veriti? 96PCR仪购自美国 Applied Biosystems；Nanodrop微量紫外分光光度计购自Thermo Fisher Scientific；A130649双垂直电泳槽购自北京市六一仪器厂；Biorad ChemiDoc XRS+成像系统购自美国BioRad公司；TY80S脱色摇床购自南京大学普阳科学仪器研究所。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Keywords 1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1. 试验材料 2
1.1.1. 病例的收集与样品采集 2
1.1.2. 主要试剂 2
1.1.3. 主要仪器设备 2
1.2. 方法 2
1.2.1. B超检查 2
1.2.2. 猫样品DNA提取 2
1.2.3. PKD1基因PCR扩增 3
1.2.4. PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测 3
1.2.5. PCR产物中性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 3
1.2.6. PCR产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 4
1.2.7. 聚丙烯酰胺凝胶银染 4
1.2.8. PCR产物测序 5
2. 结果 5
2.1. 患病猫B超检查结果 5
2.2. 样品收集及DNA提取 7
2.3. PKD1 PCR扩增、电泳检测 7
2.4. PKD1基因突变的统计与分析 8
2.5. DNA测序结果的统计与分析 8
3. 讨论 9
3.1. B超结果讨论 9
3.2. 基因分析结果讨论 10
致谢 10 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
参考文献 11
南京地区猫多囊肾病调查
引言
引言
多囊肾病（polycystic kidney disease，PKD）又叫Potter综合征、Perlmann综合征、先天性肾囊肿瘤病。多囊病是一种发展缓慢的常染色体显性遣传性多囊肾病（autosomal dominant polycystic kidney disease，ADPKD）。该病多发于波斯猫及其相关品种猫，也见于喜马拉雅猫和其他长毛猫品种等[1]。因为为常染色体显性遗传所以患有多囊肾病的猫的幼仔有一半的概率会遗传上此病。它是由PKD1基因的外显子29的3284位（CA）的突变导致的[2]。该突变导致终止密码子在mRNA中提前出现而提前停止转录[3]。在波斯猫及其相关品种的猫中发现这CA的颠换是杂合的，没有纯合子（homozygous）后代是因为其在子宫中就会出现严重的病变，导致流产、死产，不可能生产（也有例外能发育到3个月，但概率极低）。故此，患有PKD的猫，大部分是被父母其中一方所影响的杂合子（heterozygous）。杂合子虽然携带一条突变基因和一条正常基因，但是正常基因必然被影响而变异。
因为多囊肾病无法用药将其彻底根治，只能按照肾衰竭的方式对症治疗。且因为动物的肾脏代偿能力十分强大，只有肾脏剩下25%功能时，才会发生肾脏指标的下降[4]，所以一旦怀疑猫患有多囊肾病的遗传基因时必须及时进行诊断和治疗。因此我们对南京地区猫PKD1基因的突变情况进行检测，旨在研究猫PKD1基因突变的携带与该病发病的关系，并且分析该病是否与猫品种、性别、生活习惯有关，以期尽早的通过超声检查和或基因检测的方式来诊断该疾病，并进行针对性的预防或通过绝育手段杜绝PKD1基因的遗传。
材料与方法
试验材料
病例的收集与样品采集
本次试验的所用的病例全部来自于大学动物医院有限责任公司。采集了35份来医院就诊的患病猫或打疫苗的健康猫样品，其中包括31份血液样品和4份口腔拭子样品。
头静脉采集血液样品，抗凝，其中有10份使用EDTA抗凝，21份使用肝素锂抗凝。口腔拭子的采集方法是用棉签在猫的口腔内适当刮取唾液和掉落的口腔上皮细胞，置于含有1 mL生理盐水的离心管中，剧烈震荡使细胞分散。将样品本置于20℃冰箱，冷冻保存。35份样品按照采样时间编号为：112、1A12A、1B11B。
主要试剂
细胞裂解缓冲液（10 mmol/L TrisHCl，0.1 mol/L EDTA，0.5% SDS），10 mol/L醋酸铵，5×Tris硼酸电泳缓冲液（贮藏液1L： Tris碱54 g，硼酸27.5 g，0.5 mol/LEDTA20 mL ），10%过硫酸铵，50×Tris乙酸电泳缓冲液（贮藏液1L：Tris碱242 g ，冰醋酸57.1 mL，0.5 mol/L EDTA100 mL ），蔗糖上样缓冲液（1%SDS，50%蔗糖，0.05%溴酚蓝），甲酰胺上样缓冲液（98%去离子甲酰胺，10mmol/LEDTA(pH8.0)，0.025%二甲苯青，0.025%溴酚蓝），银染固定液，银染染色液，银染显色液。
苯酚、核酸染色剂、TEMED、丙烯酰胺、N，N’亚甲基双丙烯酰胺等购自北京索莱宝科技有限公司。琼脂糖购自南京生兴生物科技有限公司。蛋白酶K、2×Taq PCR MasterMix、ddH2O、DNA Marker I等购自天根生化科技（北京）有限公司。
主要仪器设备
MyLab40 彩超购自百胜医疗；5417R低温冷冻离心机购自德国eppendoff；Veriti? 96PCR仪购自美国 Applied Biosystems；Nanodrop微量紫外分光光度计购自Thermo Fisher Scientific；A130649双垂直电泳槽购自北京市六一仪器厂；Biorad ChemiDoc XRS+成像系统购自美国BioRad公司；TY80S脱色摇床购自南京大学普阳科学仪器研究所。
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