妊娠后期营养限饲对母鼠代谢及胎鼠发育的影响
本试验首先通过阴道分泌物涂片确定母鼠怀孕后，在妊娠后期通过母鼠日粮限饲（50%），构建IUGR模型，再进一步研究妊娠后期营养限饲对母鼠代谢及胎儿发育的影响。结果提示与对照组相比，妊娠后期营养限饲显著降低了（P<0.05）母鼠血清中肌酐、葡萄糖、总胆红素、总胆固醇的含量，降低了母鼠的腹脂率（P<0.01）。此外，限饲显著降低了（P<0.01）胎盘重量，胎鼠体重及窝重，但对产仔数无显著影响（P>0.05）。此外，妊娠后期母鼠营养限饲显著降低了胎鼠肝（P<0.05）及小肠（P<0.01）的重量，但仅显著降低了小肠相对重量（P<0.01），对肝的相对重无显著影响（P>0.05）。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法3
1.1 大鼠培养管理 3
1.2 大鼠阴道涂片的制作 4
1.3 大鼠发情鉴定4
1.4 大鼠怀孕的判定5
1.5 样本采集5
1.6 血清生化指标制定5
1.7 数据处理5
2 结果5
2.1 妊娠后期营养限制对母鼠血清生化指标的影响5
2.2 妊娠后期营养限制对母鼠腹脂率的影响6
2.3 妊娠后期营养限制对母鼠繁殖性能的影响7
2.4 妊娠后期营养限制对仔鼠器官重量的影响7
3 讨论 8
3.1 妊娠后期营养限制对母鼠血清生化指标的影响8
3.2 妊娠后期营养限制对母鼠腹脂率的影响8
3.3 妊娠后期营养限制对母鼠繁殖性能的影响8
3.4 妊娠后期母鼠营养限制对仔鼠生长发育的影响8
致谢9
参考文献9
妊娠后期营养限饲对母鼠代谢及胎鼠发育的影响
动物科学 陈志猛
引言
宫内发育迟缓（intrauterine growth retardation，IUGR）又称胎儿生长受限，它的定义是指胎儿没有达到应该有的生长速度与应该达到的生长水平，它是妇产科常见的并发症[1]。宫内发育迟缓会显著 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
影响后代个体存活率、生长性能和健康状况。宫内发育迟缓后代个体存活率下降，生长性能、养分利用率、胴体组成和肉品质等均受到长期负面影响。在母鼠妊娠期间，母体营养及其内分泌的变化会导致胎儿组织器官结构、生理功能以及代谢状况发生永久性改变。宫内发育迟缓可影响胎儿呼吸，致使胎儿出生窒息。此外还会影响胎儿体温以及血糖水平，造成低体温与低血糖。同时会使围产儿病死率增加。宫内发育迟缓还可造成成年后高血压、冠心病、胰岛素抵抗、2型糖尿病以及代谢综合征的发病率增加[2,3]。宫内发育迟缓还会造成智力发育迟缓，严重造成智力障碍，同时还会使体格不能按照正常的速度发展。据统计，在美国的新生胎儿中，宫内发育迟缓发生率为1015%，在发展中国家中则多达24%[4,5]。有研究证实，宫内发育迟缓受多种因素的影响，包括遗传因素、社会因素、母胎双方因素以及社会因素的影响[6]。
对宫内发育迟缓的研究主要集中于对孕期的研究。为了研究宫内发育迟缓，需要建立宫内发育迟缓模型。由于鼠数量多，繁殖速度快，适应能力强，怀孕时间较短，建模成本相对低，故常用于建立宫内发育迟缓研究的动物模型。宫内发育迟缓模型的建立的方法有许多，如子宫动脉结扎法。此方法会造成胎儿缺氧，从而构建IUGR模型。该方法对于子宫动脉结扎的松紧程度有较高要求，因此会造成胎儿死亡率偏高，IUGR发生率偏低[7]。被动吸烟法可以得到更多的IUGR模型，但是操作繁琐，需要通过多日多次被动吸烟得到IUGR模型。更生霉毒素法操作简便，仅需一次注射即可。但是更生霉毒素本身毒性大，超过剂量的注射会对母鼠以及仔鼠造成一定负面影响[7]。子宫肉阜摘除法不适用于大鼠以及小鼠等啮齿动物[8]。限制养分摄入法是通过限制母体营养从而影响胎儿的生长发育。该方法可以得到较多IUGR后代，但是对于日粮营养以及饲喂时间的控制均很难掌握，而且不同营养的限制对于IUGR后代的表现型均有一定影响。
宫内发育迟缓对后代乃至后代成长都将带来巨大影响。宫内发育迟缓会影响胎儿的正常发育，并且其不良影响还可延续到成年时期，因此对宫内发育迟缓的研究已成为一个重要的问题。本试验着重研究日粮限制造成母体营养不良对母体的营养，因此采用限制妊娠后期母鼠的营养的方法对宫内发育迟缓对于母体以及子代所带来的影响。
1. 材料与方法
1.1 大鼠饲养与管理
体重约280克的雌性SD大鼠被饲养在拥有稳定光照和湿度的坏境中（光照时间为白天：黑夜=12h：12h）。与雄性大鼠合笼（雌性：雄性=2：1）并于次日进行阴道分泌物涂片，镜检确定怀孕后的母鼠进行单笼饲养。24只孕鼠随机分为两2组，一组自由采食，记为对照组；另一组在妊娠10天后进行50%营养限饲，记为限饲组。在妊娠20天时，母鼠麻醉后屠宰取样，进行试验分析。
1.2 大鼠阴道涂片的制作
保定雌鼠，用移液枪吸取100微升生理盐水润浸后缓慢插入阴道0.5cm，轻轻吹打几次后吸出。将带有阴道分泌物的液体点在载波片上，然后将涂片在空气中自然干燥。之后用姬萨姆染液染色510分钟左右，用蒸馏水慢慢冲洗剩余染液，并使之干燥。待阴道涂片制作完毕后在显微镜下观察阴道涂片的组织与变化确定动情周期的不同阶段。
1.3 大鼠发情鉴定
大鼠发情周期不同阶段阴道脱落细胞涂片不同，如下图。发情前期的阴道细胞脱落以部分角化上皮为主，有部分完全角花上皮细胞，常呈椭圆形或近圆形。此时大鼠雌激素开始分泌并逐渐升高，但是血液中雌激素的含量仍然较低。发情期大鼠阴道脱落细胞大部分完全角质化，数量较多，细胞常呈大方块、多边形，有钝角。此时，血液中的雌激素含量最高。发情间期大鼠阴道脱落数量很少，主要以中间层细胞和白细胞为主，完全角化上皮细胞很少。此时，雌激素含量很低，孕酮含量较高。
发情后期大鼠阴道细胞以白细胞为主，有少量中间层细胞和角质化细胞。白细胞的形态小而圆，细胞核较大。发情后期是发情期向发情间期的过度，因此3种细胞都会有。
图1 大鼠发情各阶段阴道涂片
注：A)发情前期 B）发情期 C）发情间期D）发情后期
1.4 大鼠怀孕的判定
大鼠怀孕的判定主要为两个指标，首先是涂片中发现精子，表明已交孕；再者，母鼠处于发情期，两者指标同时具有时即视为怀孕，检出时间定为怀孕0.5天。如图2所示，A表示在大鼠发情期观察到精子，即视为怀孕0.5天；若只见精子，而不处于发情期的母鼠将被剔除，如图2B中所示。
图2 大鼠怀孕的判定
1.5 样本采集
在母鼠怀孕20天时屠宰取样，取母鼠血清样品，置20度冰箱中保存，备用；取母鼠胎盘及胎鼠，记录胎鼠个数，称重并统计窝重。将胎鼠进一步解剖，分离完整的肝、肾、小肠、脑，称重，并计算相对重量。
器官相对重量计算公式：相对重量（%）=器官重/胎鼠重量*100
1.6 血清生化指标测定
血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及尿素、肌酐、葡萄糖、总胆红素、总胆固醇、甘油三酯、白蛋白的含量分别采用南京建成试剂盒按照相应的说明书进行测定。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法3
1.1 大鼠培养管理 3
1.2 大鼠阴道涂片的制作 4
1.3 大鼠发情鉴定4
1.4 大鼠怀孕的判定5
1.5 样本采集5
1.6 血清生化指标制定5
1.7 数据处理5
2 结果5
2.1 妊娠后期营养限制对母鼠血清生化指标的影响5
2.2 妊娠后期营养限制对母鼠腹脂率的影响6
2.3 妊娠后期营养限制对母鼠繁殖性能的影响7
2.4 妊娠后期营养限制对仔鼠器官重量的影响7
3 讨论 8
3.1 妊娠后期营养限制对母鼠血清生化指标的影响8
3.2 妊娠后期营养限制对母鼠腹脂率的影响8
3.3 妊娠后期营养限制对母鼠繁殖性能的影响8
3.4 妊娠后期母鼠营养限制对仔鼠生长发育的影响8
致谢9
参考文献9
妊娠后期营养限饲对母鼠代谢及胎鼠发育的影响
动物科学 陈志猛
引言
宫内发育迟缓（intrauterine growth retardation，IUGR）又称胎儿生长受限，它的定义是指胎儿没有达到应该有的生长速度与应该达到的生长水平，它是妇产科常见的并发症[1]。宫内发育迟缓会显著 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
影响后代个体存活率、生长性能和健康状况。宫内发育迟缓后代个体存活率下降，生长性能、养分利用率、胴体组成和肉品质等均受到长期负面影响。在母鼠妊娠期间，母体营养及其内分泌的变化会导致胎儿组织器官结构、生理功能以及代谢状况发生永久性改变。宫内发育迟缓可影响胎儿呼吸，致使胎儿出生窒息。此外还会影响胎儿体温以及血糖水平，造成低体温与低血糖。同时会使围产儿病死率增加。宫内发育迟缓还可造成成年后高血压、冠心病、胰岛素抵抗、2型糖尿病以及代谢综合征的发病率增加[2,3]。宫内发育迟缓还会造成智力发育迟缓，严重造成智力障碍，同时还会使体格不能按照正常的速度发展。据统计，在美国的新生胎儿中，宫内发育迟缓发生率为1015%，在发展中国家中则多达24%[4,5]。有研究证实，宫内发育迟缓受多种因素的影响，包括遗传因素、社会因素、母胎双方因素以及社会因素的影响[6]。
对宫内发育迟缓的研究主要集中于对孕期的研究。为了研究宫内发育迟缓，需要建立宫内发育迟缓模型。由于鼠数量多，繁殖速度快，适应能力强，怀孕时间较短，建模成本相对低，故常用于建立宫内发育迟缓研究的动物模型。宫内发育迟缓模型的建立的方法有许多，如子宫动脉结扎法。此方法会造成胎儿缺氧，从而构建IUGR模型。该方法对于子宫动脉结扎的松紧程度有较高要求，因此会造成胎儿死亡率偏高，IUGR发生率偏低[7]。被动吸烟法可以得到更多的IUGR模型，但是操作繁琐，需要通过多日多次被动吸烟得到IUGR模型。更生霉毒素法操作简便，仅需一次注射即可。但是更生霉毒素本身毒性大，超过剂量的注射会对母鼠以及仔鼠造成一定负面影响[7]。子宫肉阜摘除法不适用于大鼠以及小鼠等啮齿动物[8]。限制养分摄入法是通过限制母体营养从而影响胎儿的生长发育。该方法可以得到较多IUGR后代，但是对于日粮营养以及饲喂时间的控制均很难掌握，而且不同营养的限制对于IUGR后代的表现型均有一定影响。
宫内发育迟缓对后代乃至后代成长都将带来巨大影响。宫内发育迟缓会影响胎儿的正常发育，并且其不良影响还可延续到成年时期，因此对宫内发育迟缓的研究已成为一个重要的问题。本试验着重研究日粮限制造成母体营养不良对母体的营养，因此采用限制妊娠后期母鼠的营养的方法对宫内发育迟缓对于母体以及子代所带来的影响。
1. 材料与方法
1.1 大鼠饲养与管理
体重约280克的雌性SD大鼠被饲养在拥有稳定光照和湿度的坏境中（光照时间为白天：黑夜=12h：12h）。与雄性大鼠合笼（雌性：雄性=2：1）并于次日进行阴道分泌物涂片，镜检确定怀孕后的母鼠进行单笼饲养。24只孕鼠随机分为两2组，一组自由采食，记为对照组；另一组在妊娠10天后进行50%营养限饲，记为限饲组。在妊娠20天时，母鼠麻醉后屠宰取样，进行试验分析。
1.2 大鼠阴道涂片的制作
保定雌鼠，用移液枪吸取100微升生理盐水润浸后缓慢插入阴道0.5cm，轻轻吹打几次后吸出。将带有阴道分泌物的液体点在载波片上，然后将涂片在空气中自然干燥。之后用姬萨姆染液染色510分钟左右，用蒸馏水慢慢冲洗剩余染液，并使之干燥。待阴道涂片制作完毕后在显微镜下观察阴道涂片的组织与变化确定动情周期的不同阶段。
1.3 大鼠发情鉴定
大鼠发情周期不同阶段阴道脱落细胞涂片不同，如下图。发情前期的阴道细胞脱落以部分角化上皮为主，有部分完全角花上皮细胞，常呈椭圆形或近圆形。此时大鼠雌激素开始分泌并逐渐升高，但是血液中雌激素的含量仍然较低。发情期大鼠阴道脱落细胞大部分完全角质化，数量较多，细胞常呈大方块、多边形，有钝角。此时，血液中的雌激素含量最高。发情间期大鼠阴道脱落数量很少，主要以中间层细胞和白细胞为主，完全角化上皮细胞很少。此时，雌激素含量很低，孕酮含量较高。
发情后期大鼠阴道细胞以白细胞为主，有少量中间层细胞和角质化细胞。白细胞的形态小而圆，细胞核较大。发情后期是发情期向发情间期的过度，因此3种细胞都会有。
图1 大鼠发情各阶段阴道涂片
注：A)发情前期 B）发情期 C）发情间期D）发情后期
1.4 大鼠怀孕的判定
大鼠怀孕的判定主要为两个指标，首先是涂片中发现精子，表明已交孕；再者，母鼠处于发情期，两者指标同时具有时即视为怀孕，检出时间定为怀孕0.5天。如图2所示，A表示在大鼠发情期观察到精子，即视为怀孕0.5天；若只见精子，而不处于发情期的母鼠将被剔除，如图2B中所示。
图2 大鼠怀孕的判定
1.5 样本采集
在母鼠怀孕20天时屠宰取样，取母鼠血清样品，置20度冰箱中保存，备用；取母鼠胎盘及胎鼠，记录胎鼠个数，称重并统计窝重。将胎鼠进一步解剖，分离完整的肝、肾、小肠、脑，称重，并计算相对重量。
器官相对重量计算公式：相对重量（%）=器官重/胎鼠重量*100
1.6 血清生化指标测定
血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及尿素、肌酐、葡萄糖、总胆红素、总胆固醇、甘油三酯、白蛋白的含量分别采用南京建成试剂盒按照相应的说明书进行测定。
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