筋骨止痛酊安全性试验及药效学试验(附件)
摘 要筋骨止痛酊来源于临床经验方，在临床取得了很好疗效。按照医院制剂规范要求，特做此实验，通过对筋骨止痛酊的急性毒性，皮肤刺激反应过敏反应的研究，来评价药物的安全性，用抗炎试验和小鼠镇痛试验充分验证筋骨止痛酊的作用，为筋骨止痛酊的临床应用提供实验依据。急毒试验未出现任何毒性反应；皮肤刺激试验结果表明筋骨止痛酊皮肤过敏试验阴性；抗炎试验和小鼠镇痛试验结果表明筋骨止痛酊有明显的抗炎作用、镇痛作用。综合结论得出筋骨止痛酊具有明显的抗炎、镇痛作用，没有毒副作用。 目 录
1 绪论
2 实验方法与结果
2.1 筋骨止痛酊急性毒性实验 2
2.1.1试验条件 2
2.1.2试验方法 2
2.1.3试验结果 3
2.2 筋骨止痛酊安全性实验 3
2.2.1实验材料 3
2.2.2筋骨止痛酊皮肤多次刺激试验 4
2.2.3筋骨止痛酊对豚鼠主动皮肤过敏反应的影响 5
2.3 筋骨止痛酊药效学 8
2.3.1试验材料 8
2.3.2筋骨止痛酊对角叉菜胶所致的小鼠足趾肿胀的影响 9
2.3.3筋骨止痛酊对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的试验 10
2.3.4筋骨止痛酊对冰醋酸致小鼠疼痛的影响 10
2.3.5对小鼠热刺激反应的影响（热板法） 11
3 结论与讨论 14
参考文献 15
致 谢 16
附 录 17
1 绪论
腰椎间盘突出症和骨质增生都多见于老年人，发病时都会疼痛难忍。腰椎间盘劳损、纤维环的破裂以及髓核的脱出等，会造成脊神经和脊髓受到压迫及刺激从而引起的症状群，这是腰椎间盘突出的症状，尤其中老年人的腰椎间盘中纤维环的纤维变粗变脆导致最终的断裂，使腰椎间盘失去了原有的弹性，无法承担原有的功能；剧烈的撞击、过于猛烈的动作或者突然改变的体位也可能造成腰椎间盘突出。骨质增生在中医中是痹症，被命名为骨关节病、增生性关节炎、骨质增生等；国外则命名为骨关节病、增生性骨关节炎等。气候变化或环境潮湿引起的关节痛被分为风湿性关节痛和风湿寒性关节痛。风湿性关节痛阴雨天、寒湿冷空气突袭或
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盘突出的症状，尤其中老年人的腰椎间盘中纤维环的纤维变粗变脆导致最终的断裂，使腰椎间盘失去了原有的弹性，无法承担原有的功能；剧烈的撞击、过于猛烈的动作或者突然改变的体位也可能造成腰椎间盘突出。骨质增生在中医中是痹症，被命名为骨关节病、增生性关节炎、骨质增生等；国外则命名为骨关节病、增生性骨关节炎等。气候变化或环境潮湿引起的关节痛被分为风湿性关节痛和风湿寒性关节痛。风湿性关节痛阴雨天、寒湿冷空气突袭或是冬季在户外劳动过多，疲劳工作，很容易导致发作和症状加重，因此人们又称它为“老寒腿”；发作起来疼痛剧烈、难忍。风湿性关节炎是不同于风湿寒性关节痛，风湿寒邪致风湿寒性关节痛及发病；链球菌受到感染则会引起风湿性关节炎。风湿寒性关节痛主要发病于脊柱、四肢的大脚关节。主要症状为：轻者多在局部一个肌肉或单、多个关节疼痛，行动不便，酸麻；重者则会发生全身肌肉、大小关节疼痛，关节活动由于疼痛而受到限制致使进入瘫痪状态。以上几种病症都会引起骨痛、肿胀、发炎等症状。筋骨止痛酊根据临床的处方加工而成，含有防风、伸筋草、樟脑、冰片、薄荷脑等成分。临床主要用于活血化瘀、消肿止痛。用于跌打损伤所致的肌肉、瘀血肿痛和韧带或关节的损伤。发症局部青紫肿胀、疼痛、功能活动受限等。
筋骨止痛酊的治疗原理是：经过局部给药直接接触受创部位，通过皮肤快速吸收从而达到抗炎、镇痛等作用，使病患的症状得到减轻、缓解。为了探讨本方的安全性和作用机理，本研究主要分为安全性试验、药效学试验及急性毒性试验。通过急性毒性试验及安全性试验评价筋骨止痛酊的安全性，药效学通过对角叉菜胶所致的小鼠足趾肿胀试验；对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀试验；对冰醋酸致小鼠疼痛试验；对小鼠热刺激反应试验（热板法）；来验证筋骨止痛酊的抗炎、镇痛作用。本文为筋骨止痛酊的临床应用提供更多的试验依据。
2 实验方法与结果
2.1 筋骨止痛酊急性毒性实验
2.1.1 试验条件
动物品系：SD大鼠，SPF级，体重180～220g，许可证号：SCXK（陕）2015002，由第四军医大学实验动物中心提供，实验前饲养5天，选行为、生活状态、精神状况正常的大鼠进行实验。
受试药物：筋骨止痛酊，由富平朱老二骨科医院提供, 批号140601。规格：30mL/瓶，每毫升含原生药0.344g。临床用量：外用，擦患处（按0.2mL计），一日4～6次。实验动物体重按60 kg计，1kg体重用药量为0.02mL。折算成生药每日外用0.00688g生药/kg。功能主治：活血化瘀、消炎止痛。缓解跌打损伤导致的肌肉、韧带或关节的损伤和瘀血肿痛。症见局部青紫肿胀、疼痛，功能活动受限等。
溶媒：95%的酒精，由富平朱老二骨科医院提供。
2.1.2 试验方法
2.1.2.1 受试动物皮肤准备
完整皮肤准备：在给药前24小时，用剪刀将大鼠背部脊柱两侧脱毛，脱毛范围约6×7cm2，脱毛后24小时检查去毛皮肤，剔除皮肤受伤的大鼠。
破损皮肤准备：按上述方法将受试大鼠脱毛，破损皮肤的制作采用14号针头，在脱毛且消毒的皮肤上划“#”字，以皮肤渗血为度。
2.1.2.2 给药方法及观察时间
大鼠按体重随机分六组，每组10只，雌雄各半，第一组涂溶媒，为完整皮肤对照组；第二组完整皮肤组大剂量组，将筋骨止痛酊0.2mL均匀涂敷于动物背部脱毛区，并用无刺激胶带加以固定；第三组完整皮肤小剂量组，按同样方法涂筋骨止痛酊0.1mL；第四组为破损皮肤对照组，涂溶媒；第五组破损皮肤大剂量组，按同样方法涂筋骨止痛酊0.2mL；第六组破损皮肤小剂量组，按同样方法涂筋骨止痛酊0.1mL。24小时内涂药6次，间隔2小时。给药24小时后，用温水去除残留筋骨止痛酊，观察每日大鼠全身健康状况，呼吸状态和行为举止，循环，消化系统及中枢神经系统表现的毒性反应及死亡情况，依次记录，连续14天。并称量给药前及7日、14日后大鼠体重，14日后处死解剖，对主要脏器（心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺、胰腺、胃、十二指肠、直肠、膀胱、睾丸、精囊腺、前列腺）及体腔做大体观察，肉眼观察有明显改变者做病理组织学检查[13]。
2.1.3 试验结果
筋骨止痛酊高、低两个剂量组与对照组外涂给药后，完整皮肤及破损皮肤大鼠的（行为活动、采食、精神状态、眼、肤色、皮毛光泽、呼吸及分泌物、粪便、体重和粘膜）都正常，（呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动）全部没有明显异常。所有动物均健康存活，破损皮肤全部在第2天结痂，之后7天内脱痂痊愈，没有出现任何毒性反应。大鼠体重增长，组间并无明显差异，见表2.1。用药组和对照组大鼠的（心、肝、脾、肺、肾）等器官解剖并未见到异常。
表2.1 筋骨止痛酊急性毒性试验大鼠体重（g，）
组 别 剂 量 动物数
1 绪论
2 实验方法与结果
2.1 筋骨止痛酊急性毒性实验 2
2.1.1试验条件 2
2.1.2试验方法 2
2.1.3试验结果 3
2.2 筋骨止痛酊安全性实验 3
2.2.1实验材料 3
2.2.2筋骨止痛酊皮肤多次刺激试验 4
2.2.3筋骨止痛酊对豚鼠主动皮肤过敏反应的影响 5
2.3 筋骨止痛酊药效学 8
2.3.1试验材料 8
2.3.2筋骨止痛酊对角叉菜胶所致的小鼠足趾肿胀的影响 9
2.3.3筋骨止痛酊对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的试验 10
2.3.4筋骨止痛酊对冰醋酸致小鼠疼痛的影响 10
2.3.5对小鼠热刺激反应的影响（热板法） 11
3 结论与讨论 14
参考文献 15
致 谢 16
附 录 17
1 绪论
腰椎间盘突出症和骨质增生都多见于老年人，发病时都会疼痛难忍。腰椎间盘劳损、纤维环的破裂以及髓核的脱出等，会造成脊神经和脊髓受到压迫及刺激从而引起的症状群，这是腰椎间盘突出的症状，尤其中老年人的腰椎间盘中纤维环的纤维变粗变脆导致最终的断裂，使腰椎间盘失去了原有的弹性，无法承担原有的功能；剧烈的撞击、过于猛烈的动作或者突然改变的体位也可能造成腰椎间盘突出。骨质增生在中医中是痹症，被命名为骨关节病、增生性关节炎、骨质增生等；国外则命名为骨关节病、增生性骨关节炎等。气候变化或环境潮湿引起的关节痛被分为风湿性关节痛和风湿寒性关节痛。风湿性关节痛阴雨天、寒湿冷空气突袭或
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盘突出的症状，尤其中老年人的腰椎间盘中纤维环的纤维变粗变脆导致最终的断裂，使腰椎间盘失去了原有的弹性，无法承担原有的功能；剧烈的撞击、过于猛烈的动作或者突然改变的体位也可能造成腰椎间盘突出。骨质增生在中医中是痹症，被命名为骨关节病、增生性关节炎、骨质增生等；国外则命名为骨关节病、增生性骨关节炎等。气候变化或环境潮湿引起的关节痛被分为风湿性关节痛和风湿寒性关节痛。风湿性关节痛阴雨天、寒湿冷空气突袭或是冬季在户外劳动过多，疲劳工作，很容易导致发作和症状加重，因此人们又称它为“老寒腿”；发作起来疼痛剧烈、难忍。风湿性关节炎是不同于风湿寒性关节痛，风湿寒邪致风湿寒性关节痛及发病；链球菌受到感染则会引起风湿性关节炎。风湿寒性关节痛主要发病于脊柱、四肢的大脚关节。主要症状为：轻者多在局部一个肌肉或单、多个关节疼痛，行动不便，酸麻；重者则会发生全身肌肉、大小关节疼痛，关节活动由于疼痛而受到限制致使进入瘫痪状态。以上几种病症都会引起骨痛、肿胀、发炎等症状。筋骨止痛酊根据临床的处方加工而成，含有防风、伸筋草、樟脑、冰片、薄荷脑等成分。临床主要用于活血化瘀、消肿止痛。用于跌打损伤所致的肌肉、瘀血肿痛和韧带或关节的损伤。发症局部青紫肿胀、疼痛、功能活动受限等。
筋骨止痛酊的治疗原理是：经过局部给药直接接触受创部位，通过皮肤快速吸收从而达到抗炎、镇痛等作用，使病患的症状得到减轻、缓解。为了探讨本方的安全性和作用机理，本研究主要分为安全性试验、药效学试验及急性毒性试验。通过急性毒性试验及安全性试验评价筋骨止痛酊的安全性，药效学通过对角叉菜胶所致的小鼠足趾肿胀试验；对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀试验；对冰醋酸致小鼠疼痛试验；对小鼠热刺激反应试验（热板法）；来验证筋骨止痛酊的抗炎、镇痛作用。本文为筋骨止痛酊的临床应用提供更多的试验依据。
2 实验方法与结果
2.1 筋骨止痛酊急性毒性实验
2.1.1 试验条件
动物品系：SD大鼠，SPF级，体重180～220g，许可证号：SCXK（陕）2015002，由第四军医大学实验动物中心提供，实验前饲养5天，选行为、生活状态、精神状况正常的大鼠进行实验。
受试药物：筋骨止痛酊，由富平朱老二骨科医院提供, 批号140601。规格：30mL/瓶，每毫升含原生药0.344g。临床用量：外用，擦患处（按0.2mL计），一日4～6次。实验动物体重按60 kg计，1kg体重用药量为0.02mL。折算成生药每日外用0.00688g生药/kg。功能主治：活血化瘀、消炎止痛。缓解跌打损伤导致的肌肉、韧带或关节的损伤和瘀血肿痛。症见局部青紫肿胀、疼痛，功能活动受限等。
溶媒：95%的酒精，由富平朱老二骨科医院提供。
2.1.2 试验方法
2.1.2.1 受试动物皮肤准备
完整皮肤准备：在给药前24小时，用剪刀将大鼠背部脊柱两侧脱毛，脱毛范围约6×7cm2，脱毛后24小时检查去毛皮肤，剔除皮肤受伤的大鼠。
破损皮肤准备：按上述方法将受试大鼠脱毛，破损皮肤的制作采用14号针头，在脱毛且消毒的皮肤上划“#”字，以皮肤渗血为度。
2.1.2.2 给药方法及观察时间
大鼠按体重随机分六组，每组10只，雌雄各半，第一组涂溶媒，为完整皮肤对照组；第二组完整皮肤组大剂量组，将筋骨止痛酊0.2mL均匀涂敷于动物背部脱毛区，并用无刺激胶带加以固定；第三组完整皮肤小剂量组，按同样方法涂筋骨止痛酊0.1mL；第四组为破损皮肤对照组，涂溶媒；第五组破损皮肤大剂量组，按同样方法涂筋骨止痛酊0.2mL；第六组破损皮肤小剂量组，按同样方法涂筋骨止痛酊0.1mL。24小时内涂药6次，间隔2小时。给药24小时后，用温水去除残留筋骨止痛酊，观察每日大鼠全身健康状况，呼吸状态和行为举止，循环，消化系统及中枢神经系统表现的毒性反应及死亡情况，依次记录，连续14天。并称量给药前及7日、14日后大鼠体重，14日后处死解剖，对主要脏器（心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺、胰腺、胃、十二指肠、直肠、膀胱、睾丸、精囊腺、前列腺）及体腔做大体观察，肉眼观察有明显改变者做病理组织学检查[13]。
2.1.3 试验结果
筋骨止痛酊高、低两个剂量组与对照组外涂给药后，完整皮肤及破损皮肤大鼠的（行为活动、采食、精神状态、眼、肤色、皮毛光泽、呼吸及分泌物、粪便、体重和粘膜）都正常，（呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动）全部没有明显异常。所有动物均健康存活，破损皮肤全部在第2天结痂，之后7天内脱痂痊愈，没有出现任何毒性反应。大鼠体重增长，组间并无明显差异，见表2.1。用药组和对照组大鼠的（心、肝、脾、肺、肾）等器官解剖并未见到异常。
表2.1 筋骨止痛酊急性毒性试验大鼠体重（g，）
组 别 剂 量 动物数
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