南五味子多糖的提取工艺研究(附件)
摘 要多糖具有较强的生物活性可以增强免疫、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血脂、保肝等作用。本试验利用微波辅助提取，对南五味子多糖的最佳提取工艺进行了深入研究。以南五味子多糖的提取率作为考查指标，利用单因素试验分别考察了料液比、提取时间和提取温度在不同水平下对多糖提取率的影响程度。在此基础上，采用Box—Behnken方法，通过响应面设计以优化微波辅助提取南五味子多糖。实验结果表明，3个因素对提取效果均有显著影响，显著性大小为提取温度>提取时间>料液比。研究确定的最佳提取条件为提取时间23 min，料液比1：20 mL/mg，提取温度80 ℃，南五味子多糖得率为9.85%。为南五味子的临床应用提供新思路，并为综合开发利用南五味子资源提供参考。目 录
1 绪论
1.1 南五味子的研究进展 1
1.1.1南五味子的性状 1
1.1.2 南五味子的资源 1
1.1.3南五味子的主要化学成分 1
1.1.4南五味子的药理作用 2
1.2 南五味子多糖的研究进展 3
1.2.1多糖的研究进展 3
1.2.2多糖的提取分离 4
1.2.3南五味子多糖的提取方法研究 5
1.2.4南五味子多糖含量测定主要方法 6
1.3 课题研究目的与意义 6
1.4 创新点 7
2实验部分
2.1实验器材 8
2.1.1实验材料 8
2.1.2实验主要试剂 8
2.1.3试验主要仪器 8
2.2实验方法 8
2.2.1多糖的提取 8
2.2.2多糖含量的测定 8
2.2.3葡萄糖标准曲线 9
2.3微波辅助萃取多糖单因素实验 10
2.3.1提取时间对南五味子多糖得率的影响 10
2.3.2提取温度对南五味子多糖得率的影响 10
2.3.3料液比对南五味子多糖得率的影响 11
2.4应用响应曲面试验优化 12
2.4.1 响应面试验分析结果 12
2.4.2回归模型方程的显著型检验 13<
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
br /> 2.3微波辅助萃取多糖单因素实验 10
2.3.1提取时间对南五味子多糖得率的影响 10
2.3.2提取温度对南五味子多糖得率的影响 10
2.3.3料液比对南五味子多糖得率的影响 11
2.4应用响应曲面试验优化 12
2.4.1 响应面试验分析结果 12
2.4.2回归模型方程的显著型检验 13
2.4.3回归模型方程的建立 13
2.4.4响应曲面图与等高值线图的分析 14
3总结 16
参考文献 17
致 谢 21
1 绪论
1.1 南五味子的研究进展
1.1.1南五味子的性状
本品呈球形或扁球形，直径4?6mm。表面棕红色至暗棕色，无光泽，果肉干瘪，皱缩，油性小，果肉常紧贴于种子上，种皮薄而脆。种子1?2，肾形，表面棕黄色。果肉气微，味微酸。
1.1.2 南五味子的资源
南五味子[Schisandrasphenanthera Rehd.et Wils.]为五味子科五味子属多年生落叶木质藤本植物的干燥成熟果实[1]。南五味子广泛分布于我国陕西、河南、江苏、安徽、湖北等地[2]。《唐本草》中记载有五味子“出蒲州及蓝田山中”，宋《图经本草》也记述，五味子“陕西州郡尤多”。秦岭山脉自古就是南五味子一大主产区，主要分布在安康、汉中、西安、渭南、太白山、眉县等地[3]。南五味子作药用，始载于《神农本草经》，列为上品，具有益气生津、收敛固涩、补肾养心之功效，主治咳喘、痢疾、失眠、出汗、心慌、健忘、失眠，是常用中药之一[4]。
1.1.3南五味子的主要化学成分
1.1.3.1 萜类
萜类是五味子中最重要的一类化合物。它包括：单萜、倍半萜、三萜等，其中单萜和倍半萜又分为有无环类单萜和倍半萜等，三萜包含羊毛甾烷类、开环羊毛甾烷类、环安坦烷类、开环环安坦烷等[5]。目前从二零零三年为止，研究者们证实了北五味子中三萜类成分比较多，并证明了北五味子有抗病毒等作用 [6]。
1.1.3.2 木脂素
木脂素是南五味子中主要化学成分，按其结构可分为5大类，联苯环辛二烯木脂素普遍存在于五味子属各种植物中，是主要的生物活性成分[7]。研究发现南五味子中含有大量的木脂素类具有很好的降酶、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用[8]。总木脂素部位具有镇静、催眠等多种药理作用[9]。
1.1.3.3 多糖
多糖是由几个单糖基通过糖苷键连接而成的化合物，可明显的增强机体免疫能力和抑制肿瘤的作用。五味子粗多糖能明显提高小鼠的耐缺氧能力，具有抗疲劳作用，也能使正常小鼠胸腺和脾脏的重量的增加。纪耀华等人[10]取90%乙醇渗渡后的药渣用水提取法得到南五味子粗多糖，得率为9.7%。总多糖是由半乳糖酸酸、半乳搪、葡萄塘等单糖组成，并含有未知糖。
另外，南五味子果实还含有挥发油、蛋白质、有机酸、微量元素等[11]。
1.1.4南五味子的药理作用
1.1.4.1 免疫促进作用
免疫是机体抵御外界刺激的一种自身防御作用，多糖可以提高免疫。研究表明[12]五味子多糖主要通过对淋巴细胞、巨噬细胞、网状内皮系统等作用来调节机体的免疫功能。仰榴青等[13]的研究结果表明，南五味子粗多糖大剂量能增强腹腔巨噬细胞吞噬功能(P<0.05)，可以提高小鼠血清溶血素水平。
1.1.4.2 镇静催眠作用
王雯雯等[14]经过实验研究发现南五味子的醚提物和醇提物能显著减少小鼠自主活动次数，增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠只数，延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间。
1.1.4.3 对呼吸系统的作用
孙侃[15]等人用五味子水提物静脉注射给药和醇提物静脉注射给药，最终得出这两中五味子提取物都会使健康家兔、麻醉家兔或犬的呼吸频率加快，呼吸深度加深，对吗啡造成的呼吸抑制的模型家兔也表现为对抗作用。
1.1.4.4 对消化系统的作用
研究发现五味子素甲素（Deoxyschisandrin）对胃酸的分秘具有选择性的阻碍作用，仅仅对组织胺、四肽胃秘素导致的胃酸分泌过多有一定的作用。王文燕等人调查表明，五味子乙素给大鼠静脉注射给药后，胃螺动减慢，说明五味子乙素有利于小鼠胆汁的分秘[16]。
1.1.4.5 降血糖作用
从南五味子中提取分离得到葡萄糖苷酶抑制剂，袁海波[17]等人对其降血糖方面进行了研究，研究方法是用提取的葡萄糖苷酶抑制剂以一定剂量灌胃给药，观察其对小鼠血糖含量以及糖耐量的影响。结果显示该抑制剂可以降低正常及四氧喃唆糖尿病小鼠的血糖，并提高正常小鼠的糖耐量。
1.1.
1 绪论
1.1 南五味子的研究进展 1
1.1.1南五味子的性状 1
1.1.2 南五味子的资源 1
1.1.3南五味子的主要化学成分 1
1.1.4南五味子的药理作用 2
1.2 南五味子多糖的研究进展 3
1.2.1多糖的研究进展 3
1.2.2多糖的提取分离 4
1.2.3南五味子多糖的提取方法研究 5
1.2.4南五味子多糖含量测定主要方法 6
1.3 课题研究目的与意义 6
1.4 创新点 7
2实验部分
2.1实验器材 8
2.1.1实验材料 8
2.1.2实验主要试剂 8
2.1.3试验主要仪器 8
2.2实验方法 8
2.2.1多糖的提取 8
2.2.2多糖含量的测定 8
2.2.3葡萄糖标准曲线 9
2.3微波辅助萃取多糖单因素实验 10
2.3.1提取时间对南五味子多糖得率的影响 10
2.3.2提取温度对南五味子多糖得率的影响 10
2.3.3料液比对南五味子多糖得率的影响 11
2.4应用响应曲面试验优化 12
2.4.1 响应面试验分析结果 12
2.4.2回归模型方程的显著型检验 13<
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
br /> 2.3微波辅助萃取多糖单因素实验 10
2.3.1提取时间对南五味子多糖得率的影响 10
2.3.2提取温度对南五味子多糖得率的影响 10
2.3.3料液比对南五味子多糖得率的影响 11
2.4应用响应曲面试验优化 12
2.4.1 响应面试验分析结果 12
2.4.2回归模型方程的显著型检验 13
2.4.3回归模型方程的建立 13
2.4.4响应曲面图与等高值线图的分析 14
3总结 16
参考文献 17
致 谢 21
1 绪论
1.1 南五味子的研究进展
1.1.1南五味子的性状
本品呈球形或扁球形，直径4?6mm。表面棕红色至暗棕色，无光泽，果肉干瘪，皱缩，油性小，果肉常紧贴于种子上，种皮薄而脆。种子1?2，肾形，表面棕黄色。果肉气微，味微酸。
1.1.2 南五味子的资源
南五味子[Schisandrasphenanthera Rehd.et Wils.]为五味子科五味子属多年生落叶木质藤本植物的干燥成熟果实[1]。南五味子广泛分布于我国陕西、河南、江苏、安徽、湖北等地[2]。《唐本草》中记载有五味子“出蒲州及蓝田山中”，宋《图经本草》也记述，五味子“陕西州郡尤多”。秦岭山脉自古就是南五味子一大主产区，主要分布在安康、汉中、西安、渭南、太白山、眉县等地[3]。南五味子作药用，始载于《神农本草经》，列为上品，具有益气生津、收敛固涩、补肾养心之功效，主治咳喘、痢疾、失眠、出汗、心慌、健忘、失眠，是常用中药之一[4]。
1.1.3南五味子的主要化学成分
1.1.3.1 萜类
萜类是五味子中最重要的一类化合物。它包括：单萜、倍半萜、三萜等，其中单萜和倍半萜又分为有无环类单萜和倍半萜等，三萜包含羊毛甾烷类、开环羊毛甾烷类、环安坦烷类、开环环安坦烷等[5]。目前从二零零三年为止，研究者们证实了北五味子中三萜类成分比较多，并证明了北五味子有抗病毒等作用 [6]。
1.1.3.2 木脂素
木脂素是南五味子中主要化学成分，按其结构可分为5大类，联苯环辛二烯木脂素普遍存在于五味子属各种植物中，是主要的生物活性成分[7]。研究发现南五味子中含有大量的木脂素类具有很好的降酶、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用[8]。总木脂素部位具有镇静、催眠等多种药理作用[9]。
1.1.3.3 多糖
多糖是由几个单糖基通过糖苷键连接而成的化合物，可明显的增强机体免疫能力和抑制肿瘤的作用。五味子粗多糖能明显提高小鼠的耐缺氧能力，具有抗疲劳作用，也能使正常小鼠胸腺和脾脏的重量的增加。纪耀华等人[10]取90%乙醇渗渡后的药渣用水提取法得到南五味子粗多糖，得率为9.7%。总多糖是由半乳糖酸酸、半乳搪、葡萄塘等单糖组成，并含有未知糖。
另外，南五味子果实还含有挥发油、蛋白质、有机酸、微量元素等[11]。
1.1.4南五味子的药理作用
1.1.4.1 免疫促进作用
免疫是机体抵御外界刺激的一种自身防御作用，多糖可以提高免疫。研究表明[12]五味子多糖主要通过对淋巴细胞、巨噬细胞、网状内皮系统等作用来调节机体的免疫功能。仰榴青等[13]的研究结果表明，南五味子粗多糖大剂量能增强腹腔巨噬细胞吞噬功能(P<0.05)，可以提高小鼠血清溶血素水平。
1.1.4.2 镇静催眠作用
王雯雯等[14]经过实验研究发现南五味子的醚提物和醇提物能显著减少小鼠自主活动次数，增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠只数，延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间。
1.1.4.3 对呼吸系统的作用
孙侃[15]等人用五味子水提物静脉注射给药和醇提物静脉注射给药，最终得出这两中五味子提取物都会使健康家兔、麻醉家兔或犬的呼吸频率加快，呼吸深度加深，对吗啡造成的呼吸抑制的模型家兔也表现为对抗作用。
1.1.4.4 对消化系统的作用
研究发现五味子素甲素（Deoxyschisandrin）对胃酸的分秘具有选择性的阻碍作用，仅仅对组织胺、四肽胃秘素导致的胃酸分泌过多有一定的作用。王文燕等人调查表明，五味子乙素给大鼠静脉注射给药后，胃螺动减慢，说明五味子乙素有利于小鼠胆汁的分秘[16]。
1.1.4.5 降血糖作用
从南五味子中提取分离得到葡萄糖苷酶抑制剂，袁海波[17]等人对其降血糖方面进行了研究，研究方法是用提取的葡萄糖苷酶抑制剂以一定剂量灌胃给药，观察其对小鼠血糖含量以及糖耐量的影响。结果显示该抑制剂可以降低正常及四氧喃唆糖尿病小鼠的血糖，并提高正常小鼠的糖耐量。
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