水稻白叶枯病菌pxo99a中tal4基因与ebes基因的互作

TAL4是PXO99A中的类似转录激活效应蛋白（transcription activator-like effector,TALE）由tal4基因编码。前期的研究发现，tal4基因的缺失突变体对杀菌剂噻枯唑的敏感性降低。本研究拟从TAL蛋白与靶基因的EBE(effector?binding?elements)互作的角度探究TAL4的作用机制。本研究首先构建了原核表达菌株BL21(DE3)/pET30b-tal4。在诱导表达出tal4蛋白后，利用His-tag亲和柱纯化所得到的Tal4蛋白，之后再用超滤管过滤蛋白的方式，得到纯化的Tal4蛋白；另外把PCR扩增获得的EBE克隆到pEASY-T3载体上，测序验证正确后，再酶切获得纯的EBEs,最后采用EMSA的方法验证TAL4与EBEs互作情况，但因为蛋白浓度不高；蛋白与EBE的配比还在探索过程中，所以未能得出最终结果。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1菌株和质粒 2
1.2主要试剂 2
1.2.1培养基2
1.2.2培养条件2
1.2.3抗生素2
1.2.4缓冲液3
1.3主要仪器 4
1.4质粒的提取 4
1.5酶切5
1.6连接 5
1.7酶切验证 6
1.8酶切回收 6
1.9连接产物的转化 6
1.9.1大肠杆菌（E. coli Trans1T1）感受态的制备6
1.9.2 连接产物的热激转化7
1.10原核表达步骤 7
1.10.1制样7
1.10.2 SDSPAGE菌落7
1.10.3 SDSPAGE分析8
1.10.4纯化目的蛋白8
1.11 Western Blot 9
1.12超滤管滤蛋白 9
1.13EMSA 10
2结果与分析10
2.1原核表达载体pET30btal4的获得和验证10 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥ 

2.2 tal4蛋白的表达，纯化和浓缩11
2.3 EBEs基因的酶切回收12
2.4 EBEs基因与tal4蛋白的互作12
3讨论 12
致谢13
参考文献13水稻白叶枯病菌PXO99A中tal4基因与EBEs基因的互作

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