致陆良县哺乳仔猪腹泻病原分析
致陆良县哺乳仔猪腹泻病原分析[20200507191957]
摘要：哺乳仔猪腹泻病是养猪生产中常见的疾病之一，该病严重影响仔猪的成活率和养猪业的健康发展。为了掌握引起陆良县仔猪腹泻病的主要病原，本研究利用PCR和RT-PCR方法对发病仔猪病料内的病原核酸进行检测，并对细菌进行分离培养鉴定。具体涉及云南省陆良县5个规模化猪场的152份发生仔猪腹泻病的病料，检测了大肠杆菌、沙门氏菌、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒（PCV）和猪伪狂犬病毒(PRV)。结果表明：所有受检样品中大肠杆菌、沙门氏菌、PCV和PEDV的阳性率分别为100%（152/152）、17.11%（26/152）、45.39%（69/152）、5.26%（8/152）；大肠杆菌、沙门氏菌、PCV和PEDV病原阳性猪场率分别为100%（5/5）、80%（4/5）、60%（3/5）、40%（2/5）；所有样品均未检测到TGEV和PRV抗原；5个猪场中，有2个猪场混合感染大肠杆菌和沙门氏菌，1个猪场混合感染大肠杆菌、PCV和PEDV，1个猪场混合感染大肠杆菌、沙门氏菌和PCV，1个混合感染大肠杆菌、沙门氏菌、PCV和PEDV。综上所述，引起云南省陆良县规模化猪场仔猪腹泻病的主要病原可确定为PCV和大肠杆菌，同时部分猪场存在大肠杆菌、沙门氏菌、PCV、PEDV的混合感染，必须引起相关部门和猪场业主的高度重视。
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关键字:仔猪腹泻；PCV；E.coli；病原
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 样品来源2
1.1.2 实验试剂3
1.1.3 实验设备 3
1.2 方法3
1.2.1 大肠杆菌、沙门氏菌的分离鉴定3
1.2.2 PCV、PRV的鉴定 4
1.2.3 PEDV、TEGV的鉴定4
2 结果与分析5
2.1 细菌分离鉴定结果5
2.1.1 细菌分离结果5
2.1.2 分离菌株鉴定结果5
2.1.3 大肠杆菌致病性检测结果6
2.1.4 动物接种实验结果6
2.1.5 各猪场细菌分离结果7
2.2 TGEV和PEDV鉴定结果 7
2.3 PCV和PRV的PCR鉴定结果8
3 讨论8
3.1 PEDV的检测结果讨论8
3.2 PCV的检测结果讨论9
3.3 大肠杆菌的检测结果讨论9
3.4 沙门氏菌的检测结果讨论10
3.5 TGEV和PRV的检测结果讨论10
3.6 病原的混合感染的结果讨论10
致谢11
参考文献 11
致陆良县哺乳仔猪腹泻病原分析
引言
仔猪腹泻病是根据该病的临床症状确立的一种仔猪常见、多发病，每年养殖户因此病而损失巨大，严重影响我国养猪业的健康、持续发展。引起仔猪腹泻的病原种类繁多，病因复杂，根据是否具有传染性可分为传染性腹泻和非 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
传染性腹泻。该病具有流行范围广、发病地区多、发病率和死亡率高等特点，临床表现为下痢、呕吐、消瘦、被毛粗乱、精神萎靡，常因脱水死亡。仔猪腹泻主要发生在1-3月龄，特别是1-3日龄的新生仔猪，7-20日龄的乳猪，断奶后10-15d内的仔猪多发。有的规模化猪场仔猪腹泻发病率高达50%以上，死亡率15%-20%，腹泻引起的死亡占仔猪死亡总数的40%，严重制约着养猪业的发展[1]。
非传染性腹泻病病因包括应激因素(如断奶、换料、转群、密度及热应激等)、管理因素（如产前消毒不当，通风不当等）、环境因素(温度及湿度)、母猪因素(泌乳量过高或过低)、营养因素（如维生素配比、氨基酸及脂类物质含量、饲料的质量等）、仔猪生理特点（如先天免疫力缺乏、消化器官不发达等）等。
传染性腹泻包括细菌性腹泻、病毒性腹泻和寄生虫性腹泻。细菌性腹泻可由致病性大肠杆菌、沙门氏菌菌、C型魏氏梭菌和猪痢疾密螺旋体引起，如致病性大肠杆菌可引起1-7日龄仔猪黄痢和10-30日龄仔猪白痢，沙门氏菌可引起仔猪副伤寒，C型魏氏梭菌和猪痢疾密螺旋体可引起50-90日龄仔猪泻痢。病毒性腹泻可由猪传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒、轮状病毒、圆环病毒和猪伪狂犬病毒等引起。寄生虫性腹泻包括艾美属和孢子属的球虫和猪蛔虫食道口线虫、毛尾线虫类、原线虫等线虫寄生在消化道内引起仔猪腹泻[2]。
传染性因素引发的哺乳仔猪腹泻的发生与流行在近年呈持续上升的趋势，造成仔猪大量死亡或生长缓慢，甚至成为僵猪，已成为造成猪场损失最为重要的原因之一。相关研究证明，引起仔猪腹泻的主要病原有致病性大肠杆菌、沙门氏菌、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒和猪伪狂犬病毒。
云南省地处亚热带地区，气候长年温暖、湿润，为病毒和细菌的扩增、持续存在提供了条件，陆良县为云南生猪产业大县，养猪业是该县农民增收和农村发展的重要支柱产业，每年都会因仔猪腹泻病而给农民造成巨大的经济损失。为了减少该病对陆良县养猪业造成的损失，掌握引起陆良县仔猪腹泻的主要病原，本研究利用PCR、RT-PCR以及细菌的分离培养鉴定方法对在陆良县5个规模化猪场采集的152份仔猪腹泻病病料进行大肠杆菌、沙门氏菌、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus，TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)、猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）和猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)6种病原进行鉴定，以期探明在陆良县境内引出仔猪腹泻的主要病因。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样品来源
样品采集自陆良县5个规模化猪场，用棉拭子取腹泻仔猪稀粪样本147份，组织病料5份，具体采样分布见表1。
表1病料来源
Table1 Sources of diseased materials
猪场名称 Name of pig farm 猪场规模 Scale of pig farm 病料数 Samples 样品名称 Name of sample 日龄 Age
陆良县曙光养殖场（A场） 万头 33 粪便 16日龄
陆良县种猪场（B场） 万头 2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
0 粪便 35日龄
陆良县俞学勇养殖场（C场） 1000头 27 粪便 28日龄
陆良县张红健养殖场（D场） 400头 7 粪便 23日龄
陆良县刘万宝养殖场（E场） 300头 65 60份粪便，5份组织 40-45日龄
1.1.2 实验试剂
RNAiso Plus Total RNA（批号：D9108B）、全血基因DNA快速提取试剂盒（批号：DP1802）购自百泰克生物技术有限公司
6×Loading?Buffer，1000?DNA?Marker、RI?Enzyme?Mix和2×ES?Reaction?Mix购自北京全式金生物技术有限公司
2×Trans?Taq?HiFiPCR?Super?Mix购自北京全式金生物技术有限公司。
异丙醇、75%乙醇、琼脂粉、TAE缓冲液、双蒸水、氯仿、麦康凯琼脂、营养琼脂、MH药敏培养基、三糖铁琼脂、氯化钠、蛋白胨、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、多价蛋白胨、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等。
1.1.3 实验设备
PCR仪（MJ Research，型号：PTC-150）、低温冻离心机（Thermo Electron Corporation INC，型号：D-37520）、凝胶成像系统（天能科技上海有限公司，型号：GIS-2010）、电泳仪（北京六一仪器厂，型号：DYY-7C）、超净工作台（苏州净化设备有限公司产品，型号：SW-CJ-1FD）、移液器（DRAGON产品）、微波炉（合肥三洋荣事达电器有限公司，型号：EM-500S）、双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂，型号：SZ-93）、恒温培养箱（上海市跃进医疗器械一厂，型号：HH.B11L.500）、高压蒸汽消毒器（上海医用核子仪器厂，型号：YH00L-71）等，以上仪器均由云南农业大学动物医学实验教学中心提供。
TGEV TGF 5’-TTGACTTGCAATTGGGGTAG-3’ 439
TGR 5’-CACTAACCAACGTGGARCTA-3’
摘要：哺乳仔猪腹泻病是养猪生产中常见的疾病之一，该病严重影响仔猪的成活率和养猪业的健康发展。为了掌握引起陆良县仔猪腹泻病的主要病原，本研究利用PCR和RT-PCR方法对发病仔猪病料内的病原核酸进行检测，并对细菌进行分离培养鉴定。具体涉及云南省陆良县5个规模化猪场的152份发生仔猪腹泻病的病料，检测了大肠杆菌、沙门氏菌、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒（PCV）和猪伪狂犬病毒(PRV)。结果表明：所有受检样品中大肠杆菌、沙门氏菌、PCV和PEDV的阳性率分别为100%（152/152）、17.11%（26/152）、45.39%（69/152）、5.26%（8/152）；大肠杆菌、沙门氏菌、PCV和PEDV病原阳性猪场率分别为100%（5/5）、80%（4/5）、60%（3/5）、40%（2/5）；所有样品均未检测到TGEV和PRV抗原；5个猪场中，有2个猪场混合感染大肠杆菌和沙门氏菌，1个猪场混合感染大肠杆菌、PCV和PEDV，1个猪场混合感染大肠杆菌、沙门氏菌和PCV，1个混合感染大肠杆菌、沙门氏菌、PCV和PEDV。综上所述，引起云南省陆良县规模化猪场仔猪腹泻病的主要病原可确定为PCV和大肠杆菌，同时部分猪场存在大肠杆菌、沙门氏菌、PCV、PEDV的混合感染，必须引起相关部门和猪场业主的高度重视。
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关键字:仔猪腹泻；PCV；E.coli；病原
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摘要1
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Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 样品来源2
1.1.2 实验试剂3
1.1.3 实验设备 3
1.2 方法3
1.2.1 大肠杆菌、沙门氏菌的分离鉴定3
1.2.2 PCV、PRV的鉴定 4
1.2.3 PEDV、TEGV的鉴定4
2 结果与分析5
2.1 细菌分离鉴定结果5
2.1.1 细菌分离结果5
2.1.2 分离菌株鉴定结果5
2.1.3 大肠杆菌致病性检测结果6
2.1.4 动物接种实验结果6
2.1.5 各猪场细菌分离结果7
2.2 TGEV和PEDV鉴定结果 7
2.3 PCV和PRV的PCR鉴定结果8
3 讨论8
3.1 PEDV的检测结果讨论8
3.2 PCV的检测结果讨论9
3.3 大肠杆菌的检测结果讨论9
3.4 沙门氏菌的检测结果讨论10
3.5 TGEV和PRV的检测结果讨论10
3.6 病原的混合感染的结果讨论10
致谢11
参考文献 11
致陆良县哺乳仔猪腹泻病原分析
引言
仔猪腹泻病是根据该病的临床症状确立的一种仔猪常见、多发病，每年养殖户因此病而损失巨大，严重影响我国养猪业的健康、持续发展。引起仔猪腹泻的病原种类繁多，病因复杂，根据是否具有传染性可分为传染性腹泻和非 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
传染性腹泻。该病具有流行范围广、发病地区多、发病率和死亡率高等特点，临床表现为下痢、呕吐、消瘦、被毛粗乱、精神萎靡，常因脱水死亡。仔猪腹泻主要发生在1-3月龄，特别是1-3日龄的新生仔猪，7-20日龄的乳猪，断奶后10-15d内的仔猪多发。有的规模化猪场仔猪腹泻发病率高达50%以上，死亡率15%-20%，腹泻引起的死亡占仔猪死亡总数的40%，严重制约着养猪业的发展[1]。
非传染性腹泻病病因包括应激因素(如断奶、换料、转群、密度及热应激等)、管理因素（如产前消毒不当，通风不当等）、环境因素(温度及湿度)、母猪因素(泌乳量过高或过低)、营养因素（如维生素配比、氨基酸及脂类物质含量、饲料的质量等）、仔猪生理特点（如先天免疫力缺乏、消化器官不发达等）等。
传染性腹泻包括细菌性腹泻、病毒性腹泻和寄生虫性腹泻。细菌性腹泻可由致病性大肠杆菌、沙门氏菌菌、C型魏氏梭菌和猪痢疾密螺旋体引起，如致病性大肠杆菌可引起1-7日龄仔猪黄痢和10-30日龄仔猪白痢，沙门氏菌可引起仔猪副伤寒，C型魏氏梭菌和猪痢疾密螺旋体可引起50-90日龄仔猪泻痢。病毒性腹泻可由猪传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒、轮状病毒、圆环病毒和猪伪狂犬病毒等引起。寄生虫性腹泻包括艾美属和孢子属的球虫和猪蛔虫食道口线虫、毛尾线虫类、原线虫等线虫寄生在消化道内引起仔猪腹泻[2]。
传染性因素引发的哺乳仔猪腹泻的发生与流行在近年呈持续上升的趋势，造成仔猪大量死亡或生长缓慢，甚至成为僵猪，已成为造成猪场损失最为重要的原因之一。相关研究证明，引起仔猪腹泻的主要病原有致病性大肠杆菌、沙门氏菌、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒和猪伪狂犬病毒。
云南省地处亚热带地区，气候长年温暖、湿润，为病毒和细菌的扩增、持续存在提供了条件，陆良县为云南生猪产业大县，养猪业是该县农民增收和农村发展的重要支柱产业，每年都会因仔猪腹泻病而给农民造成巨大的经济损失。为了减少该病对陆良县养猪业造成的损失，掌握引起陆良县仔猪腹泻的主要病原，本研究利用PCR、RT-PCR以及细菌的分离培养鉴定方法对在陆良县5个规模化猪场采集的152份仔猪腹泻病病料进行大肠杆菌、沙门氏菌、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus，TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)、猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）和猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)6种病原进行鉴定，以期探明在陆良县境内引出仔猪腹泻的主要病因。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样品来源
样品采集自陆良县5个规模化猪场，用棉拭子取腹泻仔猪稀粪样本147份，组织病料5份，具体采样分布见表1。
表1病料来源
Table1 Sources of diseased materials
猪场名称 Name of pig farm 猪场规模 Scale of pig farm 病料数 Samples 样品名称 Name of sample 日龄 Age
陆良县曙光养殖场（A场） 万头 33 粪便 16日龄
陆良县种猪场（B场） 万头 2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
0 粪便 35日龄
陆良县俞学勇养殖场（C场） 1000头 27 粪便 28日龄
陆良县张红健养殖场（D场） 400头 7 粪便 23日龄
陆良县刘万宝养殖场（E场） 300头 65 60份粪便，5份组织 40-45日龄
1.1.2 实验试剂
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2×Trans?Taq?HiFiPCR?Super?Mix购自北京全式金生物技术有限公司。
异丙醇、75%乙醇、琼脂粉、TAE缓冲液、双蒸水、氯仿、麦康凯琼脂、营养琼脂、MH药敏培养基、三糖铁琼脂、氯化钠、蛋白胨、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、多价蛋白胨、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等。
1.1.3 实验设备
PCR仪（MJ Research，型号：PTC-150）、低温冻离心机（Thermo Electron Corporation INC，型号：D-37520）、凝胶成像系统（天能科技上海有限公司，型号：GIS-2010）、电泳仪（北京六一仪器厂，型号：DYY-7C）、超净工作台（苏州净化设备有限公司产品，型号：SW-CJ-1FD）、移液器（DRAGON产品）、微波炉（合肥三洋荣事达电器有限公司，型号：EM-500S）、双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂，型号：SZ-93）、恒温培养箱（上海市跃进医疗器械一厂，型号：HH.B11L.500）、高压蒸汽消毒器（上海医用核子仪器厂，型号：YH00L-71）等，以上仪器均由云南农业大学动物医学实验教学中心提供。
TGEV TGF 5’-TTGACTTGCAATTGGGGTAG-3’ 439
TGR 5’-CACTAACCAACGTGGARCTA-3’
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