大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的细菌生长动力学试验
：为了确定大肠杆菌及金黄色葡萄球菌在适宜环境下生长达到相应时期的时间，试验将大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的菌液首先稀释至OD600值为0.6，然后倍比稀释至大肠杆菌浓度为200CFU/ml，接种于225ml营养肉汤培养液；将金黄色葡萄球菌浓度为1-2CFU/ml,接种于225ml7.5%Nacl肉汤培养液中。分别于培养的第0h-24h的每个小时末取菌液，用平板计数的方法对每毫升培养液中的细菌个数进行计数，并绘制以时间为很坐标，以每毫升培养液中的细菌个数为纵坐标的细菌生长曲线。结果表明：大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长均经历了迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个生长时期，符合细菌在适宜环境中的生长规律。且对数期出现于培养的第8-18h。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言（或绪论）2
1 材料与方法3
1.1 材料 3
1.2 主要仪器和设备3
1.3 培养基与试剂3
1.4 方法4
1.4.1 大肠杆菌菌种的复苏及初培养4
1.4.2 金黄色葡萄球菌的复苏及培养4
1.4.3 调节0D600并将菌液倍比稀释4
1.4.4 菌液浓度的测定4
1.4.5 大肠杆菌及金黄色葡萄球菌生长曲线的绘制 4
2 结果与分析5
2．1 大肠杆菌的生长曲线5
2．2 金黄色葡萄球菌的生长曲线6
3 讨论7
致谢9
参考文献10
大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的细菌生长动力学试验
引言
影响食品安全的因素众多，主要包括物理因素、化学因素、生物因素等，其中生物因素包括细菌、病毒、寄生虫等微生物污染[1]。据世界卫生组织统计，全球每年由食源性微生物引起的疾病占食源性疾病的37.1%[2]。细菌污染来源广泛，包括原料污染，产、储、运、销过程中的污染，烹饪加工过程中的污染、从业人员的污染等。细菌污染食品后，在食品内生长繁殖，会导致食品营养物质的分解，营养价值下降，甚至腐败变质。同时，某些细菌代谢产生的毒素对人体健康造成危害。因
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
此，对食品细菌污染的防控十分重要，而高效的细菌检出则是防控的重要一步。为了高效地检出细菌，除了灵敏的检验方法外，还需要选取细菌生长繁殖最旺盛的时段进行检测。大肠杆菌及金黄色葡萄球菌为常见的食源性病原体，也是国标规定的食品微生物检验项目。大肠杆菌是革兰氏阴性无芽孢的短杆菌，大小约为0.5×1～3微米。大多数菌株以周生鞭毛运动。大肠杆菌侵入肠外组织常引起泌尿系感染，导致尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎等。也可引起腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎等[4]。另外还有很多种类大肠杆菌能引起人类腹泻。大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，也是食源性病原体之一。典型的金黄色葡萄球菌为圆型，直径0.51.5μm左右，排列成葡萄串状，但在脓汁中或液体培养基中常呈双球或短链状。无芽孢和鞭毛。金黄色葡萄球菌常引起人类的化脓感染，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染[3]。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%15%NaCl肉汤中生长，利用这一特性，用7.5%Nacl肉汤培养金黄色葡萄球菌可初步排除其他细菌的干扰。金黄色葡萄球菌的生化反应不恒定，取决于菌株及培养条件。多数能分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、产酸不产气。金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低，对青霉素、红霉素等敏感度较高，但易产生耐药性[5][6]。食品中金黄色葡萄球菌的国标检测方法多采用平板计数法。食品安全国家标准中，对金黄色葡萄球菌的定性检测是，将25mg（ml）待检样品首先在无菌环境中接种于225ml7.5% 氯化钠肉汤或10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤，在36 ±1 ℃ 环境中培养18 h～24 h。随后将上述培养物分别划线接种到 BairdParker 平板和血平板。血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。BairdParker 平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h 或 45 h～48 h。观察菌落的形态特征，做出定性鉴定。其中，对食品中金黄色葡萄球菌的扩增是检测试验的第一步也是最基础的一步，细菌扩增的结果直接影响到后续的鉴定工作。
对于这两种细菌的生长模型，国内外已有相关报道。主要是在特定的培养基质中建立大肠杆菌生长模型[7]，研究主要集中于出大肠杆菌O157：H7[8]。但细菌的生长状态受环境温度、湿度及PH的影响,对于国标规定的标准培养环境下的细菌扩增的生长模式未有报道。绘制细菌的生长曲线时，一般细菌的培养时间为横坐标、相应时间下细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图。测定微生物生长曲线的方法有很多,例如平板菌落计数法、血细胞计数法、比浊法和称重法等。本试验通过平板计数的方法，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在国家标准规定的培养环境下各个节点的生长情况，精确绘制生长曲线图谱，从而明确细菌各个生长时期的时间段，为实际检测过程中各种病原菌的有效检出提供技术支撑。
1 材料与方法
1.1材料
大肠杆菌由江苏出入境检验检疫局动植食中心微生物科保存。金黄色葡萄球菌 ATCC25923保存于江苏出入境检验检疫局动植食中心。
1.2主要仪器和设备
超净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；高压灭菌锅MLS3780，日本三洋电器集团；电热恒温培养箱，德国Binder 公司；电子天平，德国赛多利斯集团；Milli Q Biocel超纯水仪，美国Millipore公司；台式离心机TDL40B，德国 Eppendorf公司；紫外可见分光光度计，上海美诺达仪器有限公司；旋涡混合器，德国 Eppendorf公司；ThermoFisher NanoDrop? 1000 Spectrophotometer，美国 Thermo公司；RNasefree 离心管，美国 Thermo公司。以上仪器和设备均由江苏出入境检验检疫局动植食中心提供。
1.3培养基与试剂
营养肉汤液体培养基:有胰蛋白胨2.5g、酵母粉1.25g、NaCl 2.5g, 加蒸馏水200mL完全溶解后,将PH调节至7.4左右(用pH值试纸比色), 最后定容至250mL, 于高压蒸气灭菌锅内121℃灭菌20min。冷却后4℃保存。
营养肉汤固体培养基: 胰蛋白胨2. 5g、酵母粉1. 25g、NaCl 2.5g、琼脂粉2.5g, 加纯化水200mL溶解, 调pH值至7. 4左右( 用pH值试纸比色), 定容至250mL, 于高压蒸气灭菌锅内121℃ 灭菌20min。冷却至适宜温度后铺平板，4℃保存。
含氨苄西林的培养基: 将浓度为5%的氨苄西林加入冷却至30℃左右的上述营养肉汤液体培养基和固体培养基中, 混合均匀, 使其工作浓度为0.5‰ 。待培养基冷却至适宜温度后，倒入一次性平板中铺平，每板约20ml，凝固后4℃保存待用。
7.5%氯化钠肉汤培养基：主要成分为蛋白胨2.5g、牛肉膏1.25g、氯化钠18.75g、加蒸馏水200mL，充分搅拌使其溶解, 将PH值调至7. 4左右(用pH值试纸比色), 定容至250mL, 于高压蒸气灭菌锅内121℃灭菌20min。4℃保存。
1x PBS缓冲液：磷酸二氢钾(KH2PO4)0.27g、磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g、氯化钠(NaCl) 8g、氯化钾(KCl)0.2g、加纯水800mL充分搅拌溶解，调pH至7.4，定容到1L。将定容好的PBS分装至各个离心管中，，每个管中装9mlPBS缓冲液。于高压蒸气灭菌锅内121℃ 灭菌20min。灭菌后，待冷却后室温下储存备用。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言（或绪论）2
1 材料与方法3
1.1 材料 3
1.2 主要仪器和设备3
1.3 培养基与试剂3
1.4 方法4
1.4.1 大肠杆菌菌种的复苏及初培养4
1.4.2 金黄色葡萄球菌的复苏及培养4
1.4.3 调节0D600并将菌液倍比稀释4
1.4.4 菌液浓度的测定4
1.4.5 大肠杆菌及金黄色葡萄球菌生长曲线的绘制 4
2 结果与分析5
2．1 大肠杆菌的生长曲线5
2．2 金黄色葡萄球菌的生长曲线6
3 讨论7
致谢9
参考文献10
大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的细菌生长动力学试验
引言
影响食品安全的因素众多，主要包括物理因素、化学因素、生物因素等，其中生物因素包括细菌、病毒、寄生虫等微生物污染[1]。据世界卫生组织统计，全球每年由食源性微生物引起的疾病占食源性疾病的37.1%[2]。细菌污染来源广泛，包括原料污染，产、储、运、销过程中的污染，烹饪加工过程中的污染、从业人员的污染等。细菌污染食品后，在食品内生长繁殖，会导致食品营养物质的分解，营养价值下降，甚至腐败变质。同时，某些细菌代谢产生的毒素对人体健康造成危害。因
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此，对食品细菌污染的防控十分重要，而高效的细菌检出则是防控的重要一步。为了高效地检出细菌，除了灵敏的检验方法外，还需要选取细菌生长繁殖最旺盛的时段进行检测。大肠杆菌及金黄色葡萄球菌为常见的食源性病原体，也是国标规定的食品微生物检验项目。大肠杆菌是革兰氏阴性无芽孢的短杆菌，大小约为0.5×1～3微米。大多数菌株以周生鞭毛运动。大肠杆菌侵入肠外组织常引起泌尿系感染，导致尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎等。也可引起腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎等[4]。另外还有很多种类大肠杆菌能引起人类腹泻。大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，也是食源性病原体之一。典型的金黄色葡萄球菌为圆型，直径0.51.5μm左右，排列成葡萄串状，但在脓汁中或液体培养基中常呈双球或短链状。无芽孢和鞭毛。金黄色葡萄球菌常引起人类的化脓感染，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染[3]。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%15%NaCl肉汤中生长，利用这一特性，用7.5%Nacl肉汤培养金黄色葡萄球菌可初步排除其他细菌的干扰。金黄色葡萄球菌的生化反应不恒定，取决于菌株及培养条件。多数能分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、产酸不产气。金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低，对青霉素、红霉素等敏感度较高，但易产生耐药性[5][6]。食品中金黄色葡萄球菌的国标检测方法多采用平板计数法。食品安全国家标准中，对金黄色葡萄球菌的定性检测是，将25mg（ml）待检样品首先在无菌环境中接种于225ml7.5% 氯化钠肉汤或10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤，在36 ±1 ℃ 环境中培养18 h～24 h。随后将上述培养物分别划线接种到 BairdParker 平板和血平板。血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。BairdParker 平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h 或 45 h～48 h。观察菌落的形态特征，做出定性鉴定。其中，对食品中金黄色葡萄球菌的扩增是检测试验的第一步也是最基础的一步，细菌扩增的结果直接影响到后续的鉴定工作。
对于这两种细菌的生长模型，国内外已有相关报道。主要是在特定的培养基质中建立大肠杆菌生长模型[7]，研究主要集中于出大肠杆菌O157：H7[8]。但细菌的生长状态受环境温度、湿度及PH的影响,对于国标规定的标准培养环境下的细菌扩增的生长模式未有报道。绘制细菌的生长曲线时，一般细菌的培养时间为横坐标、相应时间下细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图。测定微生物生长曲线的方法有很多,例如平板菌落计数法、血细胞计数法、比浊法和称重法等。本试验通过平板计数的方法，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在国家标准规定的培养环境下各个节点的生长情况，精确绘制生长曲线图谱，从而明确细菌各个生长时期的时间段，为实际检测过程中各种病原菌的有效检出提供技术支撑。
1 材料与方法
1.1材料
大肠杆菌由江苏出入境检验检疫局动植食中心微生物科保存。金黄色葡萄球菌 ATCC25923保存于江苏出入境检验检疫局动植食中心。
1.2主要仪器和设备
超净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；高压灭菌锅MLS3780，日本三洋电器集团；电热恒温培养箱，德国Binder 公司；电子天平，德国赛多利斯集团；Milli Q Biocel超纯水仪，美国Millipore公司；台式离心机TDL40B，德国 Eppendorf公司；紫外可见分光光度计，上海美诺达仪器有限公司；旋涡混合器，德国 Eppendorf公司；ThermoFisher NanoDrop? 1000 Spectrophotometer，美国 Thermo公司；RNasefree 离心管，美国 Thermo公司。以上仪器和设备均由江苏出入境检验检疫局动植食中心提供。
1.3培养基与试剂
营养肉汤液体培养基:有胰蛋白胨2.5g、酵母粉1.25g、NaCl 2.5g, 加蒸馏水200mL完全溶解后,将PH调节至7.4左右(用pH值试纸比色), 最后定容至250mL, 于高压蒸气灭菌锅内121℃灭菌20min。冷却后4℃保存。
营养肉汤固体培养基: 胰蛋白胨2. 5g、酵母粉1. 25g、NaCl 2.5g、琼脂粉2.5g, 加纯化水200mL溶解, 调pH值至7. 4左右( 用pH值试纸比色), 定容至250mL, 于高压蒸气灭菌锅内121℃ 灭菌20min。冷却至适宜温度后铺平板，4℃保存。
含氨苄西林的培养基: 将浓度为5%的氨苄西林加入冷却至30℃左右的上述营养肉汤液体培养基和固体培养基中, 混合均匀, 使其工作浓度为0.5‰ 。待培养基冷却至适宜温度后，倒入一次性平板中铺平，每板约20ml，凝固后4℃保存待用。
7.5%氯化钠肉汤培养基：主要成分为蛋白胨2.5g、牛肉膏1.25g、氯化钠18.75g、加蒸馏水200mL，充分搅拌使其溶解, 将PH值调至7. 4左右(用pH值试纸比色), 定容至250mL, 于高压蒸气灭菌锅内121℃灭菌20min。4℃保存。
1x PBS缓冲液：磷酸二氢钾(KH2PO4)0.27g、磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g、氯化钠(NaCl) 8g、氯化钾(KCl)0.2g、加纯水800mL充分搅拌溶解，调pH至7.4，定容到1L。将定容好的PBS分装至各个离心管中，，每个管中装9mlPBS缓冲液。于高压蒸气灭菌锅内121℃ 灭菌20min。灭菌后，待冷却后室温下储存备用。
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