鹅kiaa1462基因snp检测及其与产蛋性状关联分析
KIAA1462基因是KIAA基因家族成员之一，目前相关研究较少。本实验室前期利用简化基因组测序技术（RAD-sequencing）筛选产蛋性能候选SNP，发现该基因与鹅产蛋性能相关。在家禽产蛋性能相关基因的研究中，单核苷酸多态性（SNPs）是热点之一。常用的方法包括生物信息学方法、直接测序、单链构象多态（SSCP）、限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术（PCR-RFLP）、等位基因特异PCR（AS-PCR）和基因芯片技术等。本研究应用等位基因特异PCR技术来鉴定鹅产蛋性能相关的SNP标记，并验证候选SNP标记与鹅产蛋性能的相关性，为高产蛋性能鹅的选育提高提供有效分子标记。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 3
1.1 材料 3
1.1.1实验动物 3
1.1.2主要试剂 3
1.1.3主要仪器与设备 3
1.2 方法 3
1.2.1 试验样品的采集 3
1.2.2 鹅血样中DNA的提取 3
1.2.3引物设计 4
1.2.4 ASPCR反应体系与程序 4
1.2.5琼脂糖凝胶电泳检测 5
2 结果与分析 6
2.1候选SNP的群体验证 6
2.1.1 ASPCR电泳图 6
2.1.2测序验证ASPCR分型结果﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍6
2.1.3不同世代中三种基因型数量、频率及产蛋量 7
3 讨论 8
致谢 9
参考文献 9
鹅KIAA1462基因SNP检测及其与产蛋性状关联分析
动物科学 潘小维
引言
我国是养鹅大国，也是鹅产品消费大国。在我国大部分地区，鹅产品都深受广大
消费者的喜爱。鹅的生长速度比其它所有 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
禽类平均快1.7倍；鹅肉营养丰富，肉质鲜嫩，消化率高；鹅肥肝质地细嫩，口味鲜美，营养丰富，被誉为世界三大美食之一[1]；鹅蛋的蛋白质中，含人体所需要的8种必需氨基酸的含量都比鸡蛋和鸭蛋高；鹅血中蛋白含量较高，含有的超氧化物歧化酶（SOD）具有抗衰老养颜保健的作用，鹅血还具有解毒免疫、抗癌之功能。除此之外鹅胆可提炼抗菌药物，能清热解毒，鹅掌黄皮能治疗脚趾上湿烂和冻疮；鹅的羽绒大而蓬松，松软洁净无异味保温性能好；鹅皮毛经鞣制加工制成高档的裘皮，大羽翎可制成羽毛球扇等工艺品，羽毛所剩下的下脚料可制成水解羽毛粉用于生产饲料,可以说鹅全身上下都是宝，因此具有巨大的市场潜力[1]。随着人们生活水平的提高，对鹅产品的质量也有了更高的要求。
近年来，我国养鹅业进入了高速发展的阶段。如何进一步提高鹅的生长速度和产蛋性能已成为广大科研工作者更为关注的问题[2]。影响鹅繁殖性能的因素较多，就巢性是影响其繁殖性能的一个主要因素，它制约着鹅的繁殖速度和生产性能。因此消除就巢性,提高鹅的产蛋量是当前提高鹅繁殖力的有效方式之一。目前，对禽类的研究主要集中在鸡上，对鸭和鹅的研究也在逐步深入，特别是在分子生物学领域。鹅是我国重要的家禽品种资源，但各地方品种生产性能表现出较大差异，如四川白鹅的产蛋性能十分优秀，年产蛋量一般在60～80枚。高的可以达到100～120枚[3]。而皖西白鹅的产蛋量普遍较低，年产蛋量一般只有18～25枚[3]。皖西白鹅的常规选育难以提高其产蛋量，随着分子生物学的发展，分子遗传标记选育近年成研究热点。可通过与就巢基因相关的分子标记，经辅助选择等手段快速减弱母禽的就巢性，进而提高母禽的产蛋量[4]。SNP具有高密度、代表性、遗传稳定性及容易实现自动化分析等特点，因此，近年来被广泛研究应用。到目前为止，SNP已在鸡的QTL定位上得到广泛应用，主要集中在肉质和生长上，而在产蛋性状上应用还较少[4]。
等位基因特异PCR(Allelespecific PCR,ASPCR)是根据SNP位点设计3末端与SNP位点碱基互补或错配的特异PCR引物,通过凝胶电泳等方法检测PCR扩增产物的有或无,从而快速、简便检测个体基因型的一种方法 [5]。本试验以鹅作为研究对象，利用ASPCR技术，对实验室前期筛选得到的鹅KIAA1462基因SNP（A→T）位点在群体中进行鉴定，并验证该位点与鹅产蛋性能的相关性，以探讨KIAA1462基因对鹅产蛋性状的影响，以及该位点在鹅的分子生物学育种中的作用。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物
本试验以江苏常州立华畜禽有限公司鹅繁育基地为试验基地，1315只正常扬州鹅个体为研究对象，整个实验期鹅均处于自然环境条件下，自由采食和饮水，白天鹅群均在开阔的实验场自由活动。产蛋期结束后，采用一次性血液采集针通过翅静脉采集血液于含有枸橼酸钠抗凝剂的真空采血管中，置于20℃保存备用。
1.1.2 主要试剂
PCR类：Taq DNA聚合酶类（TaKaRa Taq，TaKaRa Premix LA Taq）大连宝生物公司。
DNA Marker（DL1000，DL2000，DL500）：大连宝生物公司。Goldview核酸染色剂。
DNA提取试剂：TrisHcl，Nacl，EDTA2Na，十二烷基硫酸钠（SDS），β巯基乙醇，聚乙烯吡咯烷酮，醋酸钠（NaAC）、氯仿、异戊醇、异丙醇，固体NaOH、乙醇。
琼脂糖凝胶：琼脂糖，TBE。
10×TBE电泳缓冲液：Tris Base 、硼酸、EDTA2Na?2H2O。
1.1.3主要仪器与设备
超净工作台、CO2细胞培养箱、台式冷冻离心机、超低温冰箱、微型紫外可见分光光度计、20℃冰箱、微波炉、电泳仪、电泳槽、荧光显微镜、可调式微量移液器、千分之一电子天平、高压消毒锅、PCR仪（美国ABI Veriti 96快速升温梯度PCR仪）、琼脂糖水平电泳仪(北京君意东方电泳设备有限公司)。
1.2 方法
1.2.1试验样品的采集
将10mL的玻璃瓶及塑胶盖洗净灭菌，静脉抽取鹅血液放入小瓶中（小瓶内事先加入肝素钠抗凝），注意在采集鹅血的时候要尽量减少污染，动作应迅速。
1.2.2 鹅血样中DNA的提取
⑴ 用灭菌的1mL枪头从小瓶中吸取500μL血样，放入1.5mL的EP管里。?
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 3
1.1 材料 3
1.1.1实验动物 3
1.1.2主要试剂 3
1.1.3主要仪器与设备 3
1.2 方法 3
1.2.1 试验样品的采集 3
1.2.2 鹅血样中DNA的提取 3
1.2.3引物设计 4
1.2.4 ASPCR反应体系与程序 4
1.2.5琼脂糖凝胶电泳检测 5
2 结果与分析 6
2.1候选SNP的群体验证 6
2.1.1 ASPCR电泳图 6
2.1.2测序验证ASPCR分型结果﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍﹍6
2.1.3不同世代中三种基因型数量、频率及产蛋量 7
3 讨论 8
致谢 9
参考文献 9
鹅KIAA1462基因SNP检测及其与产蛋性状关联分析
动物科学 潘小维
引言
我国是养鹅大国，也是鹅产品消费大国。在我国大部分地区，鹅产品都深受广大
消费者的喜爱。鹅的生长速度比其它所有 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
禽类平均快1.7倍；鹅肉营养丰富，肉质鲜嫩，消化率高；鹅肥肝质地细嫩，口味鲜美，营养丰富，被誉为世界三大美食之一[1]；鹅蛋的蛋白质中，含人体所需要的8种必需氨基酸的含量都比鸡蛋和鸭蛋高；鹅血中蛋白含量较高，含有的超氧化物歧化酶（SOD）具有抗衰老养颜保健的作用，鹅血还具有解毒免疫、抗癌之功能。除此之外鹅胆可提炼抗菌药物，能清热解毒，鹅掌黄皮能治疗脚趾上湿烂和冻疮；鹅的羽绒大而蓬松，松软洁净无异味保温性能好；鹅皮毛经鞣制加工制成高档的裘皮，大羽翎可制成羽毛球扇等工艺品，羽毛所剩下的下脚料可制成水解羽毛粉用于生产饲料,可以说鹅全身上下都是宝，因此具有巨大的市场潜力[1]。随着人们生活水平的提高，对鹅产品的质量也有了更高的要求。
近年来，我国养鹅业进入了高速发展的阶段。如何进一步提高鹅的生长速度和产蛋性能已成为广大科研工作者更为关注的问题[2]。影响鹅繁殖性能的因素较多，就巢性是影响其繁殖性能的一个主要因素，它制约着鹅的繁殖速度和生产性能。因此消除就巢性,提高鹅的产蛋量是当前提高鹅繁殖力的有效方式之一。目前，对禽类的研究主要集中在鸡上，对鸭和鹅的研究也在逐步深入，特别是在分子生物学领域。鹅是我国重要的家禽品种资源，但各地方品种生产性能表现出较大差异，如四川白鹅的产蛋性能十分优秀，年产蛋量一般在60～80枚。高的可以达到100～120枚[3]。而皖西白鹅的产蛋量普遍较低，年产蛋量一般只有18～25枚[3]。皖西白鹅的常规选育难以提高其产蛋量，随着分子生物学的发展，分子遗传标记选育近年成研究热点。可通过与就巢基因相关的分子标记，经辅助选择等手段快速减弱母禽的就巢性，进而提高母禽的产蛋量[4]。SNP具有高密度、代表性、遗传稳定性及容易实现自动化分析等特点，因此，近年来被广泛研究应用。到目前为止，SNP已在鸡的QTL定位上得到广泛应用，主要集中在肉质和生长上，而在产蛋性状上应用还较少[4]。
等位基因特异PCR(Allelespecific PCR,ASPCR)是根据SNP位点设计3末端与SNP位点碱基互补或错配的特异PCR引物,通过凝胶电泳等方法检测PCR扩增产物的有或无,从而快速、简便检测个体基因型的一种方法 [5]。本试验以鹅作为研究对象，利用ASPCR技术，对实验室前期筛选得到的鹅KIAA1462基因SNP（A→T）位点在群体中进行鉴定，并验证该位点与鹅产蛋性能的相关性，以探讨KIAA1462基因对鹅产蛋性状的影响，以及该位点在鹅的分子生物学育种中的作用。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物
本试验以江苏常州立华畜禽有限公司鹅繁育基地为试验基地，1315只正常扬州鹅个体为研究对象，整个实验期鹅均处于自然环境条件下，自由采食和饮水，白天鹅群均在开阔的实验场自由活动。产蛋期结束后，采用一次性血液采集针通过翅静脉采集血液于含有枸橼酸钠抗凝剂的真空采血管中，置于20℃保存备用。
1.1.2 主要试剂
PCR类：Taq DNA聚合酶类（TaKaRa Taq，TaKaRa Premix LA Taq）大连宝生物公司。
DNA Marker（DL1000，DL2000，DL500）：大连宝生物公司。Goldview核酸染色剂。
DNA提取试剂：TrisHcl，Nacl，EDTA2Na，十二烷基硫酸钠（SDS），β巯基乙醇，聚乙烯吡咯烷酮，醋酸钠（NaAC）、氯仿、异戊醇、异丙醇，固体NaOH、乙醇。
琼脂糖凝胶：琼脂糖，TBE。
10×TBE电泳缓冲液：Tris Base 、硼酸、EDTA2Na?2H2O。
1.1.3主要仪器与设备
超净工作台、CO2细胞培养箱、台式冷冻离心机、超低温冰箱、微型紫外可见分光光度计、20℃冰箱、微波炉、电泳仪、电泳槽、荧光显微镜、可调式微量移液器、千分之一电子天平、高压消毒锅、PCR仪（美国ABI Veriti 96快速升温梯度PCR仪）、琼脂糖水平电泳仪(北京君意东方电泳设备有限公司)。
1.2 方法
1.2.1试验样品的采集
将10mL的玻璃瓶及塑胶盖洗净灭菌，静脉抽取鹅血液放入小瓶中（小瓶内事先加入肝素钠抗凝），注意在采集鹅血的时候要尽量减少污染，动作应迅速。
1.2.2 鹅血样中DNA的提取
⑴ 用灭菌的1mL枪头从小瓶中吸取500μL血样，放入1.5mL的EP管里。?
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