猪链球菌Mac1结构蛋白抗吞噬对致病力的影响
猪链球菌Mac1结构蛋白抗吞噬对致病力的影响[20200507190203]
摘要：猪链球菌是一种重要的人畜共患病病原，能引起猪脑膜炎、败血症、关节炎等多种病症。在33个血清型中，猪链球菌2型流行最广、毒力最强。前期工作表明，Mac是可能的毒力因子。为深入研究Mac对猪链球菌抗吞噬作用的影响，利用温度敏感型穿梭质粒pSET4s，构建Mac缺失株ΔMac，并利用穿梭质粒pSET2构建互补株CΔMac。经PCR及测序鉴定，成功构建缺失株及互补株。Mac基因缺失后没有明显的生长缺陷。通过猪全血存活试验、小鼠巨噬细胞吞噬试验初步研究Mac对猪链球菌毒力的影响。结果显示，在猪全血中与抗SS2血清作用3h后，野生株P1/7的存活率为54.1%，缺失株ΔMac存活率为23.9%，互补株CΔMac存活率34.9%，缺失株存活率与野生株相比明显下降，且差异极显著（P<0.01）；小鼠巨噬细胞吞噬试验结果显示，作用1h后小鼠巨噬细胞对P1/7野生株，缺失株ΔMac和互补株CΔMac的吞噬率分别为25.32%、26.89%、23.83%，吞噬水平基本相同。作用2h后，以野生株P1/7存活数作为对照，缺失株存活率下降明显，二者差异极显著（P<0.001），互补株存活率与野生株基本持平，说明缺失Mac后，细菌抗吞噬能力下降，从而为后续进一步阐明Mac的功能奠定基础。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
关键字:猪链球菌；Mac-1结构蛋白；抗吞噬
目录
摘 要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引 言1
1 材料及方法2
1.1材料 2
1.1.1 质粒及菌株 2
1.1.2 主要试剂 2
1.1.3 主要仪器 2
1.2缺失株的构建及鉴定 3
1.2.1 基因缺失载体的构建 3
1.2.2 基因缺失载体的鉴定 3
1.2.3 P1/7感受态的制备3
1.2.4 电转化 3
1.2.5 缺失株的筛选及鉴定 3
1.2.6 互补载体的构建 4
1.2.7 互补载体的鉴定 4
1.2.8 互补株的筛选及鉴定 4
1.3猪全血存活试验 4
1.4小鼠巨噬细胞（RAW264.7）吞噬试验4
2 结果与分析5
2.1缺失载体的构建与鉴定 5
2.2缺失株的筛选 5
2.3互补载体的构建与鉴定 6
2.4互补株的筛选 6
2.5猪全血存活试验 7
2.6小鼠巨噬细胞（RAW264.7）吞噬试验7
3 讨论8
致 谢 8
参考文献 9
猪链球菌Mac-1结构蛋白抗吞噬对致病力的影响
摘要：猪链球菌是一种重要的人畜共患病病原，能引起猪脑膜炎、败血症、关节炎等多种病症。在33个血清型中，猪链球菌2型流行最广、毒力最强。前期工作表明，Mac是可能的毒力因子。为深入研究Mac对猪链球菌抗吞噬作用的影响，利用温度敏感型穿梭质粒pSET4s，构建Mac缺失株ΔMac，并利用穿梭质粒pSET2构建互补株CΔMac。经PCR及测序鉴定，成功构建缺失株及互补株。Mac基因缺失后没有明显的生长缺陷。通过猪全血存活试验、小鼠巨噬细胞吞噬试验初步研究Mac对猪链球菌毒力的影响。结果显示，在猪全血中与抗SS2血清作用3h后，野生株P1/7的存活率为54.1%，缺失株ΔMac存活率为23.9%，互补株CΔMac存活率34.9%，缺失株存活率与野生株相比明显下降，且差异极显著（P<0.01）；小鼠巨噬细胞吞噬试验结果显示，作用1h后小鼠巨噬细胞对P1/7野生株，缺失株ΔMac和互补株CΔMac的吞噬率分别为25.32%、26.89%、23.83%，吞噬水平基本相同。作用2h后，以野生株P1/7存活数作为对照，缺失株存活率下降明显，二者差异极显著（P<0.001），互补株存活率与野生株基本持平，说明缺失Mac后，细菌抗吞噬能力下降，从而为后续进一步阐明Mac的功能奠定基础。
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关键字:猪链球菌；Mac-1结构蛋白；抗吞噬
目录
摘 要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引 言1
1 材料及方法2
1.1材料 2
1.1.1 质粒及菌株 2
1.1.2 主要试剂 2
1.1.3 主要仪器 2
1.2缺失株的构建及鉴定 3
1.2.1 基因缺失载体的构建 3
1.2.2 基因缺失载体的鉴定 3
1.2.3 P1/7感受态的制备3
1.2.4 电转化 3
1.2.5 缺失株的筛选及鉴定 3
1.2.6 互补载体的构建 4
1.2.7 互补载体的鉴定 4
1.2.8 互补株的筛选及鉴定 4
1.3猪全血存活试验 4
1.4小鼠巨噬细胞（RAW264.7）吞噬试验4
2 结果与分析5
2.1缺失载体的构建与鉴定 5
2.2缺失株的筛选 5
2.3互补载体的构建与鉴定 6
2.4互补株的筛选 6
2.5猪全血存活试验 7
2.6小鼠巨噬细胞（RAW264.7）吞噬试验7
3 讨论8
致 谢 8
参考文献 9
猪链球菌Mac-1结构蛋白抗吞噬对致病力的影响
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