鸡bcrp过表达细胞mdckchbcrp的构建及其底物的筛选
乳腺癌耐药蛋白(BCRP)对底物药物的药代动力学和毒性有影响。然而，目前还没有关于BCRP的功能活性和底物谱的详细报道。本研究中，使用慢病毒载体系统产生BCRP细胞系（命名为MDCK-chAbcg2）以开发用于筛选转运体的底物的可靠体系并研究其作用。所构建的细胞株表达外源功能蛋白，并持续表达至少50代，无明显下降。根据FDA的规则，由于净外排率大于2，因此恩诺沙星，环丙沙星，替米考星，氟苯尼考，氨苄西林和克林霉素被归为BCRP的底物。同样，在这些药物中，恩诺沙星，环丙沙星，替米考星，氨苄西林和克林霉素也是BCRP的辅助底物。不同浓度的底物，可阻断一种或两种在共表达系统中与特定抑制剂的运输。因此我们还发现头孢噻呋，阿莫西林和多西环素不是鸡BCRP的底物。 故本试验构建的细胞模型为高通量筛选鸡BCRP的潜在底物以及通过鸡BCRP介导的药物 - 药物相互作用提供了有用的系统。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言3
1 材料与方法4
1.1 材料 4
试剂4
1.1.2 细胞系4
1.2 方法 4
1.2.1 建立稳定表达鸡BCRP转运体的MDCK细胞模型MDCKchBCRP
4
1.2.2 MDCKchBCR细胞系的验证4
1.2.3 MDCK—chBCRP 细胞系的应用5
1.2.4 统计分析6
2 结果与分析6
2.1 慢病毒载体系统介导MDCK细胞系中功能性鸡BCRP的产生
6
2.1.1 稳定表达鸡BCRP的MDCK细胞系的建立6
2.1.2 Western Blot 法和荧光法检测BCRP蛋白表达情况
6
2.1.3 流式法检测MDCKchBCRP细胞的纯度7
2.2 MDCKchAbcg 2细胞的功能转运活性8
2.2.1 米托蒽醌蓄积实验8
2.2.2 细胞毒性分析9
2.3 通过MDCKchAbcg2细胞从常用兽药中筛选BCRP底物
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0
3 讨论 11
致谢 12
参考文献 13
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引言3
1 材料与方法4
1.1 材料 4
试剂4
1.1.2 细胞系4
1.2 方法 4
1.2.1 建立稳定表达鸡BCRP转运体的MDCK细胞模型MDCKchBCRP
4
1.2.2 MDCKchBCR细胞系的验证4
1.2.3 MDCK—chBCRP 细胞系的应用5
1.2.4 统计分析6
2 结果与分析6
2.1 慢病毒载体系统介导MDCK细胞系中功能性鸡BCRP的产生
6
2.1.1 稳定表达鸡BCRP的MDCK细胞系的建立6
2.1.2 Western Blot 法和荧光法检测BCRP蛋白表达情况
6
2.1.3 流式法检测MDCKchBCRP细胞的纯度7
2.2 MDCKchAbcg 2细胞的功能转运活性8
2.2.1 米托蒽醌蓄积实验8
2.2.2 细胞毒性分析9
2.3 通过MDCKchAbcg2细胞从常用兽药中筛选BCRP底物
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