鸡传染性支气管炎病毒（h120株）疫苗耐热保护剂的初步研究
良好的疫苗冻干耐热保护剂不仅为疫苗的冷链运输和贮藏提供了便利，使疫苗能在较高温度下保存较长时间，并且保证了活疫苗的效价。本试验以蔗糖、明胶、EDTA、甘露醇、谷氨酸钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等为主要原料按照不同的比例配制成4种耐热保护剂，分别与鸡传染性支气管炎病毒（H120）弱毒原液按一定比例混合，通过对疫苗冻干，制备出冻干疫苗。然后通过形态观察、残水测定、冻干及耐热损失测定评价耐热保护剂的保护效果。结果显示，按8%蔗糖、1%明胶、2%EDTA、3%甘露醇、3%谷氨酸钠、1%磷酸氢二钾、0.52%磷酸二氢钾、3%BSA、1.5%甲硫氨酸的比例配制成配方3号的耐热保护剂对鸡传染性支气管炎病毒（H120株）疫苗在冻干过程中的保护效果最好。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 试验材料 2
1.1.1 耐热保护剂材料2
1.1.2 试验用毒株2
1.2.2 试验用鸡胚2
1.2.3 试验用器材及设备2
1.2 试验方法2
1.2.1 耐热保护剂配方的配制2
1.2.2 配苗与冷冻干燥方法2
1.2.3 疫苗形态的观察3
1.2.4 疫苗残水的测定3
1.2.5 疫苗冻干损失及耐热性能测定4
2 结果与分析4
2. 1 冻干疫苗的形态4
2. 2 冻干疫苗残余水分的测定结果5
2. 3 疫苗冻干损失及耐热性能测定结果5
3 讨论 5
3. 1 鸡传染性支气管炎疫苗样品的外观形态6
3. 2 鸡传染性支气管炎疫苗样品的残余水分6
3. 3 鸡传染性支气管炎疫苗样品的冻干损失及耐热性能6
3. 4 总结6
致谢6
参考文献6
鸡传染性支气管炎病毒（H120株）疫苗耐热保护剂的初步研究
引言
鸡传染性支气管炎（A *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
vian Infectious Bronchitis, IB)是由冠状病毒科冠状病毒属鸡传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus, IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触传染性呼吸道疾病。感染鸡生长受阻、耗料增加、产蛋和蛋质下降、死亡淘汰率增加，并发感染产生气囊炎，导致肉鸡加工中的废弃，因此常给养鸡业造成巨大的经济损失。临床上使用活疫苗免疫接种是预防IB的主要防治方法之一，常用M41型的弱毒苗如H120、H52，其中H120毒力较弱，对雏鸡安全，H52毒力较强，适用于20日龄以上的鸡。
当前动物疫苗中冻干活疫苗占有相当大的比例，但其热稳定性和保护功能差，而且产品对冷链的要求高，2～8℃条件下，保存期只有3～6个月，大多需要在15℃以下保存，这给疫苗的储存和运输带来很大的困难，并且容易导致疫苗效价下降或失效，导致免疫失败[1]。
目前国外的冻干疫苗已达到在28℃可以保存2年以上的先进水平，而国内的大多数冻干疫苗仍需在15℃低温保存方能保证其使用效果，这给生产、使用、运输、保存等都带来诸多不便。目前国内的冻干疫苗生产厂家在冻干保护剂的选择方面还主要考虑成本因素，因此对保护效果的改善幅度非常有限。另外，国内冻干疫苗生产中存在冻干保护剂开发力度不足、组方简单，保护剂效果差异较大等问题[2]。
张云浦[3]等完成了鸡传染性支气管炎冻干活疫苗的耐热保护剂，所配制的动物疫苗，在2～8℃条件保存2年以上，其疫苗效价稳定和对动物免疫效果均达到国外同类疫苗的水平。孙德君[4]等以海藻糖、明胶、叠氮钠、硫代硫酸钠等制成的耐热保护剂制备的鸡传染性支气管炎病毒HI抗原相较于常规方法保存期延长至3年并且提高了HI抗原的耐热性。林泽培[5]等以鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂冻干活疫苗的冷冻干燥试验为例， 描述了冻干耐热保护剂冻干活疫苗时的工艺改进过程，获得了较佳冻干工艺曲线。
良好的疫苗冻干工艺不仅为疫苗的冷链运输和贮藏提供了便利，使疫苗能在较高温度下保存较长时间，并且保证了活疫苗的效价。所以，本课题的意义在于研究优良的活疫苗冻干工艺，筛选出具有较好耐热保护作用的耐热保护剂，使活疫苗在储存、运输、使用等方面更方便、更经济并保证疫苗的有效性。
1 材料与方法
1．1 试验材料
1．1．1 耐热保护剂材料 蔗糖（上海将来试剂有限公司）、明胶（上海将来试剂有限公司）、EDTA（上海将来试剂有限公司）、甘露醇（北京鼎国昌盛生物技术有限公司）、谷氨酸钠（上海将来试剂有限公司）、磷酸氢二钾（西陇化工股份有限公司）、磷酸二氢钾（江苏永华精细化学品有限公司）、BSA（BIOSHARP）、甲硫氨酸（GENVIEW）。
1．1．2 试验用毒株 鸡传染性支气管炎病毒弱毒H120株（南京天邦生物科技有限公司提供）。
1. 1. 3 试验用鸡胚 SPF鸡胚（南京天邦生物科技有限公司提供）。
1. 1. 4 试验用器材及设备 5mL青瓶及瓶塞、精密电子天平、移液器、磁力搅拌器（CRYSTAL）、超净台、真空冷冻干燥机（VirTis）、恒温箱、冰箱、真空干燥箱。
1．2 试验方法
1. 2. 1 耐热保护剂配方的配制
经查阅文献[311]，选取蔗糖、明胶、EDTA、甘露醇、谷氨酸钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、BSA和甲硫氨酸按一定比例组成4个试验配方（具体配比见表1）。在配制耐热保护剂时，大分子物质和小分子物质配合能有效地增强保护剂的保护作用。因大分子的物质能够构成冻干样品的多孔构架，而小分子的物质的主要作用是防止蛋白质变性以及防止干燥状态下微生物的氧化作用。
表1 耐热保护剂配方
配方号
A部分（g）
B部分(g)
蔗糖
明胶
EDTA
甘露醇
谷氨酸钠
磷酸氢二钾
磷酸二氢钾
BSA
甲硫氨酸
1
8
1
2
1
3
1
0.52
3
1.5
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 试验材料 2
1.1.1 耐热保护剂材料2
1.1.2 试验用毒株2
1.2.2 试验用鸡胚2
1.2.3 试验用器材及设备2
1.2 试验方法2
1.2.1 耐热保护剂配方的配制2
1.2.2 配苗与冷冻干燥方法2
1.2.3 疫苗形态的观察3
1.2.4 疫苗残水的测定3
1.2.5 疫苗冻干损失及耐热性能测定4
2 结果与分析4
2. 1 冻干疫苗的形态4
2. 2 冻干疫苗残余水分的测定结果5
2. 3 疫苗冻干损失及耐热性能测定结果5
3 讨论 5
3. 1 鸡传染性支气管炎疫苗样品的外观形态6
3. 2 鸡传染性支气管炎疫苗样品的残余水分6
3. 3 鸡传染性支气管炎疫苗样品的冻干损失及耐热性能6
3. 4 总结6
致谢6
参考文献6
鸡传染性支气管炎病毒（H120株）疫苗耐热保护剂的初步研究
引言
鸡传染性支气管炎（A *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
vian Infectious Bronchitis, IB)是由冠状病毒科冠状病毒属鸡传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus, IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触传染性呼吸道疾病。感染鸡生长受阻、耗料增加、产蛋和蛋质下降、死亡淘汰率增加，并发感染产生气囊炎，导致肉鸡加工中的废弃，因此常给养鸡业造成巨大的经济损失。临床上使用活疫苗免疫接种是预防IB的主要防治方法之一，常用M41型的弱毒苗如H120、H52，其中H120毒力较弱，对雏鸡安全，H52毒力较强，适用于20日龄以上的鸡。
当前动物疫苗中冻干活疫苗占有相当大的比例，但其热稳定性和保护功能差，而且产品对冷链的要求高，2～8℃条件下，保存期只有3～6个月，大多需要在15℃以下保存，这给疫苗的储存和运输带来很大的困难，并且容易导致疫苗效价下降或失效，导致免疫失败[1]。
目前国外的冻干疫苗已达到在28℃可以保存2年以上的先进水平，而国内的大多数冻干疫苗仍需在15℃低温保存方能保证其使用效果，这给生产、使用、运输、保存等都带来诸多不便。目前国内的冻干疫苗生产厂家在冻干保护剂的选择方面还主要考虑成本因素，因此对保护效果的改善幅度非常有限。另外，国内冻干疫苗生产中存在冻干保护剂开发力度不足、组方简单，保护剂效果差异较大等问题[2]。
张云浦[3]等完成了鸡传染性支气管炎冻干活疫苗的耐热保护剂，所配制的动物疫苗，在2～8℃条件保存2年以上，其疫苗效价稳定和对动物免疫效果均达到国外同类疫苗的水平。孙德君[4]等以海藻糖、明胶、叠氮钠、硫代硫酸钠等制成的耐热保护剂制备的鸡传染性支气管炎病毒HI抗原相较于常规方法保存期延长至3年并且提高了HI抗原的耐热性。林泽培[5]等以鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂冻干活疫苗的冷冻干燥试验为例， 描述了冻干耐热保护剂冻干活疫苗时的工艺改进过程，获得了较佳冻干工艺曲线。
良好的疫苗冻干工艺不仅为疫苗的冷链运输和贮藏提供了便利，使疫苗能在较高温度下保存较长时间，并且保证了活疫苗的效价。所以，本课题的意义在于研究优良的活疫苗冻干工艺，筛选出具有较好耐热保护作用的耐热保护剂，使活疫苗在储存、运输、使用等方面更方便、更经济并保证疫苗的有效性。
1 材料与方法
1．1 试验材料
1．1．1 耐热保护剂材料 蔗糖（上海将来试剂有限公司）、明胶（上海将来试剂有限公司）、EDTA（上海将来试剂有限公司）、甘露醇（北京鼎国昌盛生物技术有限公司）、谷氨酸钠（上海将来试剂有限公司）、磷酸氢二钾（西陇化工股份有限公司）、磷酸二氢钾（江苏永华精细化学品有限公司）、BSA（BIOSHARP）、甲硫氨酸（GENVIEW）。
1．1．2 试验用毒株 鸡传染性支气管炎病毒弱毒H120株（南京天邦生物科技有限公司提供）。
1. 1. 3 试验用鸡胚 SPF鸡胚（南京天邦生物科技有限公司提供）。
1. 1. 4 试验用器材及设备 5mL青瓶及瓶塞、精密电子天平、移液器、磁力搅拌器（CRYSTAL）、超净台、真空冷冻干燥机（VirTis）、恒温箱、冰箱、真空干燥箱。
1．2 试验方法
1. 2. 1 耐热保护剂配方的配制
经查阅文献[311]，选取蔗糖、明胶、EDTA、甘露醇、谷氨酸钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、BSA和甲硫氨酸按一定比例组成4个试验配方（具体配比见表1）。在配制耐热保护剂时，大分子物质和小分子物质配合能有效地增强保护剂的保护作用。因大分子的物质能够构成冻干样品的多孔构架，而小分子的物质的主要作用是防止蛋白质变性以及防止干燥状态下微生物的氧化作用。
表1 耐热保护剂配方
配方号
A部分（g）
B部分(g)
蔗糖
明胶
EDTA
甘露醇
谷氨酸钠
磷酸氢二钾
磷酸二氢钾
BSA
甲硫氨酸
1
8
1
2
1
3
1
0.52
3
1.5
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