丁酸钠对雪山黄鸡种公鸡小肠组织形态的影响
为了研究丁酸钠对雪山黄鸡种公鸡小肠组织形态的影响。选取22周龄雪山黄鸡2号公鸡300只，随机分为2组，分别饲喂基础饲粮和0.05%丁酸钠饲粮，每组6个重复，每个重复25只，饲喂周期为22周龄到30周龄。结果显示，HE染色观察小肠组织形态无明显变化；通过测量小肠绒毛高度与阴窝深度结果表明，在雪山黄鸡种公鸡基础日粮中添加0.05%丁酸钠可提高十二指肠绒毛高度和绒毛高度与阴窝深度的比值,但差异不显著（P>0.05）；同时，与对照组相比，实验组空肠绒毛高度表现出差异不显著升高（P>0.05）；另外，回肠绒毛高度和绒毛高度与阴窝深度的比值在实验组差异不显著升高（P>0.05）。由此可知，丁酸钠在一定程度上能促进雪山黄种公鸡肠绒毛增长、隐窝变浅、提高绒毛高度与隐窝深度的比值,增加肠绒毛整齐度,减轻肠黏膜损伤。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
1.1 实验材料 3
1.1.1 实验动物3
1.1.2 饲养管理3
1.1.3 实验设计3
1.2 实验方法 3
1.2.1 样品采集3
1.2.2 小肠组织包埋、切片3
1.2.3 小肠组织HE染色3
2 主要试剂和设备3
2.1 实验过程中主要实验试剂4
2.2 实验过程中使用的主要实验设备4
3 数据处理4
4 结果分析 4
4.1小肠HE染色图4
4.2小肠观察数据图 5
4.3屠宰分析图 6
5 讨论 6
6 致谢 6
7 参考文献 7
丁酸钠对雪山黄鸡种公鸡小肠组织形态的影响
引言
丁酸钠（Sodium Butyrate）为白色粉末，具有吸潮性，气味呈特殊的奶酪酸败味，对光、热稳定。丁酸钠的有效成分是一种短链挥发性脂肪酸丁酸，游离的丁酸具有特殊气味，且以非离子弥散性吸收为主要吸收方式。丁酸钠是正丁酸的钠盐，几乎所有的体组织都能代谢丁酸，丁酸在外周组织能被 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
迅速氧化,用于脂肪合成，也可以进入乳腺合成乳脂(Bergmann）等，动物采食后能在肠道中释放丁酸。丁酸是一种微生物调节剂，能够改善胃肠道技能，提高生产性能。
有研究表明，丁酸钠发挥重要作用主要是由于其广泛的生物学功能，而不是由于其酸性特征。同时，众所周知为了促进动物加快生长，提高饲料的利用率，降低动物死亡率，加强改善动物的繁殖性能，人们经常会在饲料中添加低剂量的抗生素。但是，随着抗生素的长期使用，人们发现了很多由于使用抗生素而出现的许多负面效应，包括动物产品中的药物残留、病原菌的耐药性增加等一系列问题。所以在2006年1月1日，欧盟全面禁止在饲料中添加以保健促生长为目的的抗生素类饲料添加剂，因此寻找抗生素类促生长添加剂的替代品迫在眉睫。虽然国内外对抗生素等替代品研究做了大量研究工作，但是到目前为止还没有研制出完全替代抗生素的产品。
小肠是动物进食的食物消化吸收的主要场所，小肠的正常结构与功能是养分消化吸收和动物正常生长的生理学基础，其中小肠的隐窝深度、肠绒毛高度、豁膜厚度及绒毛表面积这几个指标是衡量小肠的消化吸收功能的重要指标。营养生理学的研究也表明V/C值综合反映小肠的功能状况，比值增高表明消化吸收功能增强韩正康。目前对丁酸钠的研究在仔猪肠道的影响比较多，如王继凤等人。在仔猪日粮中添加100mg/kg丁酸钠发现，相对于对照组，添加组仔猪的空肠、回肠勃膜结构完整，层次清晰，肠绒毛很粗壮、排列的也十分整齐，使绒毛高度与隐窝深度的比值（VH/DC）增加很多。所以为了全面了解丁酸钠会对雪山黄鸡种公鸡的促生长作用机制和替代抗生素的可行性，本次试验将通过组织切片的方法检测小肠绒毛高度、隐窝深度等数据，从肠道组织形态方面初步探讨日粮中添加丁酸钠对雪山黄鸡种公鸡生长性能影响的作用机制。
1 材料与方法
1．1 实验材料
1.1.1 实验动物 实验动物为300只22周龄体重相近、健康无病的雪山黄鸡，由江苏立华天牧种禽鸡场提供。饲喂添加0.05%丁酸钠日粮到30周龄，进行屠宰，采集小肠组织进行实验。饲料级丁酸钠来自南京恩特精细化工厂。试验地点江苏立华天牧种禽鸡场。
1.1.2 实验动物及饲养管理 选用22周龄健康雪山黄鸡种公鸡300只，采用笼养的饲养方式，24 h光照，电暖气及红外线灯取暖，自由采食和饮水。
1.1.3 实验设计 选取300只22周龄雪山黄鸡种公鸡平均分成两组进行饲养，实验组喂养添加0.05%丁酸钠日粮饲养，在饲养的第30周进行屠宰并进行实验，实验组与对照组各屠宰6只种公鸡进行实验。
1．2 实验方法
1.2.1 样品采集 实验期结束后宰杀雪山黄鸡，采集其小肠，并置于4%多聚甲醛做固定样，在液氮中做暂时冷存。
1.2.2 小肠组织包埋、切片
（1）小肠组织，切下正方体状组织块进行脱水处理，脱水试剂体积为组织块体积的5到10倍（下同)。70%酒精1h，80%酒精1h，90%酒精1h（分两次，各30min），95%酒精1h（分两次，各30min），100%酒精Ⅰ1h，100%酒精Ⅱ1h，100%酒精Ⅲ2h。
（2）对组织块透明，方法为50%二甲苯+50%石蜡处理30min，石蜡Ⅰ1h，石蜡Ⅱ真空过夜（>6h)，上述操作均在70℃干燥箱内完成。
（3）组织包埋，将组织块放入模具底部，倒入液体石蜡，在石蜡中插入条状纸带对蜡块进行标记，室温冷却，待蜡块在模具内成型后在蜡块上方补充少量液体石蜡，冷却后取出蜡块。
（4）蜡块切片，在切片机上切厚度为5μm的组织，在42℃水浴中展开，载玻片捞取组织，在42℃烤片6到8个小时。
1.2.3 小肠组织HE染色
（1）切片脱蜡复水，方法为切片插入切片架，放入盒子内100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ各7min，二甲苯50%+酒精50%处理5min，100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ各5min,90%酒精、70%酒精、50%酒精各2min，蒸馏水2min（摇床，两边）。
（2）苏木素染色1.5min，自来水冲洗4min，蒸馏水摇床6min，50%酒精、70%酒精各2min脱水Ⅰ。
（3）伊红染色10s，90%酒精2min以洗去残留的伊红。90%酒精30s、100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ各2min以脱水Ⅱ，50%酒精+50%二甲苯4min、二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5min以透明。
（4）中性树脂胶封片，封片迅速以避免二甲苯风干。
2主要试剂和设备
2．1 实验试剂
主要试剂
产地
兔抗人AR特异性抗体
Santa Cruz公司
鼠抗兔ER特异性抗体
Santa Cruz公司
HE（苏木精伊红）染液
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
1.1 实验材料 3
1.1.1 实验动物3
1.1.2 饲养管理3
1.1.3 实验设计3
1.2 实验方法 3
1.2.1 样品采集3
1.2.2 小肠组织包埋、切片3
1.2.3 小肠组织HE染色3
2 主要试剂和设备3
2.1 实验过程中主要实验试剂4
2.2 实验过程中使用的主要实验设备4
3 数据处理4
4 结果分析 4
4.1小肠HE染色图4
4.2小肠观察数据图 5
4.3屠宰分析图 6
5 讨论 6
6 致谢 6
7 参考文献 7
丁酸钠对雪山黄鸡种公鸡小肠组织形态的影响
引言
丁酸钠（Sodium Butyrate）为白色粉末，具有吸潮性，气味呈特殊的奶酪酸败味，对光、热稳定。丁酸钠的有效成分是一种短链挥发性脂肪酸丁酸，游离的丁酸具有特殊气味，且以非离子弥散性吸收为主要吸收方式。丁酸钠是正丁酸的钠盐，几乎所有的体组织都能代谢丁酸，丁酸在外周组织能被 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
迅速氧化,用于脂肪合成，也可以进入乳腺合成乳脂(Bergmann）等，动物采食后能在肠道中释放丁酸。丁酸是一种微生物调节剂，能够改善胃肠道技能，提高生产性能。
有研究表明，丁酸钠发挥重要作用主要是由于其广泛的生物学功能，而不是由于其酸性特征。同时，众所周知为了促进动物加快生长，提高饲料的利用率，降低动物死亡率，加强改善动物的繁殖性能，人们经常会在饲料中添加低剂量的抗生素。但是，随着抗生素的长期使用，人们发现了很多由于使用抗生素而出现的许多负面效应，包括动物产品中的药物残留、病原菌的耐药性增加等一系列问题。所以在2006年1月1日，欧盟全面禁止在饲料中添加以保健促生长为目的的抗生素类饲料添加剂，因此寻找抗生素类促生长添加剂的替代品迫在眉睫。虽然国内外对抗生素等替代品研究做了大量研究工作，但是到目前为止还没有研制出完全替代抗生素的产品。
小肠是动物进食的食物消化吸收的主要场所，小肠的正常结构与功能是养分消化吸收和动物正常生长的生理学基础，其中小肠的隐窝深度、肠绒毛高度、豁膜厚度及绒毛表面积这几个指标是衡量小肠的消化吸收功能的重要指标。营养生理学的研究也表明V/C值综合反映小肠的功能状况，比值增高表明消化吸收功能增强韩正康。目前对丁酸钠的研究在仔猪肠道的影响比较多，如王继凤等人。在仔猪日粮中添加100mg/kg丁酸钠发现，相对于对照组，添加组仔猪的空肠、回肠勃膜结构完整，层次清晰，肠绒毛很粗壮、排列的也十分整齐，使绒毛高度与隐窝深度的比值（VH/DC）增加很多。所以为了全面了解丁酸钠会对雪山黄鸡种公鸡的促生长作用机制和替代抗生素的可行性，本次试验将通过组织切片的方法检测小肠绒毛高度、隐窝深度等数据，从肠道组织形态方面初步探讨日粮中添加丁酸钠对雪山黄鸡种公鸡生长性能影响的作用机制。
1 材料与方法
1．1 实验材料
1.1.1 实验动物 实验动物为300只22周龄体重相近、健康无病的雪山黄鸡，由江苏立华天牧种禽鸡场提供。饲喂添加0.05%丁酸钠日粮到30周龄，进行屠宰，采集小肠组织进行实验。饲料级丁酸钠来自南京恩特精细化工厂。试验地点江苏立华天牧种禽鸡场。
1.1.2 实验动物及饲养管理 选用22周龄健康雪山黄鸡种公鸡300只，采用笼养的饲养方式，24 h光照，电暖气及红外线灯取暖，自由采食和饮水。
1.1.3 实验设计 选取300只22周龄雪山黄鸡种公鸡平均分成两组进行饲养，实验组喂养添加0.05%丁酸钠日粮饲养，在饲养的第30周进行屠宰并进行实验，实验组与对照组各屠宰6只种公鸡进行实验。
1．2 实验方法
1.2.1 样品采集 实验期结束后宰杀雪山黄鸡，采集其小肠，并置于4%多聚甲醛做固定样，在液氮中做暂时冷存。
1.2.2 小肠组织包埋、切片
（1）小肠组织，切下正方体状组织块进行脱水处理，脱水试剂体积为组织块体积的5到10倍（下同)。70%酒精1h，80%酒精1h，90%酒精1h（分两次，各30min），95%酒精1h（分两次，各30min），100%酒精Ⅰ1h，100%酒精Ⅱ1h，100%酒精Ⅲ2h。
（2）对组织块透明，方法为50%二甲苯+50%石蜡处理30min，石蜡Ⅰ1h，石蜡Ⅱ真空过夜（>6h)，上述操作均在70℃干燥箱内完成。
（3）组织包埋，将组织块放入模具底部，倒入液体石蜡，在石蜡中插入条状纸带对蜡块进行标记，室温冷却，待蜡块在模具内成型后在蜡块上方补充少量液体石蜡，冷却后取出蜡块。
（4）蜡块切片，在切片机上切厚度为5μm的组织，在42℃水浴中展开，载玻片捞取组织，在42℃烤片6到8个小时。
1.2.3 小肠组织HE染色
（1）切片脱蜡复水，方法为切片插入切片架，放入盒子内100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ各7min，二甲苯50%+酒精50%处理5min，100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ各5min,90%酒精、70%酒精、50%酒精各2min，蒸馏水2min（摇床，两边）。
（2）苏木素染色1.5min，自来水冲洗4min，蒸馏水摇床6min，50%酒精、70%酒精各2min脱水Ⅰ。
（3）伊红染色10s，90%酒精2min以洗去残留的伊红。90%酒精30s、100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ各2min以脱水Ⅱ，50%酒精+50%二甲苯4min、二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5min以透明。
（4）中性树脂胶封片，封片迅速以避免二甲苯风干。
2主要试剂和设备
2．1 实验试剂
主要试剂
产地
兔抗人AR特异性抗体
Santa Cruz公司
鼠抗兔ER特异性抗体
Santa Cruz公司
HE（苏木精伊红）染液
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