雄激素受体和雌激素受体在保育猪下丘脑垂体和卵巢上的表达研究
为了探索保育猪雄激素受体(Androgen Receptor, AR)与雌激素受体(Estrogen Receptor, ER)在猪的下丘脑、垂体、卵巢组织上的表达规律，本实验选用8只42日龄的杜长嘉猪进行饲养，饲养28天后采样，通过免疫组织化学染色方法观察AR与ER在下丘脑、垂体、卵巢、子宫组织中的表达情况，结果显示AR在保育猪下丘脑细胞与垂体细胞的细胞核中有表达；在卵巢的各级卵泡的卵泡细胞、颗粒细胞以及卵母细胞的细胞质中有明显的表达，在间质细胞的细胞质中也有表达；在子宫的上皮细胞、子宫肌层肌细胞及子宫内膜基质的细胞质中都有表达。ER在垂体细胞的细胞质中有表达；在卵巢初级卵泡的卵泡细胞的细胞质、次级卵泡、闭锁卵泡的颗粒细胞的细胞质以及原始卵泡的卵母细胞的细胞核中有表达；在子宫上皮细胞、子宫内膜基质的细胞质中有表达。雄激素受体与雌激素受体对保育猪下丘脑垂体卵巢轴的生长发育可能有一定的影响，或者是能调控保育猪下丘脑垂体卵巢轴激素的合成与分泌及释放。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words2
引言2
1 材料与方法2
1.1 实验材料 3
1.1.1 实验动物3
1.1.2 主要试剂3
1.1.3 仪器设备3
1.2 方法 3
1.2.1 样品采集3
1.2.2 下丘脑垂体卵巢组织包埋、切片3
1.2.3 下丘脑垂体卵巢轴组织学观察3
1.2.4 下丘脑垂体卵巢蛋白AR、ER的组织化学染色4
2 结果与分析4
2.1 下丘脑、垂体、卵巢、子宫HE染色5
2.2 下丘脑、垂体、卵巢、子宫免疫组织化学染色5
3 讨论7
致谢8
参考文献8
雄激素受体和雌激素受体在保育猪下丘脑、垂体和卵巢上的表达研究
引言
雄激素与雌激素功能广泛，对猪的生长发育有很重要的影响。雄激素与雌激素的生物学作用分别需要通过特异的雄激素受体(Androgen Receptor, AR)与雌激素受体(Estrogen Receptor, *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
ER)介导，AR与ER均为核受体超家族成员之一。
雄激素受体在雄激素作用的发挥中起着重要的介导作用，是雄激素作用发挥的前提，对雄性动物的生长与发育有着积极的意义，雄激素受体分为细胞内受体和膜受体。而雌激素受体包括两大类，一是经典的核受体，包括在细胞核内表达的ERα和ERβ，它们介导雌激素的基因型效应；二是膜性受体，包括属于G蛋白偶联受体家族的GPER1(GPR30)、ERX和GαqER以及经典核受体的膜性成分，它们通过结合AP1、特异蛋白1（SP1）等增强字元件来发挥间接的转录调控功能，其中ERX和GαqER等似乎只在脑局部起作用，属于介导快速的非基因型效应[1]。
近年有不少关于雄激素受体和雌激素受体研究的文章。关于繁殖方面，Pope等[2]研究发现，小剂量的雄激素受体激动剂在增强卵巢的功能同时也抑制了子宫发挥其作用，得出雄激素受体活性的改变可以影响母猪的排卵率。王磊磊等[3]的研究发现，AR大量分布在妊娠山羊的卵巢的卵泡颗粒细胞和大黄体细胞，而且AR在黄体细胞上的表达量随着妊娠的进程有逐渐减弱的趋势。有研究表明ER的两种核受体ERα和ERβ在卵巢中均有表达，但ERαmRNA和蛋白的表达远少于ERβmRNA和蛋白。两者在卵巢和子宫中的表达存在明显的差异。ERαmRNA主要是位于膜细胞，在间隙细胞和生殖上皮细胞中也有少量表达[46]；ERβmRNA和蛋白在啮齿动物和人发情周期过程中的卵巢中有表达，表达主要在分布在发育卵泡的颗粒细胞中，ERβmRNA在初级卵泡和发育卵泡中的表达差不多，但至排卵前LH波峰出现过后，其表达开始减少。而在啮齿动物和人的子宫中，雌激素受体的表达以ERα为主，因为ERα可以诱导E2反应基因的表达[7]。
关于内分泌方面，Maejima等[8]的研究发现，AR在间脑的侧室前区、弓状核、下丘脑腹内侧核以及视交叉核上都显著表达。Huang等[9]的研究发现AR、ERα在公羊羔正在生长发育的垂体中的表达，尽管详细的作用机制还不清楚，但AR、ERα在绵羔羊的垂体前叶分泌功能的调节中起着重要的作用。郭军等[10]的研究指出雌激素受体ERα在垂体大多数细胞高水平表达，而另一受体ERβ处于中等水平表达。
AR与ER的广泛作用可以通过其广泛的分布得以体现，有研究[11]发现AR在生殖系统或非生殖系统的各种组织中广泛表达，生殖系统中包括睾丸、卵巢、前列腺、输精管、子宫等；非生殖系统的组织中包括肾上腺皮质、胸腺、甲状腺滤泡细胞、松果体、心肌、骨骼肌、平滑肌、人外周血白细胞、血小板、巨核细胞细胞、毛囊、汗腺、肝脏、等。不同组织中AR的表达水平会有差异，纵然在同一组织，处于不同发育阶段或在病理状态下，AR表达水平也会不相同。
ER的分布除了上述的位置外，还有研究[12]指出ERα主要分布在一些通常认为有雌激素效应的组织，比如乳腺、胎盘、肝脏、中枢神经系统、心血管系统和骨组织等。而ERβ主要分布在前列腺、睾丸、松果体、甲状腺、甲状旁腺、胰腺、胆囊、皮肤、淋巴组织和红细胞中，在ERβ表达的这些组织中ERα表达的很少或者检测不出来。
关于与AR与ER的研究很多，然而雄激素受体与雌激素受体在仔猪及保育猪中的研究可能较少。所以为了探索雄激素受体和雌激素受体在保育猪下丘脑、垂体和卵巢上的表达规律，为提高生产中畜禽繁殖性能提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 实验动物为8头52日龄体重相近、健康无隐睾的杜长嘉猪，由泰州饲养基地提供。正常饲养28天，结束后即处死杜长嘉猪，采集下丘脑、垂体、卵巢、子宫。
1.1.2 主要试剂
主要试剂
产地
兔抗人AR特异性抗体
Santa Cruz公司
鼠抗兔ER特异性抗体
Santa Cruz公司
免疫组化ABC染色试剂盒
北京中杉金桥生物技术有限公司
HE（苏木精伊红）染液
南京建成生物科技有限公司
动物切片石蜡（熔点6062℃）
上海国药集团化学试剂有限公司
APES（3氨丙基三乙氧基硅烷）
上海紫一试剂公司
DAB
Sigma公司
多聚甲醛
上海凌峰化学试剂有限公司
其他试剂
国产分析纯
1.1.3 主要仪器设备
主要仪器
产地
真空干燥箱
上海新苗医疗器械制造有限公司
全自动生物组织包埋机
浙江省金华市医疗设备厂
石蜡切片机Leica RM2235
上海徕卡仪器有限公司
展片机
浙江省金华市科迪仪器设备厂
烘片机Leica HI1220
上海徕卡仪器有限公司
微波炉
美的集团有限公司
脱色摇床TY80S
南京普阳科学仪器研究所
光学显微镜Nikon YS100
日本Nikon株式会社
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words2
引言2
1 材料与方法2
1.1 实验材料 3
1.1.1 实验动物3
1.1.2 主要试剂3
1.1.3 仪器设备3
1.2 方法 3
1.2.1 样品采集3
1.2.2 下丘脑垂体卵巢组织包埋、切片3
1.2.3 下丘脑垂体卵巢轴组织学观察3
1.2.4 下丘脑垂体卵巢蛋白AR、ER的组织化学染色4
2 结果与分析4
2.1 下丘脑、垂体、卵巢、子宫HE染色5
2.2 下丘脑、垂体、卵巢、子宫免疫组织化学染色5
3 讨论7
致谢8
参考文献8
雄激素受体和雌激素受体在保育猪下丘脑、垂体和卵巢上的表达研究
引言
雄激素与雌激素功能广泛，对猪的生长发育有很重要的影响。雄激素与雌激素的生物学作用分别需要通过特异的雄激素受体(Androgen Receptor, AR)与雌激素受体(Estrogen Receptor, *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
ER)介导，AR与ER均为核受体超家族成员之一。
雄激素受体在雄激素作用的发挥中起着重要的介导作用，是雄激素作用发挥的前提，对雄性动物的生长与发育有着积极的意义，雄激素受体分为细胞内受体和膜受体。而雌激素受体包括两大类，一是经典的核受体，包括在细胞核内表达的ERα和ERβ，它们介导雌激素的基因型效应；二是膜性受体，包括属于G蛋白偶联受体家族的GPER1(GPR30)、ERX和GαqER以及经典核受体的膜性成分，它们通过结合AP1、特异蛋白1（SP1）等增强字元件来发挥间接的转录调控功能，其中ERX和GαqER等似乎只在脑局部起作用，属于介导快速的非基因型效应[1]。
近年有不少关于雄激素受体和雌激素受体研究的文章。关于繁殖方面，Pope等[2]研究发现，小剂量的雄激素受体激动剂在增强卵巢的功能同时也抑制了子宫发挥其作用，得出雄激素受体活性的改变可以影响母猪的排卵率。王磊磊等[3]的研究发现，AR大量分布在妊娠山羊的卵巢的卵泡颗粒细胞和大黄体细胞，而且AR在黄体细胞上的表达量随着妊娠的进程有逐渐减弱的趋势。有研究表明ER的两种核受体ERα和ERβ在卵巢中均有表达，但ERαmRNA和蛋白的表达远少于ERβmRNA和蛋白。两者在卵巢和子宫中的表达存在明显的差异。ERαmRNA主要是位于膜细胞，在间隙细胞和生殖上皮细胞中也有少量表达[46]；ERβmRNA和蛋白在啮齿动物和人发情周期过程中的卵巢中有表达，表达主要在分布在发育卵泡的颗粒细胞中，ERβmRNA在初级卵泡和发育卵泡中的表达差不多，但至排卵前LH波峰出现过后，其表达开始减少。而在啮齿动物和人的子宫中，雌激素受体的表达以ERα为主，因为ERα可以诱导E2反应基因的表达[7]。
关于内分泌方面，Maejima等[8]的研究发现，AR在间脑的侧室前区、弓状核、下丘脑腹内侧核以及视交叉核上都显著表达。Huang等[9]的研究发现AR、ERα在公羊羔正在生长发育的垂体中的表达，尽管详细的作用机制还不清楚，但AR、ERα在绵羔羊的垂体前叶分泌功能的调节中起着重要的作用。郭军等[10]的研究指出雌激素受体ERα在垂体大多数细胞高水平表达，而另一受体ERβ处于中等水平表达。
AR与ER的广泛作用可以通过其广泛的分布得以体现，有研究[11]发现AR在生殖系统或非生殖系统的各种组织中广泛表达，生殖系统中包括睾丸、卵巢、前列腺、输精管、子宫等；非生殖系统的组织中包括肾上腺皮质、胸腺、甲状腺滤泡细胞、松果体、心肌、骨骼肌、平滑肌、人外周血白细胞、血小板、巨核细胞细胞、毛囊、汗腺、肝脏、等。不同组织中AR的表达水平会有差异，纵然在同一组织，处于不同发育阶段或在病理状态下，AR表达水平也会不相同。
ER的分布除了上述的位置外，还有研究[12]指出ERα主要分布在一些通常认为有雌激素效应的组织，比如乳腺、胎盘、肝脏、中枢神经系统、心血管系统和骨组织等。而ERβ主要分布在前列腺、睾丸、松果体、甲状腺、甲状旁腺、胰腺、胆囊、皮肤、淋巴组织和红细胞中，在ERβ表达的这些组织中ERα表达的很少或者检测不出来。
关于与AR与ER的研究很多，然而雄激素受体与雌激素受体在仔猪及保育猪中的研究可能较少。所以为了探索雄激素受体和雌激素受体在保育猪下丘脑、垂体和卵巢上的表达规律，为提高生产中畜禽繁殖性能提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 实验动物为8头52日龄体重相近、健康无隐睾的杜长嘉猪，由泰州饲养基地提供。正常饲养28天，结束后即处死杜长嘉猪，采集下丘脑、垂体、卵巢、子宫。
1.1.2 主要试剂
主要试剂
产地
兔抗人AR特异性抗体
Santa Cruz公司
鼠抗兔ER特异性抗体
Santa Cruz公司
免疫组化ABC染色试剂盒
北京中杉金桥生物技术有限公司
HE（苏木精伊红）染液
南京建成生物科技有限公司
动物切片石蜡（熔点6062℃）
上海国药集团化学试剂有限公司
APES（3氨丙基三乙氧基硅烷）
上海紫一试剂公司
DAB
Sigma公司
多聚甲醛
上海凌峰化学试剂有限公司
其他试剂
国产分析纯
1.1.3 主要仪器设备
主要仪器
产地
真空干燥箱
上海新苗医疗器械制造有限公司
全自动生物组织包埋机
浙江省金华市医疗设备厂
石蜡切片机Leica RM2235
上海徕卡仪器有限公司
展片机
浙江省金华市科迪仪器设备厂
烘片机Leica HI1220
上海徕卡仪器有限公司
微波炉
美的集团有限公司
脱色摇床TY80S
南京普阳科学仪器研究所
光学显微镜Nikon YS100
日本Nikon株式会社
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