五种猪瘟疫苗的ELISA抗体检测
五种猪瘟疫苗的ELISA抗体检测[20200507185856]
摘要：本试验选用了五个厂家生产的猪瘟疫苗分五组对70日龄的商品猪进行试验，另设一个空白对照组，通过检测免疫前及免疫后14d、28d的血清中的猪瘟抗体水平，来比较各种疫苗的免疫效果。结果表明，五种疫苗免疫后的抗体水平均比免疫前的抗体水平高，其中D疫苗平均抗体水平最高，合格率和阳性率均为80%，而E疫苗的免疫效果最差。
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关键字:猪瘟；疫苗；免疫效果
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言2
1 材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1试验仪器 2
1.1.2试验疫苗 2
1.1.3检测试剂 2
1.1.4试验动物 2
1.2方法3
1.2.1试验动物分组与免疫 3
1.2.2采血及处理 3
1.2.3抗体检测 3
2 检测结果与分析 3
2.1抗体检测结果 4
2.2 6个组初始抗体水平的方差分析 5
2.3 6个组第14d时抗体水平的多重比较 5
2.4 6个组第28d时抗体水平的多重比较 5
2.5 5种疫苗免疫的合格率和阳性率 5
3 影响免疫效果的因素 5
3.1猪自身遗传因素的影响 6
3.2猪体内母源抗体的干扰 6
3.3免疫抑制疾病的影响 6
3.4疫苗因素 6
3.4.1疫苗本身质量差 6
3.4.2疫苗的保存运输过程中温度控制不当 6
3.4.3疫苗使用不当 6
3.5免疫程序的因素 6
3.6免疫操作的因素 7
3.7免疫抑制性药物的滥用 7
4 讨论7
致谢7
参考文献8
五种猪瘟疫苗的ELISA抗体检测
引言
猪瘟(classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，遍布于全世界,世界 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
动物卫生组织（OIE）将此病列为A类传染病之一，野猪和家猪是猪瘟病毒（CSFV）唯一的自然宿主[1-3]。猪瘟是目前危害养猪业发展的主要传染病之一，也是给养猪业带来损失最直接和危害最为严重的疾病之一。我国研制的猪瘟兔化弱毒苗有效地控制了猪瘟的急性发作和大面积流行。但是近年来，猪瘟的流行形式、发病特点和病理变化都发生了变化，以温和型猪瘟和母猪持续感染引起的流产、死胎和新生仔猪死亡为主要特点，死亡率显著减少，而病程延长；许多地方出现了区域性大流行或零星散发病例，既有高死亡率的急性症状，又有持续性感染的温和症状，许多免疫猪群频繁发病，造成了很大的经济损失，给兽医工作者控制该病提出了挑战。目前，我国防控猪瘟的主要手段仍然以高密度防疫为主，实践中猪瘟免疫失败现象也时有发生，因此，了解猪场猪瘟疫苗的免疫效果，为该病的防控提供科学依据，具有重要的意义[3]。本试验利用间接ELISA的方法，检测了五种猪瘟疫苗的抗体水平，以便筛选出最适合本场的猪瘟疫苗。
1. 材料与方法
1.1材料
1.1.1试验仪器 微量移液器、一次性微量移液器的吸头、蒸馏水、温箱、酶标仪等。
1.1.2试验疫苗 猪瘟疫苗A（山东某生物制品厂），猪瘟疫苗B（南京某生物制品厂），猪瘟疫苗C（哈尔滨某生物制品厂），猪瘟疫苗D（广东某生物制品厂），猪瘟疫苗E（上海某生物制品厂），五种疫苗均为细胞苗。
1.1.3检测试剂 猪瘟抗体ELISA检测试剂盒，购买于爱德士公司。
1.1.4试验动物 上海新农饲料有限公司亭林场提供的70日龄健康商品猪。
1.2方法
1.2.1 试验动物分组与免疫 筛选30头70日龄商品猪，随机分成六组 ，试验1组注射A疫苗2头份，编号1~5；试验2组注射B疫苗2头份，编号6~10；试验3组注射C疫苗2头份，编号11~15；试验4组注射D疫苗1头份，编号16~20；试验5组注射E疫苗2头份，编号21~25；另设一组空白对照组，编号26~30，不免疫。免疫前一天及免疫后14d、28d，分别采血检测猪瘟抗体水平。
1.2.2 采血及处理 用5ml的无菌注射器对试验猪进行前腔静脉采血2~3ml，并放入无菌真空采血管内，采完后立即带回实验室进行血清分离，分离的方法是将所采集的血样置于37℃恒温箱中温浴30min，再经2000r/min离心5min，静置后取上层血清。
1.2.3 抗体检测 采用ELISA方法进行检测，按照试剂盒使用说明书进行操作：（1）使用时，先将试剂盒取出恢复至室温25℃左右，所有试剂充分混匀;
（2）在包被的微量反应板上分别将50μl样品稀释液加入每个检测孔和对照孔中;
（3）然后将50μl的阳性对照和阴性对照加入相应的对照孔中，每次更换新的吸头；
（4）分别将50μl的被检样品加入剩下的检测孔中，并做好记录，每次加样都要更换新的吸头；
（5）轻轻摇晃微量反应板，将反应板中的溶液充分混匀；
（6）用封条封闭反应板，置于25℃湿箱中孵育2h；
（7）用稀释好的洗涤液洗涤3次，每次洗涤时都要将洗涤液加满反应孔， 弃去反应孔中的洗涤液并拍干反应板；
（8）在每个反应孔中加入100μl的酶标二抗，用封条封闭，置于湿箱中反应30 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
min；
（9）反应完成后，重复步骤7；
（10）在每个反应孔中加入100μl的底物溶液，室温下避光反应10 min；
（11）待反应完成后，在每个反应孔中加入100μl的终止液，终止反应；
（12）用酶标仪在450nm 处测定各孔OD值；
（13）判定标准：阴性对照的平均OD值大于0.50，阳性对照的阻断率大于50%，该试验的检测结果才有效；
（14）阻断率=（阴性对照平均OD值-样品OD值）/阴性对照平均OD值×100%。如果阻断率≥40%，样品判为阳性；如果阻断率≤30%，样品应判为阴性；如果被检样品的阻断率在30%～40%，则判为可疑；抗体阻断率≥50%，则为抗体合格。
2.检测结果与分析
2.1抗体检测结果
表1 注射2头份A疫苗猪瘟抗体水平检测结果 单位：%
编号 日期 1 2 3 4 5 平均数
初始抗体 24 34 47 52 59 43.20±14.10
14d抗体 22 62 65 81 72 60.40±22.68
28d抗体 27 50 41 59 56 46.60±12.93
表2 注射2头份B疫苗猪瘟抗体水平检测结果 单位：%
编号 日期 6 7 8 9 10 平均数
初始抗体 21 34 46 51 60 42.40±15.21
14d抗体 34 46 55 65 61 52.20±12.44
28d抗体 26 53 63 50 55 49.40±13.94
摘要：本试验选用了五个厂家生产的猪瘟疫苗分五组对70日龄的商品猪进行试验，另设一个空白对照组，通过检测免疫前及免疫后14d、28d的血清中的猪瘟抗体水平，来比较各种疫苗的免疫效果。结果表明，五种疫苗免疫后的抗体水平均比免疫前的抗体水平高，其中D疫苗平均抗体水平最高，合格率和阳性率均为80%，而E疫苗的免疫效果最差。
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关键字:猪瘟；疫苗；免疫效果
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言2
1 材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1试验仪器 2
1.1.2试验疫苗 2
1.1.3检测试剂 2
1.1.4试验动物 2
1.2方法3
1.2.1试验动物分组与免疫 3
1.2.2采血及处理 3
1.2.3抗体检测 3
2 检测结果与分析 3
2.1抗体检测结果 4
2.2 6个组初始抗体水平的方差分析 5
2.3 6个组第14d时抗体水平的多重比较 5
2.4 6个组第28d时抗体水平的多重比较 5
2.5 5种疫苗免疫的合格率和阳性率 5
3 影响免疫效果的因素 5
3.1猪自身遗传因素的影响 6
3.2猪体内母源抗体的干扰 6
3.3免疫抑制疾病的影响 6
3.4疫苗因素 6
3.4.1疫苗本身质量差 6
3.4.2疫苗的保存运输过程中温度控制不当 6
3.4.3疫苗使用不当 6
3.5免疫程序的因素 6
3.6免疫操作的因素 7
3.7免疫抑制性药物的滥用 7
4 讨论7
致谢7
参考文献8
五种猪瘟疫苗的ELISA抗体检测
引言
猪瘟(classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，遍布于全世界,世界 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
动物卫生组织（OIE）将此病列为A类传染病之一，野猪和家猪是猪瘟病毒（CSFV）唯一的自然宿主[1-3]。猪瘟是目前危害养猪业发展的主要传染病之一，也是给养猪业带来损失最直接和危害最为严重的疾病之一。我国研制的猪瘟兔化弱毒苗有效地控制了猪瘟的急性发作和大面积流行。但是近年来，猪瘟的流行形式、发病特点和病理变化都发生了变化，以温和型猪瘟和母猪持续感染引起的流产、死胎和新生仔猪死亡为主要特点，死亡率显著减少，而病程延长；许多地方出现了区域性大流行或零星散发病例，既有高死亡率的急性症状，又有持续性感染的温和症状，许多免疫猪群频繁发病，造成了很大的经济损失，给兽医工作者控制该病提出了挑战。目前，我国防控猪瘟的主要手段仍然以高密度防疫为主，实践中猪瘟免疫失败现象也时有发生，因此，了解猪场猪瘟疫苗的免疫效果，为该病的防控提供科学依据，具有重要的意义[3]。本试验利用间接ELISA的方法，检测了五种猪瘟疫苗的抗体水平，以便筛选出最适合本场的猪瘟疫苗。
1. 材料与方法
1.1材料
1.1.1试验仪器 微量移液器、一次性微量移液器的吸头、蒸馏水、温箱、酶标仪等。
1.1.2试验疫苗 猪瘟疫苗A（山东某生物制品厂），猪瘟疫苗B（南京某生物制品厂），猪瘟疫苗C（哈尔滨某生物制品厂），猪瘟疫苗D（广东某生物制品厂），猪瘟疫苗E（上海某生物制品厂），五种疫苗均为细胞苗。
1.1.3检测试剂 猪瘟抗体ELISA检测试剂盒，购买于爱德士公司。
1.1.4试验动物 上海新农饲料有限公司亭林场提供的70日龄健康商品猪。
1.2方法
1.2.1 试验动物分组与免疫 筛选30头70日龄商品猪，随机分成六组 ，试验1组注射A疫苗2头份，编号1~5；试验2组注射B疫苗2头份，编号6~10；试验3组注射C疫苗2头份，编号11~15；试验4组注射D疫苗1头份，编号16~20；试验5组注射E疫苗2头份，编号21~25；另设一组空白对照组，编号26~30，不免疫。免疫前一天及免疫后14d、28d，分别采血检测猪瘟抗体水平。
1.2.2 采血及处理 用5ml的无菌注射器对试验猪进行前腔静脉采血2~3ml，并放入无菌真空采血管内，采完后立即带回实验室进行血清分离，分离的方法是将所采集的血样置于37℃恒温箱中温浴30min，再经2000r/min离心5min，静置后取上层血清。
1.2.3 抗体检测 采用ELISA方法进行检测，按照试剂盒使用说明书进行操作：（1）使用时，先将试剂盒取出恢复至室温25℃左右，所有试剂充分混匀;
（2）在包被的微量反应板上分别将50μl样品稀释液加入每个检测孔和对照孔中;
（3）然后将50μl的阳性对照和阴性对照加入相应的对照孔中，每次更换新的吸头；
（4）分别将50μl的被检样品加入剩下的检测孔中，并做好记录，每次加样都要更换新的吸头；
（5）轻轻摇晃微量反应板，将反应板中的溶液充分混匀；
（6）用封条封闭反应板，置于25℃湿箱中孵育2h；
（7）用稀释好的洗涤液洗涤3次，每次洗涤时都要将洗涤液加满反应孔， 弃去反应孔中的洗涤液并拍干反应板；
（8）在每个反应孔中加入100μl的酶标二抗，用封条封闭，置于湿箱中反应30 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
min；
（9）反应完成后，重复步骤7；
（10）在每个反应孔中加入100μl的底物溶液，室温下避光反应10 min；
（11）待反应完成后，在每个反应孔中加入100μl的终止液，终止反应；
（12）用酶标仪在450nm 处测定各孔OD值；
（13）判定标准：阴性对照的平均OD值大于0.50，阳性对照的阻断率大于50%，该试验的检测结果才有效；
（14）阻断率=（阴性对照平均OD值-样品OD值）/阴性对照平均OD值×100%。如果阻断率≥40%，样品判为阳性；如果阻断率≤30%，样品应判为阴性；如果被检样品的阻断率在30%～40%，则判为可疑；抗体阻断率≥50%，则为抗体合格。
2.检测结果与分析
2.1抗体检测结果
表1 注射2头份A疫苗猪瘟抗体水平检测结果 单位：%
编号 日期 1 2 3 4 5 平均数
初始抗体 24 34 47 52 59 43.20±14.10
14d抗体 22 62 65 81 72 60.40±22.68
28d抗体 27 50 41 59 56 46.60±12.93
表2 注射2头份B疫苗猪瘟抗体水平检测结果 单位：%
编号 日期 6 7 8 9 10 平均数
初始抗体 21 34 46 51 60 42.40±15.21
14d抗体 34 46 55 65 61 52.20±12.44
28d抗体 26 53 63 50 55 49.40±13.94
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