母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体氧化应激损伤的影响
本研究以长白母猪为研究对象，将样本分为两组高膘组与低膘组。并检测样本的丙二醛、CAT、SOD、总一氧化氮、羟自由基、过氧化氢与总一氧化氮七个指标指标以检测母猪胎盘组织的氧化应激程度。利用JC-1染色法观察MPTP。使用real-time PCR法检测线粒体氧化应激相关基因mRNA表达，real-time PCR法检测线粒体生物合成和融合相关基因mRNA、线粒体基因mRNA表达及线粒体DNA拷贝数。结果显示在氧化应激的指标测定中，MDA与过氧化氢的结果在高膘组与低膘组中有明显差异(p<0.05)，总一氧化氮没有较大影响，同时高膘妊娠组的胎盘组织抗氧化能力与低膘组差异性显著(P<0.05)。根据JC-1荧光染色观察高膘组与低膘组的MPTP差异性显著（P<0.01）。高膘妊娠明显影响线粒体膜的通透性。线粒体氧化基因与线粒体生物融合相关基因线粒体基因与DNA的拷贝数都有着明显的差异性。高膘妊娠对于胎盘绒毛线粒体的氧化应激损伤在纯种的长白山母猪上也有相似的结果。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引言1
1.材料与方法2
1.1实验动物和试验方法 2
1.2样本处理 2
1.2.1提取mRNA 2
1.2.2提取蛋白质2
1.3检测指标3
1.3.1MDA含量测定3
1.3.2过氧化氢含量测定4
1.3.3总一氧化氮含量测定4
1.3.4抗氧化酶CAT活性含量测定5
1.3.5歧化酶SOD活性含量测定5
1.3.6超氧阴离子含量测定6
1.3.7羟自由基活力单位测定6
1.5 JC1荧光染色检测胎盘绒毛线粒体膜电位7
1.6 Realtime PCR检测mRNA的表达 8
2.结果与分析8
2.1 母猪高膘妊娠对胎盘绒毛氧化应激的影响9
2.2母猪高膘妊娠对胎盘绒毛抗氧化能力的影响9
2.3母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体膜通透性的影响9
2.4 母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体功能相关基因表达及 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
mtDNA数量的影响10
3讨论11
3.1 母猪高膘妊娠对胎盘绒毛氧化应激的影响11
3.2母猪高膘妊娠对胎盘绒毛抗氧化能力的影响12
3.3母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体膜通透性的影响12
3.4 母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体功能相关基因表达及mtDNA数量的影响12
4.结果12
致谢12
参考文献12 母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体氧化应激损伤的影响
引言
引言：在现有研究中证实母猪的膘情与产子性能有重要的关系。同时研究表明母体妊娠肥胖引起的繁殖力下降与胎盘脂肪毒性的发生有关。脂肪毒性即由脂肪异位沉积引起的组织细胞氧化应激、炎症反应和细胞凋亡，进而损伤组织细胞的结构和功能。虽然在人、大鼠和山羊中均证实妊娠肥胖可引起胎盘脂肪毒性的发 生，但在猪高膘妊娠是否同样会引起胎盘脂毒性的发生还未见报道。在生产过程中猪场大多数以母猪背膘膘情作为判断母猪机体健康水平的指标，因为膘情在一定程度上可以体现母猪处于不同的生理状况时的机体生产性能。氧化应激是指由于机体或组织与细胞在各种不同的因素下导致体内的过氧化脂的氧化产物增多，从而使机体受到组织细胞的氧化损伤。同时氧化应激也会产生相应的非常多的氧化中间产物，例如：过氧化氢化物、丙二醛、脂氢过氧化物、单线态氧及其相关裂解的产物。这些物质的化学性质相当活泼。可能与脂质、蛋白质、DNA均产生反应。从而导致机体的细胞结构和相应功能受到影响，同时脂质过氧化氢产物有极不稳定容易产生一系列含氧功能基的产物。所以本次试验选择总NO、OH、H2O2、超氧阴离子作为测量指标。在生产过程中猪场大多数以母猪背膘膘情作为判断母猪机体健康水平的指标，因为膘情在一定程度上可以体现母猪处于不同的生理状况时的机体生产性能。本研究以长白母猪为研究对象，通过现代分子生物学技术研究母猪高膘妊娠对胎盘氧化应激损伤和炎症反应的影响。即通过对不同膘情的母猪胎盘组织采样，然后实验室测定相关的指标:总一氧化氮、羟自由基、过氧化氢、超氧阴离子四个指标的检测判断膘情与胎盘组织的氧化应激程度的相关性。同时使用Realtime PCR对样本进行分析，对于膘情的不同对于同一基因的表达是否存在影响。
1 材料与方法
1．1 实验动物和试验方法
本试验选取品种为纯种长白山母猪，选取采样部位为母猪胎盘绒毛组织。同时测量20头母猪配种前背膘膘情作为体况指标。采样完成后做好原始记录，并将样本按照膘情分为两组。膘情1217为低膘妊娠组。膘情20及以上作为高膘组。操作过程中尽量使实验数据更加科学合理避免人为差异。采样完成后将数据记录完整，将样品编号及时在适当条件下保存（液氮）。
1.2 样品的处理
本次试验测量各项指标对象为样本中的mRNA与蛋白质，所以需要在实验前将所需mRNA与蛋白质提取制备。
1.2.1提取mRNA
将样品从液氮中取出，见下一块0.1g左右加少量液氮研磨，转移至玻璃匀浆器，加入1毫升的匀浆液，匀浆至不见组织碎块（全程冰上操作），接着将匀浆液倒入1.5毫升的离心管中，转前静止片刻使组织完全消失，放入离心机（以5000rpm为转速离心五分钟），将上清液倒掉，沉淀加0.25毫升灭菌水，吹散悬浮沉淀，在加0.25毫升的2倍的细胞裂解缓冲液然后混匀。置于55°C的水浴中（泡沫板）23h，在这段时间找内可以震荡离心数次。将离心管取出加入一样体积异戊醇/氯仿/酚（比例为一：二十四：二十五）混合物，慢慢的上下摇晃均匀，置于冰浴10分钟。再离心（12000rpm、10分钟），吸取上层清液（内有粘稠mRNA）于新离心管中，估算上层清液加一样体积的异戊醇/氯仿（1比24）混匀，离心（以12000rpm、10分钟）。再次移取上层清液于另一个离心管，加1比10的3m NaAC和2倍的体积的无水乙醇。混匀后，冰浴30分钟后离心（10000rpm、5分钟）。倒掉上层清液，去除掉试管管口残余液，用1毫升的百分之七十乙醇来洗涤管底沉淀然后离心（10000rpm、1分钟），去除上层清液，离心，去除管底的沉淀的残余液体，加100ulTE缓冲液再次使沉淀溶于缓冲液，然后低温保存（20°C保存）同时测量mRNA浓度。
1.2.2提取蛋白质
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引言1
1.材料与方法2
1.1实验动物和试验方法 2
1.2样本处理 2
1.2.1提取mRNA 2
1.2.2提取蛋白质2
1.3检测指标3
1.3.1MDA含量测定3
1.3.2过氧化氢含量测定4
1.3.3总一氧化氮含量测定4
1.3.4抗氧化酶CAT活性含量测定5
1.3.5歧化酶SOD活性含量测定5
1.3.6超氧阴离子含量测定6
1.3.7羟自由基活力单位测定6
1.5 JC1荧光染色检测胎盘绒毛线粒体膜电位7
1.6 Realtime PCR检测mRNA的表达 8
2.结果与分析8
2.1 母猪高膘妊娠对胎盘绒毛氧化应激的影响9
2.2母猪高膘妊娠对胎盘绒毛抗氧化能力的影响9
2.3母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体膜通透性的影响9
2.4 母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体功能相关基因表达及 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
mtDNA数量的影响10
3讨论11
3.1 母猪高膘妊娠对胎盘绒毛氧化应激的影响11
3.2母猪高膘妊娠对胎盘绒毛抗氧化能力的影响12
3.3母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体膜通透性的影响12
3.4 母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体功能相关基因表达及mtDNA数量的影响12
4.结果12
致谢12
参考文献12 母猪高膘妊娠对胎盘绒毛线粒体氧化应激损伤的影响
引言
引言：在现有研究中证实母猪的膘情与产子性能有重要的关系。同时研究表明母体妊娠肥胖引起的繁殖力下降与胎盘脂肪毒性的发生有关。脂肪毒性即由脂肪异位沉积引起的组织细胞氧化应激、炎症反应和细胞凋亡，进而损伤组织细胞的结构和功能。虽然在人、大鼠和山羊中均证实妊娠肥胖可引起胎盘脂肪毒性的发 生，但在猪高膘妊娠是否同样会引起胎盘脂毒性的发生还未见报道。在生产过程中猪场大多数以母猪背膘膘情作为判断母猪机体健康水平的指标，因为膘情在一定程度上可以体现母猪处于不同的生理状况时的机体生产性能。氧化应激是指由于机体或组织与细胞在各种不同的因素下导致体内的过氧化脂的氧化产物增多，从而使机体受到组织细胞的氧化损伤。同时氧化应激也会产生相应的非常多的氧化中间产物，例如：过氧化氢化物、丙二醛、脂氢过氧化物、单线态氧及其相关裂解的产物。这些物质的化学性质相当活泼。可能与脂质、蛋白质、DNA均产生反应。从而导致机体的细胞结构和相应功能受到影响，同时脂质过氧化氢产物有极不稳定容易产生一系列含氧功能基的产物。所以本次试验选择总NO、OH、H2O2、超氧阴离子作为测量指标。在生产过程中猪场大多数以母猪背膘膘情作为判断母猪机体健康水平的指标，因为膘情在一定程度上可以体现母猪处于不同的生理状况时的机体生产性能。本研究以长白母猪为研究对象，通过现代分子生物学技术研究母猪高膘妊娠对胎盘氧化应激损伤和炎症反应的影响。即通过对不同膘情的母猪胎盘组织采样，然后实验室测定相关的指标:总一氧化氮、羟自由基、过氧化氢、超氧阴离子四个指标的检测判断膘情与胎盘组织的氧化应激程度的相关性。同时使用Realtime PCR对样本进行分析，对于膘情的不同对于同一基因的表达是否存在影响。
1 材料与方法
1．1 实验动物和试验方法
本试验选取品种为纯种长白山母猪，选取采样部位为母猪胎盘绒毛组织。同时测量20头母猪配种前背膘膘情作为体况指标。采样完成后做好原始记录，并将样本按照膘情分为两组。膘情1217为低膘妊娠组。膘情20及以上作为高膘组。操作过程中尽量使实验数据更加科学合理避免人为差异。采样完成后将数据记录完整，将样品编号及时在适当条件下保存（液氮）。
1.2 样品的处理
本次试验测量各项指标对象为样本中的mRNA与蛋白质，所以需要在实验前将所需mRNA与蛋白质提取制备。
1.2.1提取mRNA
将样品从液氮中取出，见下一块0.1g左右加少量液氮研磨，转移至玻璃匀浆器，加入1毫升的匀浆液，匀浆至不见组织碎块（全程冰上操作），接着将匀浆液倒入1.5毫升的离心管中，转前静止片刻使组织完全消失，放入离心机（以5000rpm为转速离心五分钟），将上清液倒掉，沉淀加0.25毫升灭菌水，吹散悬浮沉淀，在加0.25毫升的2倍的细胞裂解缓冲液然后混匀。置于55°C的水浴中（泡沫板）23h，在这段时间找内可以震荡离心数次。将离心管取出加入一样体积异戊醇/氯仿/酚（比例为一：二十四：二十五）混合物，慢慢的上下摇晃均匀，置于冰浴10分钟。再离心（12000rpm、10分钟），吸取上层清液（内有粘稠mRNA）于新离心管中，估算上层清液加一样体积的异戊醇/氯仿（1比24）混匀，离心（以12000rpm、10分钟）。再次移取上层清液于另一个离心管，加1比10的3m NaAC和2倍的体积的无水乙醇。混匀后，冰浴30分钟后离心（10000rpm、5分钟）。倒掉上层清液，去除掉试管管口残余液，用1毫升的百分之七十乙醇来洗涤管底沉淀然后离心（10000rpm、1分钟），去除上层清液，离心，去除管底的沉淀的残余液体，加100ulTE缓冲液再次使沉淀溶于缓冲液，然后低温保存（20°C保存）同时测量mRNA浓度。
1.2.2提取蛋白质
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