犬鼠双微体2（cMDM2）的新型同源异构体的鉴定
犬鼠双微体2（cMDM2）的新型同源异构体的鉴定[20200507191854]
摘要：MDM2基因在多种人类癌症中过表达，且其基因产物可被加工形成多种同源异构体。目前已经从人类体内发现40多种MDM2同源异构体，其中一些可与全长MDM2结合，改变其对p53的调节作用，在肿瘤的发展和预后中发挥重要作用。由于犬与人的基因组相似度高，因此我们期望通过研究cMDM2(canine MDM2)，为人类癌症提供参考。我们发现扩增cMDM2的基因编码区获得的主要条带要比预测的全长序列短，表明cMDM2 mRNA也可经剪接形成同源异构体。为证实该可能性，我们根据mRNA的剪接规律分析了cMDM2的基因组序列，并设计了多对引物进行PCR鉴定，发现其中一对引物确实可扩增出2个片段，命名该同源异构体为cMDM2D。通过测序分析发现，与cMDM2相比，cMDM2D缺失141bp（684-825位的核苷酸序列），即 228-274位的47个氨基酸。该缺失区域对应cMDM2的CBP/p300结合区，表明cMDM2D可能不具备CBP蛋白结合功能。综上所述，我们成功鉴定出一种新型同源异构体cMDM2D，可为后续深入研究其功能奠定基础。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5`1^9`1^6^0`7^2#
关键字:MDM2；同源异构体；犬细胞；RT-PCR；基因测序
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1 细胞系2
1.1.2 质粒2
1.1.3 主要试剂2
1.1.4 引物2
1.1.5 主要仪器2
1.2方法 2
1.2.1培养细胞2
1.2.2 mRNA的提取3
1.2.3 mRNA的定量3
1.2.4 RT-PCR检测MDM2 mRNA3
1.2.5将MDM2的同源异构体基因片段克隆至pcDNA3.1载体4
1.2.6 酶切鉴定及基因测序4
2 结果与分析5
2.1 MDM2同源异构体的PCR鉴定结果5
2.2 pcDNA3-2X-FLAG-cMDM2重组质粒的PCR鉴定5
2.3 基因及氨基酸测序结果5
2.3.1 MDM2与MDM2D 的DNA序列比较5
2.3.1 MDM2与MDM2D 的氨基酸序列比较5
2.4 犬的MDM2氨基酸序列与人类的比较7
3 讨论 8
3.1 本研究的意义8
3.2 GU-AG 法则9
致谢9
参考文献9
图1 MDM2基因的PCR引物位置示意图4
图2 MDM2D基因插入pcDNA3.1载体中，构建成重组真核表达载体pcDNA3-2X-FLAG-cMDM24
图3 MDM2基因的两组PCR结果电泳分析5
图4 pcDNA3 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5`1^9`1^6^0`7^2#
-2X-FLAG-cMDM2重组质粒的PCR鉴定5
图5 MDM2与MDM2D 的DNA序列比较分析6
图6 MDM2与MDM2D 的氨基酸序列比较7
图7 MDM2/MDM2D蛋白结构示意图7
图8人类MDM2氨基酸序列与犬的比较8
犬鼠双微体2（cMDM2）的新型同源异构体的鉴定
摘要：MDM2基因在多种人类癌症中过表达，且其基因产物可被加工形成多种同源异构体。目前已经从人类体内发现40多种MDM2同源异构体，其中一些可与全长MDM2结合，改变其对p53的调节作用，在肿瘤的发展和预后中发挥重要作用。由于犬与人的基因组相似度高，因此我们期望通过研究cMDM2(canine MDM2)，为人类癌症提供参考。我们发现扩增cMDM2的基因编码区获得的主要条带要比预测的全长序列短，表明cMDM2 mRNA也可经剪接形成同源异构体。为证实该可能性，我们根据mRNA的剪接规律分析了cMDM2的基因组序列，并设计了多对引物进行PCR鉴定，发现其中一对引物确实可扩增出2个片段，命名该同源异构体为cMDM2D。通过测序分析发现，与cMDM2相比，cMDM2D缺失141bp（684-825位的核苷酸序列），即 228-274位的47个氨基酸。该缺失区域对应cMDM2的CBP/p300结合区，表明cMDM2D可能不具备CBP蛋白结合功能。综上所述，我们成功鉴定出一种新型同源异构体cMDM2D，可为后续深入研究其功能奠定基础。
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关键字:MDM2；同源异构体；犬细胞；RT-PCR；基因测序
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摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1 细胞系2
1.1.2 质粒2
1.1.3 主要试剂2
1.1.4 引物2
1.1.5 主要仪器2
1.2方法 2
1.2.1培养细胞2
1.2.2 mRNA的提取3
1.2.3 mRNA的定量3
1.2.4 RT-PCR检测MDM2 mRNA3
1.2.5将MDM2的同源异构体基因片段克隆至pcDNA3.1载体4
1.2.6 酶切鉴定及基因测序4
2 结果与分析5
2.1 MDM2同源异构体的PCR鉴定结果5
2.2 pcDNA3-2X-FLAG-cMDM2重组质粒的PCR鉴定5
2.3 基因及氨基酸测序结果5
2.3.1 MDM2与MDM2D 的DNA序列比较5
2.3.1 MDM2与MDM2D 的氨基酸序列比较5
2.4 犬的MDM2氨基酸序列与人类的比较7
3 讨论 8
3.1 本研究的意义8
3.2 GU-AG 法则9
致谢9
参考文献9
图1 MDM2基因的PCR引物位置示意图4
图2 MDM2D基因插入pcDNA3.1载体中，构建成重组真核表达载体pcDNA3-2X-FLAG-cMDM24
图3 MDM2基因的两组PCR结果电泳分析5
图4 pcDNA3 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5`1^9`1^6^0`7^2#
-2X-FLAG-cMDM2重组质粒的PCR鉴定5
图5 MDM2与MDM2D 的DNA序列比较分析6
图6 MDM2与MDM2D 的氨基酸序列比较7
图7 MDM2/MDM2D蛋白结构示意图7
图8人类MDM2氨基酸序列与犬的比较8
犬鼠双微体2（cMDM2）的新型同源异构体的鉴定
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