胚蛋注射丙酮酸肌酸对鸡胚和雏鸡胃肠器官发育和空肠二糖酶活性的影响
本试验旨在研究胚蛋孵化第17.5天给养丙酮酸肌酸（CrPyr）对鸡胚和雏鸡胃肠器官发育和空肠二糖酶活性的影响。试验采用单因素完全随机设计，（I）空白对照组，不进行注射（对照组）；（II）生理盐水对照组，NaCl 4.5 mg（盐水组）；（III）CrPyr 3 mg，NaCl 4.5 mg（CrPyr组）。在胚胎期第17.5 d在羊膜注射营养液，并在孵化期19d和出雏期1d采集主要胃肠器官及空肠黏膜样本待测定。结果显示，胚蛋注射CrPyr对19胚龄鸡胚和1日龄雏鸡胃肠器官重量和器官指数，及1日龄雏鸡空肠绒毛高度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度比值均无显著影响。相对于空白对照组和盐水组，孵化期19 d和出雏期1 d的雏鸡空肠蔗糖酶和麦芽糖酶显著提高（P<0.05）。结果表明，胚蛋注射丙酮酸肌酸能够促进肉仔鸡一些刷状缘酶的活性，从而提高小肠的消化能力，进而影响肉鸡的早期生长。
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract 3
Key word 4
引言 4
1 材料与方法 4
1.1试验材料 4
1.1.1 试验动物 4
1.1.2 主要试剂 4
1.1.3 主要仪器 4
1.2 试验设计 5
1.3 样品采集 5
1.4 样品分析及测定 6
1.4.1小肠发育性能测定 6
1.4.2肠道形态学指标测定 6
1.4.3消化酶活性测定 6
1.5 统计分析 6
2结果与分析 6
2.1胚蛋注射丙酮酸肌酸对鸡胚和雏鸡胃肠器官重量和器官指数的影响 6
2.2胚蛋注射丙酮酸肌酸对1日龄雏鸡空肠形态的影响 7
2.3胚蛋注射丙酮酸肌酸对肉鸡空肠黏膜二糖酶活性的影响 7
3.讨论 10
4.结论 11
致谢 12
参考文献 12
胚蛋注射丙酮酸肌酸对鸡胚和雏鸡胃肠器官发育和空肠二糖酶活性的影响
引言
美国科学家Uni和Ferket最早提出胚蛋注射营养（in ovofeeding）[ *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
1]，胚蛋注射是通过向禽胚中注射外源物质（如氨基酸、生长因子等）[2]，以研究这些外源因子在动物个体生长发育中的影响，从而找到提高孵化率和生长性能等方面的方法。研究表明，IOF能促进家禽的胚胎发育[3]、能量储备[4,5]和出雏后的生长发育[6]等。
Uni[7]研究表明鸡胚孵出前具有较低小肠黏膜碱性磷酸酶、SI酶、ATP酶等，说明其对养分的消化吸收能力有限。小肠作为肉鸡最主要的消化吸收器官，也是最大的免疫器官。小肠功能和形态上的良好发育不仅能促进机体的消化吸收促进生长发育[8]，还能保护机体免受病原的侵害。而小肠功能和形态发育也依赖于营养物质的供应，当营养物质越充足小肠就能越快发育越成熟，越能表现机体的遗传潜力[9]。因此我们试图采取胚蛋注射的早期营养调控措施来补充肉鸡胚胎后期发育的能量，以期达到促进小肠发育的目的。
丙酮酸肌酸（Creatine pyruvate, CrPyr）[10]是一种新型外源活性物质，兼具肌酸特性和丙酮酸功能，其分子中肌酸和丙酮酸的比例为60:40，分子式是C7H13N3O5，分子量为219.20，且具有较高的溶解性。丙酮酸肌酸作为一种新的功能营养素其主要效应成分为机体内正常的代谢中间产物—丙酮酸和肌酸。在肉鸡研究上表明，饲喂CrPyr可以降低肉鸡脂肪的沉积，增强肉鸡肌细胞的能量供应，正向调控肌纤维的生长，促进蛋白质的合成和肌肉发育，对机体能量代谢和蛋白质代谢都有积极作用，同时发现饲喂CrPyr对肌肉能量代谢和蛋白质代谢的调控作用效果明显高于其单独的有效成分肌酸和丙酮酸[11]。CrPyr对家禽肠道发育的影响至今未见报道，因此，本试验旨在探索胚蛋孵化第17.5天给养丙酮酸肌酸对肉仔鸡早期肠道发育的的影响，为家禽早期营养调控技术提供理论依据。
1 材料与方法
1.1试验材料
1.1.1 试验动物
AA肉鸡商品代种蛋（蛋重6065g，平均重56.64 ± 0.51 g），购自安徽和威农业开发股份有限公司。
1.1.2 主要试剂
丙酮酸肌酸购自湖北巨胜科技有限公司，医药级，纯度≥98%；蔗糖酶、麦芽糖酶、测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.1.3 主要仪器
全自动孵化控制器（德州市志诚孵化设备有限公司，山东）；紫外分光光度计（上海元析仪器有限公司）；高压消毒锅（上海申安医疗器械厂）；FA1004型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；恒温水浴锅（北京医疗设备厂）；UltraTurrax T25匀浆机（德国IKAWERKE）；振荡器（上海沪西分析仪器厂）；可调式微量移液器（德国Eppendorf）；。
1.2 试验设计
孵化16 d时通过照蛋选取720枚发育良好且蛋重基本一致的受精蛋，随机分配到3个处理，每个处理8个重复，每个重复30枚，称重后编号（平均蛋重为56.64 ± 0.51 g）。按种蛋正常孵化程序进行孵化，采用全自动孵化控制器。参数设定：温度37.8 ± 0.1°C，相对湿度60%。90 min进行一次翻蛋，翻蛋时间为180 s，孵化期第19 d停止翻蛋。在孵化期第17.5 d时进行胚蛋注射试验。注射液在试验当天准备，CrPyr溶解于0.75%的生理盐水中，配好后的注射液经孔径为0.22 μm无菌细菌滤器过滤除菌后置于孵化器中预温2 h，保持注射液温度为37.8°C。3个处理分别为：（I）空白对照组，不进行注射（Control）；（II）生理盐水对照组，NaCl 4.5 mg（Saline）；（III）CrPyr 3 mg，NaCl 4.5 mg（CrPyr）；每枚胚蛋注射剂量为0.6 mL。通过照蛋确定羊膜腔的位置，在胚蛋的气室端用75%酒精消毒，并在该部位钻直径约l mm的小孔。用1 mL的灭菌注射器从所钻小孔中垂直进针（进针深度约为2 cm），将营养物质注射到胚蛋羊膜腔中，胚蛋注射试验在2 h内完成。注射完毕后，立即用石蜡封闭蛋孔并将种蛋转会孵化器中，按正常程序进行孵化。
1.3样品采集
分别在出壳当天每组处理随机选取8个雏鸡采用颈部放血法杀死，完整剥离小肠，分别从十二指肠U状弯曲的起始处和结束处向下取相应肠段，作为十二指肠和空肠样品。取大约23 cm空肠中间部位肠段，小心用镊子夹取，放入的4%福尔马林固定，以备形态学分析。沿纵向剖开小肠各段，用4℃预冷灭菌PBS缓冲液冲洗外壁和内容物，吸水纸吸干，然后用灭菌刀片迅速刮取肠道粘膜，放入1.5 mL的Eppendor管中，置液氮速冻，80℃冷冻保存，待测。
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract 3
Key word 4
引言 4
1 材料与方法 4
1.1试验材料 4
1.1.1 试验动物 4
1.1.2 主要试剂 4
1.1.3 主要仪器 4
1.2 试验设计 5
1.3 样品采集 5
1.4 样品分析及测定 6
1.4.1小肠发育性能测定 6
1.4.2肠道形态学指标测定 6
1.4.3消化酶活性测定 6
1.5 统计分析 6
2结果与分析 6
2.1胚蛋注射丙酮酸肌酸对鸡胚和雏鸡胃肠器官重量和器官指数的影响 6
2.2胚蛋注射丙酮酸肌酸对1日龄雏鸡空肠形态的影响 7
2.3胚蛋注射丙酮酸肌酸对肉鸡空肠黏膜二糖酶活性的影响 7
3.讨论 10
4.结论 11
致谢 12
参考文献 12
胚蛋注射丙酮酸肌酸对鸡胚和雏鸡胃肠器官发育和空肠二糖酶活性的影响
引言
美国科学家Uni和Ferket最早提出胚蛋注射营养（in ovofeeding）[ *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
1]，胚蛋注射是通过向禽胚中注射外源物质（如氨基酸、生长因子等）[2]，以研究这些外源因子在动物个体生长发育中的影响，从而找到提高孵化率和生长性能等方面的方法。研究表明，IOF能促进家禽的胚胎发育[3]、能量储备[4,5]和出雏后的生长发育[6]等。
Uni[7]研究表明鸡胚孵出前具有较低小肠黏膜碱性磷酸酶、SI酶、ATP酶等，说明其对养分的消化吸收能力有限。小肠作为肉鸡最主要的消化吸收器官，也是最大的免疫器官。小肠功能和形态上的良好发育不仅能促进机体的消化吸收促进生长发育[8]，还能保护机体免受病原的侵害。而小肠功能和形态发育也依赖于营养物质的供应，当营养物质越充足小肠就能越快发育越成熟，越能表现机体的遗传潜力[9]。因此我们试图采取胚蛋注射的早期营养调控措施来补充肉鸡胚胎后期发育的能量，以期达到促进小肠发育的目的。
丙酮酸肌酸（Creatine pyruvate, CrPyr）[10]是一种新型外源活性物质，兼具肌酸特性和丙酮酸功能，其分子中肌酸和丙酮酸的比例为60:40，分子式是C7H13N3O5，分子量为219.20，且具有较高的溶解性。丙酮酸肌酸作为一种新的功能营养素其主要效应成分为机体内正常的代谢中间产物—丙酮酸和肌酸。在肉鸡研究上表明，饲喂CrPyr可以降低肉鸡脂肪的沉积，增强肉鸡肌细胞的能量供应，正向调控肌纤维的生长，促进蛋白质的合成和肌肉发育，对机体能量代谢和蛋白质代谢都有积极作用，同时发现饲喂CrPyr对肌肉能量代谢和蛋白质代谢的调控作用效果明显高于其单独的有效成分肌酸和丙酮酸[11]。CrPyr对家禽肠道发育的影响至今未见报道，因此，本试验旨在探索胚蛋孵化第17.5天给养丙酮酸肌酸对肉仔鸡早期肠道发育的的影响，为家禽早期营养调控技术提供理论依据。
1 材料与方法
1.1试验材料
1.1.1 试验动物
AA肉鸡商品代种蛋（蛋重6065g，平均重56.64 ± 0.51 g），购自安徽和威农业开发股份有限公司。
1.1.2 主要试剂
丙酮酸肌酸购自湖北巨胜科技有限公司，医药级，纯度≥98%；蔗糖酶、麦芽糖酶、测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.1.3 主要仪器
全自动孵化控制器（德州市志诚孵化设备有限公司，山东）；紫外分光光度计（上海元析仪器有限公司）；高压消毒锅（上海申安医疗器械厂）；FA1004型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；恒温水浴锅（北京医疗设备厂）；UltraTurrax T25匀浆机（德国IKAWERKE）；振荡器（上海沪西分析仪器厂）；可调式微量移液器（德国Eppendorf）；。
1.2 试验设计
孵化16 d时通过照蛋选取720枚发育良好且蛋重基本一致的受精蛋，随机分配到3个处理，每个处理8个重复，每个重复30枚，称重后编号（平均蛋重为56.64 ± 0.51 g）。按种蛋正常孵化程序进行孵化，采用全自动孵化控制器。参数设定：温度37.8 ± 0.1°C，相对湿度60%。90 min进行一次翻蛋，翻蛋时间为180 s，孵化期第19 d停止翻蛋。在孵化期第17.5 d时进行胚蛋注射试验。注射液在试验当天准备，CrPyr溶解于0.75%的生理盐水中，配好后的注射液经孔径为0.22 μm无菌细菌滤器过滤除菌后置于孵化器中预温2 h，保持注射液温度为37.8°C。3个处理分别为：（I）空白对照组，不进行注射（Control）；（II）生理盐水对照组，NaCl 4.5 mg（Saline）；（III）CrPyr 3 mg，NaCl 4.5 mg（CrPyr）；每枚胚蛋注射剂量为0.6 mL。通过照蛋确定羊膜腔的位置，在胚蛋的气室端用75%酒精消毒，并在该部位钻直径约l mm的小孔。用1 mL的灭菌注射器从所钻小孔中垂直进针（进针深度约为2 cm），将营养物质注射到胚蛋羊膜腔中，胚蛋注射试验在2 h内完成。注射完毕后，立即用石蜡封闭蛋孔并将种蛋转会孵化器中，按正常程序进行孵化。
1.3样品采集
分别在出壳当天每组处理随机选取8个雏鸡采用颈部放血法杀死，完整剥离小肠，分别从十二指肠U状弯曲的起始处和结束处向下取相应肠段，作为十二指肠和空肠样品。取大约23 cm空肠中间部位肠段，小心用镊子夹取，放入的4%福尔马林固定，以备形态学分析。沿纵向剖开小肠各段，用4℃预冷灭菌PBS缓冲液冲洗外壁和内容物，吸水纸吸干，然后用灭菌刀片迅速刮取肠道粘膜，放入1.5 mL的Eppendor管中，置液氮速冻，80℃冷冻保存，待测。
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