三种鸡传热性法氏囊病灭活疫苗对spf鸡免疫效力研究
本研究对自制的鸡传染性法氏囊病（IBD）灭活疫苗（NJ09株）、新法二联灭活疫苗和新法流三联灭活苗进行了IBDV部分效力检验。采用中和抗体、琼扩抗体测定与攻毒保护试验相结合，来评价该系列疫苗的免疫效力，建立鸡传染性法氏囊病灭活疫苗（NJ09株）血清学效力检验标准，为该系列苗的新药申报提供部分相关数据。将3种疫苗分别免疫23日龄SPF鸡，免疫14 d、21 d和28 d采血，测定血清中和抗体水平，并在免疫后28d进行琼扩抗体水平测定及攻毒保护效力检验。结果表明免疫后14 d，法氏囊单苗、新法二联苗和新法流三联苗免疫组中和抗体水平分别为1∶28、1∶28.2和1∶27.9；免疫后21 d，中和抗体水平分别为1∶213.2、1∶211.8和1∶212.1；免疫后28 d，中和抗体水平分别为1∶217.2、1∶217.4和1∶217.4，空白对照为1∶26。各免疫组鸡血清琼扩抗体水平均不低于1∶8， IBDV攻毒后，各免疫组保护率均为100%，对照组全部感染。3批疫苗中和抗体、琼扩抗体水平及攻毒保护效检均达到合格标准，证明3种含法氏囊病毒组分的灭活疫苗均能够预防IBDV感染，为鸡群提供有效保护。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 2
1．1 实验动物 2
1．2 疫苗 2
1．3 攻毒用毒 2
1．4 生物学材料 2
1．5 试验器材 2
1．6 免疫试验及采血 2
1．6．1免疫试验 2
1．6．2采血及血清处理 2
1．7 IBDV血清抗体水平测定 3
1．7．1中和抗体测定试验 3
1．7．2琼脂扩散试验 4
1．8 法氏囊攻毒保护试验 4
1．8．1分组及攻毒 4
1．8．2 攻毒用强毒稀释 4
1．8．3 判定标准 4
2 结果与分析 4
2．1法氏囊抗体水平测定结果 4
2．1．1 中和试验结果 4
2．1．2琼扩抗 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
体测定结果 5
2．2攻毒保护效力检验结果 5
3 讨论 6
致谢 7
参考文献： 8
三种鸡传染性法氏囊灭活疫苗对SPF鸡免疫效力研究
引言
引言：鸡传染性法氏囊病是一种由双RNA病毒科的传染性法氏囊病毒（IBDV）[1,2]引起的，危害青年鸡的烈性、高度接触性的病毒病。IBDV主要侵害法氏囊等淋巴组织，雏鸡早期感染IBDV会引起严重的免疫抑制[3]。此外，该病毒非常稳定,能够在鸡舍中长期存。在临床症状[4,5]为突然出现大批鸡发病．病鸡精神委顿、嗜睡、尾翅下垂、怕冷、扎堆、采食减少或废绝。本病对鸡的养殖有着极大危害，目前尚没有发现任何一种疗法或维持治疗方法能改变IBDV的感染过程[7]。在这种情况下，疫苗免疫接种对于该病的防治显得尤为重要。
IBD灭活疫苗在我国的家禽生产中目前使用较为广泛[8,9]。疫苗的效力关系到防病灭病效果，因此，疫苗的免疫效力检测不仅是新兽药申报必不可少的环节，也可以极大地避免因疫苗质量导致的免疫失败。《中国兽药典》规定对于IBD灭活疫苗的免疫效力检验方法为血清学方法及免疫攻毒两种方法任选其一[10]。本试验应用中和试验、琼扩试验和免疫攻毒来评价3种类型的自制法氏囊病灭活苗的免疫效力，以期更加真实全面地了解该3种IBD灭活疫苗对SPF鸡的免疫效力，从而为其新兽药的申报提供相关的临床试验数据。
1 材料与方法
1．1 实验动物 23日龄SPF实验鸡。SPF鸡胚购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。实验室自己孵化并育雏至23日龄。
1．2 疫苗 法氏囊灭活单苗（NJ09株）、新法二联灭活苗和新法流三联灭活苗，批号分别为2014122610、2014122611和2014122613的。由江苏省农业科学院国家兽用生物制品中心2014年12月26号自制。
1．3 攻毒用毒株 传染性法氏囊病毒NJ09株B3代毒种。
1．4 生物学材料 DF细胞、MEM 611细胞培养液、小牛血清、双抗、蛋白胰酶、自制鸡法氏囊阳性血清、阴性血清和自制IBDV抗原。
1．5 试验器材 孵化器、96孔细胞板、1 ％琼脂培养皿、超净台和细胞培养箱（37 ℃、5%CO2）和金属浴等。
1．6 免疫试验及采血
1．6．1免疫试验 将实验室自己孵化的SPF鸡育雏至23日龄，检查鸡群的全身状况，剔除弱鸡，选择40只健康鸡进入试验，随机将其分4组，1~3组为免疫组，10羽/组。第1组用No.2014122610的法氏囊灭活苗免疫，第2组用No.2014122611新法二联灭活苗免疫，第3组用No.2014122613新法流三联灭活苗免疫，接种剂量为0.3 mL/羽，接种途径为颈背皮下注射。第4组为对照组，10羽，不免疫。
1．6．2采血及血清处理 在免疫后14 d、21 d和28 d，对各组试验鸡以组为单位采血、分离血清，其中免疫组每组10羽全采血，对照组只需要任选5羽采血，采血量一般要大于2.5 mL/羽。并将分离好的血清按表1和表2的方法进行合样。最后及时将合样好的血清于56 ℃金属浴中灭菌30 min后，置于4 ℃冰箱备用。
组别
血清样1
血清样2
血清样3
血清样4
血清样5
血清样6
血清样7
血清样8
血清样9
血清样10
第1~3组
血清样1~3各取70 uL混合成血清混合样1
血清样4~6各取70 uL混合成血清混合样2
血清样7~10各取70 uL混合成血清混合样3
血清样1~10各取21 uL混合成血清混合样4
第4组
血清样1~2各取100 uL混合成血清混合样1
血清样3~5各取70 uL混合成血清混合样2
血清样1~5各取42ul混合成血清混合样3
注：免疫后14 d和21 d采血时，试验各免疫组10羽全采血，对照组只需任选5羽采血，并混合血清样。
表1 免疫后14d和21d血清合样方法
Table11 The way of mixing the 14th day and 21th day serum samples after immunization
组别
血清样1
血清样2
血清样3
血清样4
血清样5
血清样6
血清样7
血清样8
血清样9
血清样10
第1~3组
血清样1
血清样2
血清样3
血清样4
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 2
1．1 实验动物 2
1．2 疫苗 2
1．3 攻毒用毒 2
1．4 生物学材料 2
1．5 试验器材 2
1．6 免疫试验及采血 2
1．6．1免疫试验 2
1．6．2采血及血清处理 2
1．7 IBDV血清抗体水平测定 3
1．7．1中和抗体测定试验 3
1．7．2琼脂扩散试验 4
1．8 法氏囊攻毒保护试验 4
1．8．1分组及攻毒 4
1．8．2 攻毒用强毒稀释 4
1．8．3 判定标准 4
2 结果与分析 4
2．1法氏囊抗体水平测定结果 4
2．1．1 中和试验结果 4
2．1．2琼扩抗 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
体测定结果 5
2．2攻毒保护效力检验结果 5
3 讨论 6
致谢 7
参考文献： 8
三种鸡传染性法氏囊灭活疫苗对SPF鸡免疫效力研究
引言
引言：鸡传染性法氏囊病是一种由双RNA病毒科的传染性法氏囊病毒（IBDV）[1,2]引起的，危害青年鸡的烈性、高度接触性的病毒病。IBDV主要侵害法氏囊等淋巴组织，雏鸡早期感染IBDV会引起严重的免疫抑制[3]。此外，该病毒非常稳定,能够在鸡舍中长期存。在临床症状[4,5]为突然出现大批鸡发病．病鸡精神委顿、嗜睡、尾翅下垂、怕冷、扎堆、采食减少或废绝。本病对鸡的养殖有着极大危害，目前尚没有发现任何一种疗法或维持治疗方法能改变IBDV的感染过程[7]。在这种情况下，疫苗免疫接种对于该病的防治显得尤为重要。
IBD灭活疫苗在我国的家禽生产中目前使用较为广泛[8,9]。疫苗的效力关系到防病灭病效果，因此，疫苗的免疫效力检测不仅是新兽药申报必不可少的环节，也可以极大地避免因疫苗质量导致的免疫失败。《中国兽药典》规定对于IBD灭活疫苗的免疫效力检验方法为血清学方法及免疫攻毒两种方法任选其一[10]。本试验应用中和试验、琼扩试验和免疫攻毒来评价3种类型的自制法氏囊病灭活苗的免疫效力，以期更加真实全面地了解该3种IBD灭活疫苗对SPF鸡的免疫效力，从而为其新兽药的申报提供相关的临床试验数据。
1 材料与方法
1．1 实验动物 23日龄SPF实验鸡。SPF鸡胚购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。实验室自己孵化并育雏至23日龄。
1．2 疫苗 法氏囊灭活单苗（NJ09株）、新法二联灭活苗和新法流三联灭活苗，批号分别为2014122610、2014122611和2014122613的。由江苏省农业科学院国家兽用生物制品中心2014年12月26号自制。
1．3 攻毒用毒株 传染性法氏囊病毒NJ09株B3代毒种。
1．4 生物学材料 DF细胞、MEM 611细胞培养液、小牛血清、双抗、蛋白胰酶、自制鸡法氏囊阳性血清、阴性血清和自制IBDV抗原。
1．5 试验器材 孵化器、96孔细胞板、1 ％琼脂培养皿、超净台和细胞培养箱（37 ℃、5%CO2）和金属浴等。
1．6 免疫试验及采血
1．6．1免疫试验 将实验室自己孵化的SPF鸡育雏至23日龄，检查鸡群的全身状况，剔除弱鸡，选择40只健康鸡进入试验，随机将其分4组，1~3组为免疫组，10羽/组。第1组用No.2014122610的法氏囊灭活苗免疫，第2组用No.2014122611新法二联灭活苗免疫，第3组用No.2014122613新法流三联灭活苗免疫，接种剂量为0.3 mL/羽，接种途径为颈背皮下注射。第4组为对照组，10羽，不免疫。
1．6．2采血及血清处理 在免疫后14 d、21 d和28 d，对各组试验鸡以组为单位采血、分离血清，其中免疫组每组10羽全采血，对照组只需要任选5羽采血，采血量一般要大于2.5 mL/羽。并将分离好的血清按表1和表2的方法进行合样。最后及时将合样好的血清于56 ℃金属浴中灭菌30 min后，置于4 ℃冰箱备用。
组别
血清样1
血清样2
血清样3
血清样4
血清样5
血清样6
血清样7
血清样8
血清样9
血清样10
第1~3组
血清样1~3各取70 uL混合成血清混合样1
血清样4~6各取70 uL混合成血清混合样2
血清样7~10各取70 uL混合成血清混合样3
血清样1~10各取21 uL混合成血清混合样4
第4组
血清样1~2各取100 uL混合成血清混合样1
血清样3~5各取70 uL混合成血清混合样2
血清样1~5各取42ul混合成血清混合样3
注：免疫后14 d和21 d采血时，试验各免疫组10羽全采血，对照组只需任选5羽采血，并混合血清样。
表1 免疫后14d和21d血清合样方法
Table11 The way of mixing the 14th day and 21th day serum samples after immunization
组别
血清样1
血清样2
血清样3
血清样4
血清样5
血清样6
血清样7
血清样8
血清样9
血清样10
第1~3组
血清样1
血清样2
血清样3
血清样4
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