不同防霉剂对乳酸菌发酵饲料防霉效果的研究
3本试验旨在比较不同防霉剂对乳酸菌发酵饲料防霉效果。本试验分别在乳酸菌发酵饲料中添加丙酸钙、柠檬酸、双乙酸钠以及山梨酸钾四种防霉剂后，将饲料置于密封袋以及普通培养皿（非密封）两种环境中，28°C，相对湿度72%的环境中观察记录30天。结果显示，非密封条件下，双乙酸钠和丙酸钙防霉效果显著优于柠檬酸和山梨酸钾（P＜0.05）；密封条件下，试验组保存时间显著高于对照组（P＜0.05）。双乙酸钠和丙酸钙梯度试验中，丙酸钙添加量为2.00%和双乙酸钠为0.30%时防霉天数为6天。综合上述结果，以在发酵饲料中添加3.00%的双乙酸钠效果最佳。
目录
引言
引言
霉菌污染是一个全球性的问题，据不完全统计，现在全世界每年损失的饲料有一
半以上系由霉变所致[1]。在实际的生产应用中，发酵饲料所面临的最大问题就是如何控制霉变，因此有必要在发酵饲料中添加防霉剂以改变这一现象。霉菌毒素是由真菌或霉菌产生的次级代谢产物，在动物体中，霉菌毒素的毒性是慢性的，很少引起动物死亡。但是霉菌毒素的存在降低了饲料的营养价值，以及动物的生产性能，从而影响生产力，且霉菌毒素在畜产品（肉、奶等）中的残留会给人类健康带来严重威胁[2]。
防止饲料霉变有多种方法，如辐射灭菌、使用防霉包装袋、化学消毒和控制真菌遗传密码等，其中最经济有效的方法是使用防霉剂[3]，但因有的措施成本过高和操作不便而未在生产中广泛应用。同时，添加饲料防霉剂，应根据饲料的含水量、营养、季节等因素综合考虑，才能提高饲料防霉素剂的防霉效果[4]。本试验选用了市场中常用的几种防霉剂（山梨酸钾、丙酸钙、柠檬酸、双乙酸钠），对其防霉效果进行了研究，拟为延长发酵饲料的保存期提供理论指导。
1 材料与方法
1.1 试验材料
MRS琼脂培养基和虎红琼脂培养基购自奥博星公司（北京）；
防霉剂：双乙酸钠、丙酸钙和山梨酸钾由阿拉丁试剂有限公司提供，柠檬酸由西陇化工有限公司提供，以上产品均符合WHO标准。
饲料：由江苏富大科技有限公司提供的乳猪全价配合饲料，经试验一所述方法发酵后所得的发酵饲料。
乳酸试剂盒：由南京建成生物科技有限公司提供。
1.2 试验仪器
IS
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
RSH1型全温振荡培养箱、PYXDHS5065BS型隔水式电热恒温培养箱、WalkLAB pH60型酸度计、Nikon YS100台式电子显微镜、DT300电子精密天平、WEGO威高立式压力蒸汽灭菌锅、苏净安泰BCM1000A型洁净工作台、Haier DM25L 262医用低温冰箱、培养皿和厌氧发酵管。
1.3试验方法
在发酵饲料中分别加入2.50%丙酸钙，4.0%柠檬酸，0.30%双乙酸钠和0.25%山梨酸钾，混合均匀后，分别取出200 g置于非密封条件下（普通培养皿中）和密封条件下，每组4个平行，在温度28°C、相对湿度72%的恒温箱中保存观察；将不同重量的双乙酸钠和丙酸钙加入到发酵饲料中，形成不同梯度的添加量，分别取出200 g置于非密封条件下以及单通阀密封袋中，每组4个平行，置于同样条件下观察[5]，对照组不添加任何防霉剂。
1.4 测定指标
1.4.1 饲料外观观察
对饲料的气味、结块情况、发霉以及生虫情况进行观察，分别在试验开始后第1、2、4、6、 8、10、15、30天观察饲料的霉变情况，并做记录。
1.4.2 饲料pH值
用固体pH计分别测定试验开始后第1、2、4、6、 8、10、15、30天发酵饲料pH值。
1.4.3 饲料中乳酸含量
分别测定试验开始后，第0、1、2、4、6、8、10 天饲料中乳酸含量的变化，乳酸的浓度用乳酸试剂盒测定。
1.4.4饲料中乳酸菌和霉菌菌落计数
分别测定试验开始后第0、1、2、4、6、8、10天饲料中乳酸菌含量的变化，将发酵饲料在无菌条件下取出1 g 到离心管中，加入等量的生理盐水，混匀后进行梯度稀释，取稀释液100 μL分别在MRS以及虎红平板上涂板，乳酸菌在37°C培养箱中培养48 h[6]。霉菌在28°C培养箱中培养72 h，每组做4个重复，具体操作方法参考周芷锦[7]。
2 测定指标及结果分析
试验数据经Microsoft Excel （2010）初步处理后，利用SPSS 18.0进行单因子方差分析，方差分析显著者采用多重比较中LSD 法进行显著性检验，P 值置于0.05。
2.1饲料外观变化
2.1.1非密封条件下饲料外观的变化
从表21可以看出，试验过程中，饲料外观由正常色泽逐渐变暗并出现霉变现象，气味由正常发酵饲料的酸香味逐渐生成油哈味至霉味，浓霉味。对照组在第4天即出现霉变并产生油哈味，双乙酸钠、丙酸钙组和山梨酸钾组外观均无异常，柠檬酸组出现点状霉变，但气味无异常；第6天时，对照组出现中度霉变且霉味较明显，双乙酸钠组和丙酸钙组外观无异常，柠檬酸组出现点状霉变且有油哈味，山梨酸钾组出现点状霉变但气味无异常；第8天对照组重度霉变且霉味较浓，双乙酸钠组和丙酸钙组组出现点状霉变但气味无异常，柠檬酸组组和山梨酸钾组均出现不同程度的霉变且霉味较明显；试验结束时，第30天所有饲料均出现重度霉变，霉味浓，对照组、双乙酸钠组和丙酸钙组饲料均生虫。
表21 发酵饲料在非密封条件的下表观观察结果
Table 21 The changes of fermented feed appearanec in nonsealed condition
项目Items
对照组
Control
双乙酸钠(0.30%)
SDA
柠檬酸（4.00%）
Citric acid
丙酸钙(2.50%)
Calcium propionate
山梨酸钾(0.25%)
Potassium sorbate
1d
2d
4d
+A
目录
引言
引言
霉菌污染是一个全球性的问题，据不完全统计，现在全世界每年损失的饲料有一
半以上系由霉变所致[1]。在实际的生产应用中，发酵饲料所面临的最大问题就是如何控制霉变，因此有必要在发酵饲料中添加防霉剂以改变这一现象。霉菌毒素是由真菌或霉菌产生的次级代谢产物，在动物体中，霉菌毒素的毒性是慢性的，很少引起动物死亡。但是霉菌毒素的存在降低了饲料的营养价值，以及动物的生产性能，从而影响生产力，且霉菌毒素在畜产品（肉、奶等）中的残留会给人类健康带来严重威胁[2]。
防止饲料霉变有多种方法，如辐射灭菌、使用防霉包装袋、化学消毒和控制真菌遗传密码等，其中最经济有效的方法是使用防霉剂[3]，但因有的措施成本过高和操作不便而未在生产中广泛应用。同时，添加饲料防霉剂，应根据饲料的含水量、营养、季节等因素综合考虑，才能提高饲料防霉素剂的防霉效果[4]。本试验选用了市场中常用的几种防霉剂（山梨酸钾、丙酸钙、柠檬酸、双乙酸钠），对其防霉效果进行了研究，拟为延长发酵饲料的保存期提供理论指导。
1 材料与方法
1.1 试验材料
MRS琼脂培养基和虎红琼脂培养基购自奥博星公司（北京）；
防霉剂：双乙酸钠、丙酸钙和山梨酸钾由阿拉丁试剂有限公司提供，柠檬酸由西陇化工有限公司提供，以上产品均符合WHO标准。
饲料：由江苏富大科技有限公司提供的乳猪全价配合饲料，经试验一所述方法发酵后所得的发酵饲料。
乳酸试剂盒：由南京建成生物科技有限公司提供。
1.2 试验仪器
IS
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
RSH1型全温振荡培养箱、PYXDHS5065BS型隔水式电热恒温培养箱、WalkLAB pH60型酸度计、Nikon YS100台式电子显微镜、DT300电子精密天平、WEGO威高立式压力蒸汽灭菌锅、苏净安泰BCM1000A型洁净工作台、Haier DM25L 262医用低温冰箱、培养皿和厌氧发酵管。
1.3试验方法
在发酵饲料中分别加入2.50%丙酸钙，4.0%柠檬酸，0.30%双乙酸钠和0.25%山梨酸钾，混合均匀后，分别取出200 g置于非密封条件下（普通培养皿中）和密封条件下，每组4个平行，在温度28°C、相对湿度72%的恒温箱中保存观察；将不同重量的双乙酸钠和丙酸钙加入到发酵饲料中，形成不同梯度的添加量，分别取出200 g置于非密封条件下以及单通阀密封袋中，每组4个平行，置于同样条件下观察[5]，对照组不添加任何防霉剂。
1.4 测定指标
1.4.1 饲料外观观察
对饲料的气味、结块情况、发霉以及生虫情况进行观察，分别在试验开始后第1、2、4、6、 8、10、15、30天观察饲料的霉变情况，并做记录。
1.4.2 饲料pH值
用固体pH计分别测定试验开始后第1、2、4、6、 8、10、15、30天发酵饲料pH值。
1.4.3 饲料中乳酸含量
分别测定试验开始后，第0、1、2、4、6、8、10 天饲料中乳酸含量的变化，乳酸的浓度用乳酸试剂盒测定。
1.4.4饲料中乳酸菌和霉菌菌落计数
分别测定试验开始后第0、1、2、4、6、8、10天饲料中乳酸菌含量的变化，将发酵饲料在无菌条件下取出1 g 到离心管中，加入等量的生理盐水，混匀后进行梯度稀释，取稀释液100 μL分别在MRS以及虎红平板上涂板，乳酸菌在37°C培养箱中培养48 h[6]。霉菌在28°C培养箱中培养72 h，每组做4个重复，具体操作方法参考周芷锦[7]。
2 测定指标及结果分析
试验数据经Microsoft Excel （2010）初步处理后，利用SPSS 18.0进行单因子方差分析，方差分析显著者采用多重比较中LSD 法进行显著性检验，P 值置于0.05。
2.1饲料外观变化
2.1.1非密封条件下饲料外观的变化
从表21可以看出，试验过程中，饲料外观由正常色泽逐渐变暗并出现霉变现象，气味由正常发酵饲料的酸香味逐渐生成油哈味至霉味，浓霉味。对照组在第4天即出现霉变并产生油哈味，双乙酸钠、丙酸钙组和山梨酸钾组外观均无异常，柠檬酸组出现点状霉变，但气味无异常；第6天时，对照组出现中度霉变且霉味较明显，双乙酸钠组和丙酸钙组外观无异常，柠檬酸组出现点状霉变且有油哈味，山梨酸钾组出现点状霉变但气味无异常；第8天对照组重度霉变且霉味较浓，双乙酸钠组和丙酸钙组组出现点状霉变但气味无异常，柠檬酸组组和山梨酸钾组均出现不同程度的霉变且霉味较明显；试验结束时，第30天所有饲料均出现重度霉变，霉味浓，对照组、双乙酸钠组和丙酸钙组饲料均生虫。
表21 发酵饲料在非密封条件的下表观观察结果
Table 21 The changes of fermented feed appearanec in nonsealed condition
项目Items
对照组
Control
双乙酸钠(0.30%)
SDA
柠檬酸（4.00%）
Citric acid
丙酸钙(2.50%)
Calcium propionate
山梨酸钾(0.25%)
Potassium sorbate
1d
2d
4d
+A
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