柴胡不同溶剂提取物的体外抑菌活性研究(附件)
摘 要微生物耐药性已成为全球关注的严峻问题，由多重耐药菌和许多新的病原微生物引起的感染对人类健康造成极大威胁。由于中草药具有抗菌、低毒、不易产生耐药性等特点与优势，所以开展抗菌中草药的筛选和应用研究对于动物细菌性疾病的防治具有重要意义。本论文探讨了不同溶剂柴胡提取物的体外抑菌和杀菌活性，为其合理开发提供依据。采用沸水提取、浓度50%、75% 和 95% 乙醇提取柴胡的活性成分，以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和肺炎克氏菌为供试菌，通过滤纸片扩散法测定抑菌圈大小、平板 2 倍稀释法统计最低抑菌浓度（MIC）和试管 2 倍稀释法统计最低杀菌浓度（MBC）。结果表明：柴胡不同溶剂提取物具有明显的抑菌杀菌作用，尤其是浓度 75% 乙醇提取物的效果最佳。 目 录
1 绪论
1.1 引言 1
1.2 研究意义及现状 1
1.2.1 中药提取物抑菌功效的研究意义 1
1.2.2 中药提取物抑菌功效的研究现状 2
1.3 抑菌活性的研究方法 2
1.4 研究对象 3
1.4.1 柴胡的来源 3
1.4.2 柴胡的功效及药理活性 3
1.5 本文的立题依据 4
1.6 小结 4
2 实验部分
2.1 仪器与试药 5
2.1.1 研究对象 5
2.1.2 主要仪器 5
2.1.3 主要试剂 5
2.1.4 供试菌株 5
2.2 方法 5
2.2.1 样品的初处理 5
2.2.2 菌液的制备 6
2.2.3 柴胡提取物的制备 6
2.2.4 抑菌活性的测定 6
2.2.5 数据统计分析 7
2.3 结果与讨论 7
2.3.1 柴胡不同溶剂提取物的抑菌圈大小 7
2.3.2 柴胡溶剂提取物的抑菌效果 8
2.3.3 柴胡溶剂提取物的杀菌效果 9
2.4 小结 11
结论 12
参考文献 13
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
.4 抑菌活性的测定 6
2.2.5 数据统计分析 7
2.3 结果与讨论 7
2.3.1 柴胡不同溶剂提取物的抑菌圈大小 7
2.3.2 柴胡溶剂提取物的抑菌效果 8
2.3.3 柴胡溶剂提取物的杀菌效果 9
2.4 小结 11
结论 12
参考文献 13
致谢 16
1 绪论
1.1 引言
微生物耐药性已成为全球关注的严峻问题，由多重耐药菌和许多新的病原微生物引起的感染对人类健康造成极大威胁[1]。随着抗微生物药物的广泛应用，医院感染性微生物耐药性问题日趋严重，真菌感染在临床上也有逐年上升趋势[2]。微生物的耐药性产生速度，远远大于抗生素研制速度。由于中草药具有抗菌、低毒、不易产生耐药性等特点与优势，所以开展抗菌中草药的筛选和应用研究对于动物细菌性疾病的防治具有重要意义[3]。近年来，国内外科研工作者已从中草药中筛选和寻找到一些高效抗病毒抗菌药物，其中有些已被开发应用于临床[4]。随着高科技的飞速发展，中草药抗菌研究必将走向细胞、分子甚至基因水平，这对研究并开发较高应用价值的中药制剂有着非常重要的意义[5]。
1.2 研究意义及现状
抗生素的开发及应用表现的是临床治疗细菌感染性疾病的划时代标志，其抗菌作用不容置疑，但其过敏反应、二重感染及细菌的耐药性等毒副作用使其应用受到一定的限制[6]。我国中药历史悠久，功效显著，许多研究资料表明，中药在体内外有不同程度的抑菌作用，并且较抗生素不易产生耐药性[7]。另外中药具有毒副作用小，取材方便，经济实惠的优点，因此研究和开发中药抗菌药具有重大意义[8]。近年来，国内外科研工作者已从中草药中筛选和寻找到一些高效抗病毒抗菌药物，其中有些已被开发应用于临床。随着高科技的飞速发展，中草药抗菌研究必将走向细胞、分子甚至基因水平，这对研究并开发较高应用价值的中药制剂有着非常重要的意义[9]。
1.2.1 中药提取物抑菌功效的研究意义
在我国，中药资源丰富，品种繁多，纯天然、无残留、无抗药性，具有防治疾病、提高动物生产性能和免疫力、改善畜产品品质、抗应激等作用[10]。中药发挥作用主要包括两大类成分[11]，一类是活性成分，如多糖、低聚糖、生物碱、甙类、酶类、有机醇、鞣质、多酚类、色素和挥发油等，这些成分分别有各自的独特作用，更重要的是它们相互作用显示出的协同功能；另一类是营养成分，如蛋白质、氨基酸、纤维素、脂肪、维生素、微量元素和淀粉等[8]。因此，利用我国中药的优势资源，合理开发安全有效的抗生素替代品具有重要的意义[12]。
1.2.2 中药提取物抑菌功效的研究现状
中药提取物种类繁多，具备各种各样复合的功效，如美白、抗过敏、抗衰老、祛痘、保湿、修复、抑菌杀菌。由于市场流行趋势以及中草药提取物温和、安全的特性，消费者的需求日益上升。在众多的中草药中，部分中草药蕴含多种杀菌活性成分，因而具备了抑菌、杀菌的功效。将有抑菌作用的中药应用在个人护理品中可以起到祛屑止痒、清痘等特殊功效作用。据不完全统计，这些中草药（主要是植物药）至少分属78个科，196种，其中已经试验证实具有抗细菌作用的有131种，抗真菌的有50种，抗病毒的有23种[13]。有的既有抗细菌作用，又有抗真菌作用，如黄连有广谱抗菌、抑制病毒作用，含有小檗碱称黄连素，对抗菌、抗病毒、降血糖、抗癌等方面都有重要作用[14]；丁香对多种霉菌的生长繁殖有抑制作用，是提取高效抑菌剂的良好来源[15]；主要对金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌等8种能引起疖、痈、创伤感染、溃疡的细菌具有很好的抑菌作用[16]。
1.3 抑菌活性的研究方法
中药药敏试验方法和抗生素药敏试验一样，有扩散法、稀释法和比色法等，但中药提取物一般都是混合物，颗粒较粗，成分复杂，有的成分不溶或难溶于水而易溶于有机溶剂，或对光和热不稳定。由于中药的特殊性，对试验方法的选择和操作有着更高的要求。常用的方法为扩散法[17]，即利用药物在琼脂中扩散使其周围的细菌生长受到抑制而形成抑菌圈，根据抑菌圈大小判定细菌对药物的敏感性。主要包括[18]KB法，杯碟法和平皿打孔法。结果受多种因素影响，如培养基的质量、琼脂的厚度、药物扩散力、接种菌量、孵育温度和时间等。优越性也很多，如方法简单易行、价格便宜、药物选择性灵活、结果判断易被接受。
KB法[19]即纸片琼脂扩散法，是体外药敏试验的经典方法之一，可用于多种微生物的体外药物敏感检测，有利于大量标本的处理。药物吸取琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。纸片周围抑菌浓度范围内检测菌的生长被抑制,形成透明的抑菌圈。含药纸片的制备选用吸水力强而质地均匀的滤纸，用打孔机制成直径圆片。高压灭菌烘干后，用逐片定量加样或浸泡的方法使每片含药液1020μL，置真空干燥器内抽干或37 ℃孵化箱23 h烘干。
杯碟法[20]又称小杯法或平
1 绪论
1.1 引言 1
1.2 研究意义及现状 1
1.2.1 中药提取物抑菌功效的研究意义 1
1.2.2 中药提取物抑菌功效的研究现状 2
1.3 抑菌活性的研究方法 2
1.4 研究对象 3
1.4.1 柴胡的来源 3
1.4.2 柴胡的功效及药理活性 3
1.5 本文的立题依据 4
1.6 小结 4
2 实验部分
2.1 仪器与试药 5
2.1.1 研究对象 5
2.1.2 主要仪器 5
2.1.3 主要试剂 5
2.1.4 供试菌株 5
2.2 方法 5
2.2.1 样品的初处理 5
2.2.2 菌液的制备 6
2.2.3 柴胡提取物的制备 6
2.2.4 抑菌活性的测定 6
2.2.5 数据统计分析 7
2.3 结果与讨论 7
2.3.1 柴胡不同溶剂提取物的抑菌圈大小 7
2.3.2 柴胡溶剂提取物的抑菌效果 8
2.3.3 柴胡溶剂提取物的杀菌效果 9
2.4 小结 11
结论 12
参考文献 13
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
.4 抑菌活性的测定 6
2.2.5 数据统计分析 7
2.3 结果与讨论 7
2.3.1 柴胡不同溶剂提取物的抑菌圈大小 7
2.3.2 柴胡溶剂提取物的抑菌效果 8
2.3.3 柴胡溶剂提取物的杀菌效果 9
2.4 小结 11
结论 12
参考文献 13
致谢 16
1 绪论
1.1 引言
微生物耐药性已成为全球关注的严峻问题，由多重耐药菌和许多新的病原微生物引起的感染对人类健康造成极大威胁[1]。随着抗微生物药物的广泛应用，医院感染性微生物耐药性问题日趋严重，真菌感染在临床上也有逐年上升趋势[2]。微生物的耐药性产生速度，远远大于抗生素研制速度。由于中草药具有抗菌、低毒、不易产生耐药性等特点与优势，所以开展抗菌中草药的筛选和应用研究对于动物细菌性疾病的防治具有重要意义[3]。近年来，国内外科研工作者已从中草药中筛选和寻找到一些高效抗病毒抗菌药物，其中有些已被开发应用于临床[4]。随着高科技的飞速发展，中草药抗菌研究必将走向细胞、分子甚至基因水平，这对研究并开发较高应用价值的中药制剂有着非常重要的意义[5]。
1.2 研究意义及现状
抗生素的开发及应用表现的是临床治疗细菌感染性疾病的划时代标志，其抗菌作用不容置疑，但其过敏反应、二重感染及细菌的耐药性等毒副作用使其应用受到一定的限制[6]。我国中药历史悠久，功效显著，许多研究资料表明，中药在体内外有不同程度的抑菌作用，并且较抗生素不易产生耐药性[7]。另外中药具有毒副作用小，取材方便，经济实惠的优点，因此研究和开发中药抗菌药具有重大意义[8]。近年来，国内外科研工作者已从中草药中筛选和寻找到一些高效抗病毒抗菌药物，其中有些已被开发应用于临床。随着高科技的飞速发展，中草药抗菌研究必将走向细胞、分子甚至基因水平，这对研究并开发较高应用价值的中药制剂有着非常重要的意义[9]。
1.2.1 中药提取物抑菌功效的研究意义
在我国，中药资源丰富，品种繁多，纯天然、无残留、无抗药性，具有防治疾病、提高动物生产性能和免疫力、改善畜产品品质、抗应激等作用[10]。中药发挥作用主要包括两大类成分[11]，一类是活性成分，如多糖、低聚糖、生物碱、甙类、酶类、有机醇、鞣质、多酚类、色素和挥发油等，这些成分分别有各自的独特作用，更重要的是它们相互作用显示出的协同功能；另一类是营养成分，如蛋白质、氨基酸、纤维素、脂肪、维生素、微量元素和淀粉等[8]。因此，利用我国中药的优势资源，合理开发安全有效的抗生素替代品具有重要的意义[12]。
1.2.2 中药提取物抑菌功效的研究现状
中药提取物种类繁多，具备各种各样复合的功效，如美白、抗过敏、抗衰老、祛痘、保湿、修复、抑菌杀菌。由于市场流行趋势以及中草药提取物温和、安全的特性，消费者的需求日益上升。在众多的中草药中，部分中草药蕴含多种杀菌活性成分，因而具备了抑菌、杀菌的功效。将有抑菌作用的中药应用在个人护理品中可以起到祛屑止痒、清痘等特殊功效作用。据不完全统计，这些中草药（主要是植物药）至少分属78个科，196种，其中已经试验证实具有抗细菌作用的有131种，抗真菌的有50种，抗病毒的有23种[13]。有的既有抗细菌作用，又有抗真菌作用，如黄连有广谱抗菌、抑制病毒作用，含有小檗碱称黄连素，对抗菌、抗病毒、降血糖、抗癌等方面都有重要作用[14]；丁香对多种霉菌的生长繁殖有抑制作用，是提取高效抑菌剂的良好来源[15]；主要对金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌等8种能引起疖、痈、创伤感染、溃疡的细菌具有很好的抑菌作用[16]。
1.3 抑菌活性的研究方法
中药药敏试验方法和抗生素药敏试验一样，有扩散法、稀释法和比色法等，但中药提取物一般都是混合物，颗粒较粗，成分复杂，有的成分不溶或难溶于水而易溶于有机溶剂，或对光和热不稳定。由于中药的特殊性，对试验方法的选择和操作有着更高的要求。常用的方法为扩散法[17]，即利用药物在琼脂中扩散使其周围的细菌生长受到抑制而形成抑菌圈，根据抑菌圈大小判定细菌对药物的敏感性。主要包括[18]KB法，杯碟法和平皿打孔法。结果受多种因素影响，如培养基的质量、琼脂的厚度、药物扩散力、接种菌量、孵育温度和时间等。优越性也很多，如方法简单易行、价格便宜、药物选择性灵活、结果判断易被接受。
KB法[19]即纸片琼脂扩散法，是体外药敏试验的经典方法之一，可用于多种微生物的体外药物敏感检测，有利于大量标本的处理。药物吸取琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。纸片周围抑菌浓度范围内检测菌的生长被抑制,形成透明的抑菌圈。含药纸片的制备选用吸水力强而质地均匀的滤纸，用打孔机制成直径圆片。高压灭菌烘干后，用逐片定量加样或浸泡的方法使每片含药液1020μL，置真空干燥器内抽干或37 ℃孵化箱23 h烘干。
杯碟法[20]又称小杯法或平
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