马黛中多酚含量测定方法研究(附件)
摘 要马黛来源于南美、巴西等其他地方，是人工将马黛树上的嫩叶采摘下来然后烘焙加工制成的一种茶。没食子酸、绿原酸以及丰富的多酚类物质和少量的类黄酮类物质等是它主要的活性成分。本篇论文是针对马黛中的多酚含量测定进行的方法研究，并建立马黛多酚的高效液相色谱检测方法，考察了流动相种类及洗脱条件和流速。实验结果说明，马黛多酚在流动相是0.5%的甲酸水溶液（A）和甲醇（B）采用梯度洗脱（0-10min,90%A,10%B;10-30min,50%A,50%B）的方式,当流速为1.0ml/min，检测波长为280nm,柱温为室温，进样量为10μL的情况下进行高效液相色谱法测定马黛多酚时，高效液相色谱图中的主峰与杂质峰能较好分离，且峰形较好。本实验所建立的高效液相色谱检测方法操作容易、结果准确、可靠，可用于方法考察马黛多酚的含量测定，为马黛的质量标准评价提供依据。
目 录
1 概述 1
1.1 马黛的概述 1
1.1.1 马黛的简介 1
1.1.2 马黛的化学成分 1
1.1.3 马黛药理作用 1
1.2 多酚的概述 2
1.2.1 多酚的简介 2
1.2.2 多酚检测方法 2
1.3 国内和国外对马黛的研究现状和发展前景 3
1.3.1 马黛在国外研究的现状和发展前景 4
1.3.2 马黛在国内研究的现状和发展前景 3
1.4 选题目的及意义 4
1.4.1 论文选题的意义 4
1.4.2 论文选题的目的 5
2 实验部分 6
2.1 材料与仪器 6
2.1.1 材料 6
2.2 实验方法 6
2.2.1 色谱条件 6
2.2.2 对照品没食子酸溶液的配制 7
2.2.3 马黛供试品的制备 7
2.2.4 流动相及洗脱条件 7
2.2.5 样品含量测定 7
2.3 结果分析 8
2.3.1 条件的选择 8
2.3.2 线性关系考察 12
2.3.3 精密度 13
2.3.4 回收 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
率 13
2.3.5 重复性实验 14
2.4 水分测定 15
结 论 16
参考文献 17
致 谢 19
1 概述
1.1 马黛的概述
1.1.1 马黛的简介
马黛，通常又被叫做巴拉圭草，是一种多年生的木本植物。最早产于南美、巴西等其他地方，南美人又将它称之为“仙草”[1]。它是人工将马黛树上的嫩叶采摘下来然后烘焙加工制成的一种茶,它是一种绿色的、无公害的饮品。“世界三大茶”，即马黛、咖啡和茶三者[2]。马黛生产总量和马黛贸易出口量最多的国家不是巴西和巴拉圭而是阿根廷[3]，是因为阿根廷的气候和阿根廷的土壤更适宜马黛的种植与生长。现如今很多的阿根廷人已经开始广泛使用马黛茶，阿根廷人不但已经开始将马黛茶添加到了儿童的早餐中作为食品法典，还将马黛茶归入到了阿根廷的国家战略性物资存储计划之中。现代研究表明“马黛”中含有大量天然的营养成分和生物活性物质，其中有196种都为人体所需要的[4]。
1.1.2 马黛的化学成分
现代研究表明“马黛”中含有人体所需要的196种天然的营养成分与生物活性物质。没食子酸、丰富的多酚类物质以及少量的类黄酮类物质等是马黛主要的活性成分。马黛中多酚的含量比上绿茶中的多酚含量约等于3，其许多功能的活性成分被认为是马黛多酚。新鲜的马黛中咖啡与糖等其他化学成分联合在一起。据相关研究报道，马黛中还含有其他的活性物质，包括固醇、维生素、矿物质、氨基酸丹宁酸等[5]。
1.1.3 马黛药理作用
马黛的药理作用主要表现为减肥、保护心脑血管系统、抵抗癌症等药理作用。
抗氧化的作用：马黛茶可清除自由基。自由基与生命活动休戚相关,一定量的自由基将参与生命活性物质的合成、胚胎发育等过程,是正常生命活动所必需的；不适量的自由基将会产生机体损伤, 变成各种疾病的病因及增恶因子, 会造成多种疾病的发生。由于马黛多酚类具有较好清除自由基和阻断亚油酸自氧化的功能，因而马黛具有很强大的抗氧化功能[6]。
抗心脑血管疾病的作用：马黛能明显降低老鼠血清中三磷酸腺苷的降解，增进血管扩张与抗血小板凝结，有降血压的作用。马黛能够治疗贫血、弱血液循环以及静脉曲张。马黛中大量的类黄酮不仅能够有效地抑制由过氧化亚硝酸盐诱导的蛋白质硝化，还可以对抗因过氧化硝酸盐诱导造成的细胞毒性，进而阻止动脉粥样硬化、糖尿病综合症和神经元退化[7]。
抵抗癌症的作用：马黛中含有多种生物活性物质，它不仅能够防止包括癌症在内的多种慢性病的发生，还能抑制口腔癌细胞的增生。Eliira等研究发现马黛虽然具有很高的抑制抗拓朴异构酶2的活性能力，但是却对拓朴异构酶1的活力没有抑制作用。它还对所有鳞片状细胞有抵御能力，其抵抗能力效果和剂量有关[8]。
1.2 多酚的概述
1.2.1 多酚的简介
植物多酚是一种含有羧基与酚羟基的代谢产物成分，C6C1型和C6C3型是自然界中发现的酚酸类物质的主要骨架类型，广泛存在于蔬菜、水果、豆类、谷物类和茶等植物之中。多酚特有的结构使它具有抗肿瘤、抗突变、抗变态反应、抗氧化、抗动脉硬化、防治冠心病和中风等心脑血管疾病以及抗菌等。食品、化妆品、日用化学品、医药以及保健等领域已广泛应用多酚[9]。作为一种多年生木本植物的马黛，其主要的活性、药用成分也是多酚，研究表明没食子酸等多酚类物质以及少量的类黄酮类物质是马黛的主要成分[10]。
1.2.2 多酚检测方法
现在多酚的分析方法主要借助高效液相色谱分析、紫外光谱分析或者薄层色谱法分析。由于HPLC具有分析速度快、定量分析精确度高、分辨率高等多种优点，并可用于实验室少量色谱纯样品的制备，所以马黛多酚类化合物的分离鉴定经常用到HPLC。
高效液相色谱法（HPLC）又叫“近代柱色谱”、“高分离度液相色谱”、“高压液相色谱”、“高速液相色谱”等[11]。由于HPLC灵敏度高、选择性高、性质稳定和可靠的优点，所以在药用物质的含量测定和组成分析，以及质量控制方面得到了众多的应用[12]。《中国药典》中具有含量测定方法的品种90%以上均采用高效液相色谱法。
高效液相色谱法的分离原理是各组分溶解于液相中，各组分在经过固定相的时候，由于固定相的吸附作用强弱和大小的不同，就会造成各组分在固定相中的停滞时间不相同，因此出柱先后也不同[13]。通过流动相带动各待测组分依次流出，再经检测器检测出各成分的含量多少。
高效液相色谱法（HPLC）是在色谱条件的基础之上，通过改变柱压的高低和填料颗粒度的大小，紧接着在传统液相色谱法的基础上引入GC的理论塔板数，同时在技术上引进高压输液泵，高灵敏度的检测器和高效的固定相使其操作的半自动化强、分离程度高、检测灵敏度高、应用范围广、分析速度快 [14]。
目 录
1 概述 1
1.1 马黛的概述 1
1.1.1 马黛的简介 1
1.1.2 马黛的化学成分 1
1.1.3 马黛药理作用 1
1.2 多酚的概述 2
1.2.1 多酚的简介 2
1.2.2 多酚检测方法 2
1.3 国内和国外对马黛的研究现状和发展前景 3
1.3.1 马黛在国外研究的现状和发展前景 4
1.3.2 马黛在国内研究的现状和发展前景 3
1.4 选题目的及意义 4
1.4.1 论文选题的意义 4
1.4.2 论文选题的目的 5
2 实验部分 6
2.1 材料与仪器 6
2.1.1 材料 6
2.2 实验方法 6
2.2.1 色谱条件 6
2.2.2 对照品没食子酸溶液的配制 7
2.2.3 马黛供试品的制备 7
2.2.4 流动相及洗脱条件 7
2.2.5 样品含量测定 7
2.3 结果分析 8
2.3.1 条件的选择 8
2.3.2 线性关系考察 12
2.3.3 精密度 13
2.3.4 回收 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
率 13
2.3.5 重复性实验 14
2.4 水分测定 15
结 论 16
参考文献 17
致 谢 19
1 概述
1.1 马黛的概述
1.1.1 马黛的简介
马黛，通常又被叫做巴拉圭草，是一种多年生的木本植物。最早产于南美、巴西等其他地方，南美人又将它称之为“仙草”[1]。它是人工将马黛树上的嫩叶采摘下来然后烘焙加工制成的一种茶,它是一种绿色的、无公害的饮品。“世界三大茶”，即马黛、咖啡和茶三者[2]。马黛生产总量和马黛贸易出口量最多的国家不是巴西和巴拉圭而是阿根廷[3]，是因为阿根廷的气候和阿根廷的土壤更适宜马黛的种植与生长。现如今很多的阿根廷人已经开始广泛使用马黛茶，阿根廷人不但已经开始将马黛茶添加到了儿童的早餐中作为食品法典，还将马黛茶归入到了阿根廷的国家战略性物资存储计划之中。现代研究表明“马黛”中含有大量天然的营养成分和生物活性物质，其中有196种都为人体所需要的[4]。
1.1.2 马黛的化学成分
现代研究表明“马黛”中含有人体所需要的196种天然的营养成分与生物活性物质。没食子酸、丰富的多酚类物质以及少量的类黄酮类物质等是马黛主要的活性成分。马黛中多酚的含量比上绿茶中的多酚含量约等于3，其许多功能的活性成分被认为是马黛多酚。新鲜的马黛中咖啡与糖等其他化学成分联合在一起。据相关研究报道，马黛中还含有其他的活性物质，包括固醇、维生素、矿物质、氨基酸丹宁酸等[5]。
1.1.3 马黛药理作用
马黛的药理作用主要表现为减肥、保护心脑血管系统、抵抗癌症等药理作用。
抗氧化的作用：马黛茶可清除自由基。自由基与生命活动休戚相关,一定量的自由基将参与生命活性物质的合成、胚胎发育等过程,是正常生命活动所必需的；不适量的自由基将会产生机体损伤, 变成各种疾病的病因及增恶因子, 会造成多种疾病的发生。由于马黛多酚类具有较好清除自由基和阻断亚油酸自氧化的功能，因而马黛具有很强大的抗氧化功能[6]。
抗心脑血管疾病的作用：马黛能明显降低老鼠血清中三磷酸腺苷的降解，增进血管扩张与抗血小板凝结，有降血压的作用。马黛能够治疗贫血、弱血液循环以及静脉曲张。马黛中大量的类黄酮不仅能够有效地抑制由过氧化亚硝酸盐诱导的蛋白质硝化，还可以对抗因过氧化硝酸盐诱导造成的细胞毒性，进而阻止动脉粥样硬化、糖尿病综合症和神经元退化[7]。
抵抗癌症的作用：马黛中含有多种生物活性物质，它不仅能够防止包括癌症在内的多种慢性病的发生，还能抑制口腔癌细胞的增生。Eliira等研究发现马黛虽然具有很高的抑制抗拓朴异构酶2的活性能力，但是却对拓朴异构酶1的活力没有抑制作用。它还对所有鳞片状细胞有抵御能力，其抵抗能力效果和剂量有关[8]。
1.2 多酚的概述
1.2.1 多酚的简介
植物多酚是一种含有羧基与酚羟基的代谢产物成分，C6C1型和C6C3型是自然界中发现的酚酸类物质的主要骨架类型，广泛存在于蔬菜、水果、豆类、谷物类和茶等植物之中。多酚特有的结构使它具有抗肿瘤、抗突变、抗变态反应、抗氧化、抗动脉硬化、防治冠心病和中风等心脑血管疾病以及抗菌等。食品、化妆品、日用化学品、医药以及保健等领域已广泛应用多酚[9]。作为一种多年生木本植物的马黛，其主要的活性、药用成分也是多酚，研究表明没食子酸等多酚类物质以及少量的类黄酮类物质是马黛的主要成分[10]。
1.2.2 多酚检测方法
现在多酚的分析方法主要借助高效液相色谱分析、紫外光谱分析或者薄层色谱法分析。由于HPLC具有分析速度快、定量分析精确度高、分辨率高等多种优点，并可用于实验室少量色谱纯样品的制备，所以马黛多酚类化合物的分离鉴定经常用到HPLC。
高效液相色谱法（HPLC）又叫“近代柱色谱”、“高分离度液相色谱”、“高压液相色谱”、“高速液相色谱”等[11]。由于HPLC灵敏度高、选择性高、性质稳定和可靠的优点，所以在药用物质的含量测定和组成分析，以及质量控制方面得到了众多的应用[12]。《中国药典》中具有含量测定方法的品种90%以上均采用高效液相色谱法。
高效液相色谱法的分离原理是各组分溶解于液相中，各组分在经过固定相的时候，由于固定相的吸附作用强弱和大小的不同，就会造成各组分在固定相中的停滞时间不相同，因此出柱先后也不同[13]。通过流动相带动各待测组分依次流出，再经检测器检测出各成分的含量多少。
高效液相色谱法（HPLC）是在色谱条件的基础之上，通过改变柱压的高低和填料颗粒度的大小，紧接着在传统液相色谱法的基础上引入GC的理论塔板数，同时在技术上引进高压输液泵，高灵敏度的检测器和高效的固定相使其操作的半自动化强、分离程度高、检测灵敏度高、应用范围广、分析速度快 [14]。
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