60co辐射对丽蚜小蜂死亡率及其体内wolbachia的影响
摘要：为了探究60Co辐射对丽蚜小蜂死亡率及其体内Wolbachia的影响。将当天羽化的丽蚜小蜂放入平底玻璃管内，设置5个处理组，每个处理组30头0天羽化的丽蚜小蜂成虫，分别用60、80、100 Gy的60Co射线辐射处理，设置对照。然后将不同处理组的丽蚜小蜂培养在指形管中，用10%蔗糖水饲喂，每24h观察一次，统计14天中丽蚜小蜂成虫死亡率，每个处理组收集9头丽蚜小蜂，用DNA提取试剂盒法提取DNA，依据Wolbachia 的wsp 基因设计引物，用PCR扩增反应，在凝胶成像系统下观察并拍照记录结果。60Co辐射剂量与丽蚜小蜂死亡率成正比，且无法去除丽蚜小蜂体内的Wolbachia。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 供试材料2
1.1.1 供试虫源2
1.1.2 辐射源2
1.2 试验方法2
2 结果与分析3
2.1 丽蚜小蜂体内Wolbachia3
2.2 丽蚜小蜂死亡率变化3
3 讨论4
3.1 不同剂量对丽蚜小蜂体内Wolbachia的影响4
3.2 不同剂量对丽蚜小蜂寿命的影响 4
致谢4
参考文献5
60Co辐射对丽蚜小蜂死亡率及其体内Wolbachia的影响
引言
引言
丽蚜小蜂Encarsia formosa (Gahan) 属膜翅目(Hymenoptera)蚜小蜂科（Aphelinidae），是一种孤雌生殖的寄生蜂，是粉虱的寄生性天敌。寄生在寄生生蜂内的Wolbachia会导致寄生蜂细胞进行孤雌生殖。人们主要研究丽蚜小蜂对温室白粉虱、烟粉虱和银叶粉虱的控制作用。
本文运用不同剂量60Co辐射对丽蚜小蜂进行处理，观察辐射对其死亡率的影响，并检测辐射后赤眼蜂体内Wolbachia的变化，得出合理结论。
1 材料与方法
1．1 供试材料
1．1．1 供试虫源 丽蚜小蜂为北京依科曼公司购买的商品化天敌。购买
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
时为丽蚜小蜂黑蛹期，其寄主是温室白粉虱若虫。羽化后放至直径口约3.5cm、高约9.5cm指形管中，在养虫室培养。养虫室温度25±1℃，相对湿度为65%～75%，光周期16L:8D。
1．1．2 辐射源 南京航空航天大学辐照中心的60Co辐射源。
1．2 试验方法
将120头羽化0~1天的丽蚜小蜂成虫，分成3个处理组,1个对照组，每组30头成虫，3个处理组分别用60、80、100 Gy的60Co射线辐射处理，其中剂量率为2 Gy/min，对照组不进行辐射处理，每组重复试验三次。然后将处理组和对照组的丽蚜小蜂培养在指形管中，用10%蔗糖水饲喂，每24小时观察统计死亡丽蚜小蜂头数，累计计算14天中丽蚜小蜂成虫死亡率。
处理24小时后，分别在每个处理组中的收集9头丽蚜小蜂，用DNA提取试剂盒法提取DNA，用于检测Wolbachia。
DNA提取试剂盒法选用Wizard? SV Genomic DNA Purification Kit（A2360，Promega，Madison，WI）试剂盒。提取步骤如下：
配制提取DNA所需的Master Mix。Mix配制所需试剂及其提前单头丽蚜小蜂总DNA的用量如下表所示
Master Mix配制体系
Master Mix System
试剂
用量（单位：μL）
Nuclei Lysis Solution
200
0.5M EDTA (PH8.0)
50
Proteinase K (20mg/ml)
20
RNase A Solution (4mg/ml)
5
总体积
275
将单头丽蚜小蜂挑入1.5mL的离心管中，加入50 μL Master Mix，用灭菌的一次性塑料碾槌对虫体充分研磨碎。
加入225 μL Mix，冲洗研磨棒。离心管涡旋混匀，并简单离心，放入55 ℃水浴锅孵育1618小时。
往单个离心管中加入250 μL的Wizard? SV Lysis Buffer，涡旋混匀，放入离心机，以13000 g的转速离心5 min。
将单个离心管上清液转入单个Wizard? SV Minicolumn Assembly集合装置中。
将装置放入离心机，以13000 g的转速离心3 min，使得DNA可以集合到Minicolumn柱子上。
将Minicolumn从集合装置上取下，倒弃Collection Tube中的液体，并将Minicolumn重新放入装置中。
往单个装置中加入650 μL的Wizard? SV Wash Solution，放入离心机，以13000 g的转速离心1 min，倒弃Collection Tube中的液体，重复此步骤，共洗脱4次。
将倒弃Collection Tube中液体的装置放入离心机，以13000的转速离心2 min，使Minicolumn干燥。
将Minicolumn 转移到一个新的1.5 mL离心管中，室温放置10 min。
往Minicolumn中加入65 ℃ 70 mL的NucleaseFree Water。室温放置2 min。
将Minicolumn和离心管的装置放入离心机中，以13000 g的转速离心1 min。
将Minicolumn移走，离心管中的液体就为所提取的DNA，可以立即使用或置于20 ℃长期保存。
依据Wolbachia 的wsp 基因设计引物：上游引物81F: 5TGGTCCAATAAGTGATGAAGAAAC3;下游引物691R: 5AAAAATTAAACGCTACTCCA3。PCR 扩增反应参照陆明红等( 2011) 方法。PCR扩增体系为25 μL，包括14．25 μL ddH2O、2．5 μL10 × Buffer、2．5 μL MgCl2、2．5 μL dNTPs、上游和下游引物各0．5 μL、0．25 μL 的Taq DNA 聚合酶、2 μL 模板。扩增条件： 94℃预变性3 min，94℃变性30 s； 55℃复性45 s，72℃延伸1 min，共35 个循环； 最后72℃ 延伸7 min。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 供试材料2
1.1.1 供试虫源2
1.1.2 辐射源2
1.2 试验方法2
2 结果与分析3
2.1 丽蚜小蜂体内Wolbachia3
2.2 丽蚜小蜂死亡率变化3
3 讨论4
3.1 不同剂量对丽蚜小蜂体内Wolbachia的影响4
3.2 不同剂量对丽蚜小蜂寿命的影响 4
致谢4
参考文献5
60Co辐射对丽蚜小蜂死亡率及其体内Wolbachia的影响
引言
引言
丽蚜小蜂Encarsia formosa (Gahan) 属膜翅目(Hymenoptera)蚜小蜂科（Aphelinidae），是一种孤雌生殖的寄生蜂，是粉虱的寄生性天敌。寄生在寄生生蜂内的Wolbachia会导致寄生蜂细胞进行孤雌生殖。人们主要研究丽蚜小蜂对温室白粉虱、烟粉虱和银叶粉虱的控制作用。
本文运用不同剂量60Co辐射对丽蚜小蜂进行处理，观察辐射对其死亡率的影响，并检测辐射后赤眼蜂体内Wolbachia的变化，得出合理结论。
1 材料与方法
1．1 供试材料
1．1．1 供试虫源 丽蚜小蜂为北京依科曼公司购买的商品化天敌。购买
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时为丽蚜小蜂黑蛹期，其寄主是温室白粉虱若虫。羽化后放至直径口约3.5cm、高约9.5cm指形管中，在养虫室培养。养虫室温度25±1℃，相对湿度为65%～75%，光周期16L:8D。
1．1．2 辐射源 南京航空航天大学辐照中心的60Co辐射源。
1．2 试验方法
将120头羽化0~1天的丽蚜小蜂成虫，分成3个处理组,1个对照组，每组30头成虫，3个处理组分别用60、80、100 Gy的60Co射线辐射处理，其中剂量率为2 Gy/min，对照组不进行辐射处理，每组重复试验三次。然后将处理组和对照组的丽蚜小蜂培养在指形管中，用10%蔗糖水饲喂，每24小时观察统计死亡丽蚜小蜂头数，累计计算14天中丽蚜小蜂成虫死亡率。
处理24小时后，分别在每个处理组中的收集9头丽蚜小蜂，用DNA提取试剂盒法提取DNA，用于检测Wolbachia。
DNA提取试剂盒法选用Wizard? SV Genomic DNA Purification Kit（A2360，Promega，Madison，WI）试剂盒。提取步骤如下：
配制提取DNA所需的Master Mix。Mix配制所需试剂及其提前单头丽蚜小蜂总DNA的用量如下表所示
Master Mix配制体系
Master Mix System
试剂
用量（单位：μL）
Nuclei Lysis Solution
200
0.5M EDTA (PH8.0)
50
Proteinase K (20mg/ml)
20
RNase A Solution (4mg/ml)
5
总体积
275
将单头丽蚜小蜂挑入1.5mL的离心管中，加入50 μL Master Mix，用灭菌的一次性塑料碾槌对虫体充分研磨碎。
加入225 μL Mix，冲洗研磨棒。离心管涡旋混匀，并简单离心，放入55 ℃水浴锅孵育1618小时。
往单个离心管中加入250 μL的Wizard? SV Lysis Buffer，涡旋混匀，放入离心机，以13000 g的转速离心5 min。
将单个离心管上清液转入单个Wizard? SV Minicolumn Assembly集合装置中。
将装置放入离心机，以13000 g的转速离心3 min，使得DNA可以集合到Minicolumn柱子上。
将Minicolumn从集合装置上取下，倒弃Collection Tube中的液体，并将Minicolumn重新放入装置中。
往单个装置中加入650 μL的Wizard? SV Wash Solution，放入离心机，以13000 g的转速离心1 min，倒弃Collection Tube中的液体，重复此步骤，共洗脱4次。
将倒弃Collection Tube中液体的装置放入离心机，以13000的转速离心2 min，使Minicolumn干燥。
将Minicolumn 转移到一个新的1.5 mL离心管中，室温放置10 min。
往Minicolumn中加入65 ℃ 70 mL的NucleaseFree Water。室温放置2 min。
将Minicolumn和离心管的装置放入离心机中，以13000 g的转速离心1 min。
将Minicolumn移走，离心管中的液体就为所提取的DNA，可以立即使用或置于20 ℃长期保存。
依据Wolbachia 的wsp 基因设计引物：上游引物81F: 5TGGTCCAATAAGTGATGAAGAAAC3;下游引物691R: 5AAAAATTAAACGCTACTCCA3。PCR 扩增反应参照陆明红等( 2011) 方法。PCR扩增体系为25 μL，包括14．25 μL ddH2O、2．5 μL10 × Buffer、2．5 μL MgCl2、2．5 μL dNTPs、上游和下游引物各0．5 μL、0．25 μL 的Taq DNA 聚合酶、2 μL 模板。扩增条件： 94℃预变性3 min，94℃变性30 s； 55℃复性45 s，72℃延伸1 min，共35 个循环； 最后72℃ 延伸7 min。
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