pxzp008载体改造及其应用
本试验为探寻一种快速的、便捷的以及低成本的载体，即通过在载体pXZP008上插入pCLEAN-G265的泛素启动子（Ubi-promoter），从而对pXZP008载体进行改造；利用水稻原生质体瞬时转化体系，将水稻OsAGO2、OsPRMT5基因分别连接到表达载体pXZP008-Ubi上，转入水稻原生质体中，并通过CO-IP验证蛋白OsAGO2和OsPRMT5是否存在互作关系。pXZP008-Ubi质粒的构建及应用为基因重组提供了一个快速有效的手段，也为验证其功能和蛋白互作方面的研究奠定了基础。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Keywords 1
引言 1
1 材料与仪器 2
1.1实验材料 2
1.1.1 植物 2
1.1.2引物 2
1.1.3质粒和菌株 2
1.1.4培养基 3
1.2主要仪器 3
2.实验方法 3
2.1 pXZP008载体的改造 3
2.1.1 pCLEANG265的泛素启动子的克隆 3
2.1.2 DNA的回收 3
2.1.3 pXZP008和pCLEANG265载体连接 3
2.1.4大肠杆菌JM109超级感受态细胞的制备 4
2.1.5热激转化大肠杆菌 4
2.1.6菌落PCR鉴定 4
2.1.7 质粒提取 4
2.1.8质粒测序 5
2.2 pXZP008Flag: OsAGO2载体的构建 5
2.2.1 OsAGO2的克隆 5
2.2.2 酶切与pXZP008载体连接 5
2.3 pXZP008HA:OsPRMT5载体的构建 6
2.3.1 OsPRMT5的克隆 6
2.3.2 酶切与pXZP008载体连接 6
2.4 水稻原生质体的提取 7
2.4.1水稻黄化苗的培养 7
2.4.2 水稻原生质体的分离 7
2.5蛋白表达 7
2.5. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
1转化水稻原生质体 7
2.5.2检测总蛋白 7
2.6 COIP验证 7
2.6.1 SDSPAGE 7
2.6.2转膜 8
2.6.3免疫反应 8
3．结果与分析 8
3.1 pXZP008_Ubi克隆结果与分析 9
3.2 pXZP008Flag: OsAGO2的构建结果与验证 9
3.3 pXZP008HA:OsPRMT5的的构建结果与验证 10
3.4 表达载体pXZP008Flag: OsAGO2和 pXZP008HA:OsPRMT5的构建结果与分析 10
3.5 pXZP008Flag: OsAGO2和 pXZP008HA:OsPRMT5免疫反应的结果与分析 11
4．讨论 11
致谢 12
参考文献 12
关于pXZP008载体改造与应用
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Keywords 1
引言 1
1 材料与仪器 2
1.1实验材料 2
1.1.1 植物 2
1.1.2引物 2
1.1.3质粒和菌株 2
1.1.4培养基 3
1.2主要仪器 3
2.实验方法 3
2.1 pXZP008载体的改造 3
2.1.1 pCLEANG265的泛素启动子的克隆 3
2.1.2 DNA的回收 3
2.1.3 pXZP008和pCLEANG265载体连接 3
2.1.4大肠杆菌JM109超级感受态细胞的制备 4
2.1.5热激转化大肠杆菌 4
2.1.6菌落PCR鉴定 4
2.1.7 质粒提取 4
2.1.8质粒测序 5
2.2 pXZP008Flag: OsAGO2载体的构建 5
2.2.1 OsAGO2的克隆 5
2.2.2 酶切与pXZP008载体连接 5
2.3 pXZP008HA:OsPRMT5载体的构建 6
2.3.1 OsPRMT5的克隆 6
2.3.2 酶切与pXZP008载体连接 6
2.4 水稻原生质体的提取 7
2.4.1水稻黄化苗的培养 7
2.4.2 水稻原生质体的分离 7
2.5蛋白表达 7
2.5. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
1转化水稻原生质体 7
2.5.2检测总蛋白 7
2.6 COIP验证 7
2.6.1 SDSPAGE 7
2.6.2转膜 8
2.6.3免疫反应 8
3．结果与分析 8
3.1 pXZP008_Ubi克隆结果与分析 9
3.2 pXZP008Flag: OsAGO2的构建结果与验证 9
3.3 pXZP008HA:OsPRMT5的的构建结果与验证 10
3.4 表达载体pXZP008Flag: OsAGO2和 pXZP008HA:OsPRMT5的构建结果与分析 10
3.5 pXZP008Flag: OsAGO2和 pXZP008HA:OsPRMT5免疫反应的结果与分析 11
4．讨论 11
致谢 12
参考文献 12
关于pXZP008载体改造与应用
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