拟南芥核输入载体plantkap调控抗病性的机制

系统获得性抗性(systemic acquired resistance, SAR)是植物抵御病原物侵害的一种机制，信号分子水杨酸(salicylic acid, SA)在其中扮演着重要角色。前人研究发现，病程相关基因非表达子1 (nonexpressor of pathogenesis related genes 1, NPR1)是水杨酸信号通路中非常重要的正调控因子，需要以单体形式进入细胞核激活下游病程相关蛋白(pathogenesis related protein, PR)的基因表达。而入核过程需要核输入载体蛋白(importin, IMP)帮助才能得以完成。PLANTKAP是一类IMP蛋白，但对其在拟南芥中所发挥的功能尚不清楚。实验室前期通过筛选拟南芥imp家族突变体发现，plantkap突变体与水杨酸信号通路有关，且改变了NPR1的亚细胞定位。本文通过克隆拟南芥中NPR1、PLANTKAP、IMPα-3基因，构建基因表达载体，利用酵母双杂交技术进行蛋白互作分析。实验结果表明NPR1、PLANTKAP和IMPα-3之间并不能两两互作，PLANTKAP可能需结合其他转录因子调控水杨酸信号通路。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验材料2
1.1.1植物材料及菌株2
1.1.2常用酶2
1.1.3培养基、常用试剂及其配制2
1.2实验方法 3
1.2.1引物设计3
1.2.2拟南芥总RNA的提取3
1.2.3 RTPCR获得目的基因3
1.2.4回收PCR扩增产物4
1.2.5目的基因及载体的体外连接4
1.2.6转化4
1.2.7重组体的筛选与鉴定4
1.2.8酵母双杂交实验4
2结果与分析5
2.1拟南芥提总RNA琼脂糖凝胶电泳结果5
2.2拟南芥酵母双杂交载体构建 5
2.3 PLANTKAP、NPR1及IMPα3的互作分析7
3讨论 8
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致谢9
参考文献9
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