某地区猫疱疹病毒的调查
某地区猫疱疹病毒的调查[20200507190414]
摘要：猫疱疹病毒（FHV-1）是猫传染性鼻气管炎（FR）的病原，可引起猫的上呼吸道感染，是一种猫常见的急性，高度接触性上呼吸道疾病。临床以角膜结膜炎、上呼吸道感染和流产为特征，但以上呼吸道症状为主。FHV只感染猫及猫科动物，发病率可达100%。虽然成年猫感染后大多痊愈，病死率很低，但幼猫感染之后症状明显严重，病死率可达50%，甚至终生带毒排毒，并且可以垂直传播，危害极大。本文通过设计特异性扩增FHV-1的引物，使用猫三联弱毒苗为模板建立了检测FHV-1的PCR诊断方法，并将建立的PCR检测方法对临床样品进行了检测。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
关键字:猫疱疹病毒；PCR；检测
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1.材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1 疫苗 2
1.1.2病料收集2
1.1.3主要试剂2
1.1.4 主要仪器设备2
1.2 方法2
1.2.1 DNA提取2
1.2.2引物设计2
1.2.3 PCR检测方法方法建立 3
1.2.4 PCR产物检测3
2 .结果 3
2.1 疫苗中FHV-1 PCR扩增3
2.2 病料中FHV-1检测4
2.3 临床病史调查4
3 讨论5
3.1 本实验的研究意义5
3．2 PCR条件的优化6
致谢 6
参考文献 7
南京地区猫疱疹病毒的调查
引言
猫疱疹病毒1型（FHV-1）是猫传染性鼻气管炎（FR）的病原，猫的上呼吸道感染性疾病是猫的常见性疾病之一， 主要是由病毒和细菌引起的，可以导致猫的死亡。造成猫上呼吸道感染常见的病原体有猫鼻气管炎病毒、猫杯状病毒、衣原体和支原体等，可直接由感染的病猫传染给健康猫，也可通过患病猫的眼睛、鼻腔分泌物和唾液传播，猫上呼吸道感染大约有40%～45%是由传染性鼻气管炎病毒引起的[1]。FHV-1是1958年由Crandell和Maurer首次从美国患呼吸道疾病的幼猫体内分离鉴定出来，随后在欧洲、亚洲等一些国家也相继报道检测道该病毒。FHV-1只感染猫及猫科动物，发病率可达1 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
00%。虽然成年猫感染后大多痊愈，病死率很低，但幼猫感染之后症状明显严重，病死率可达50%，甚至终生带毒排毒，并且可以垂直传播，危害极大[3]。FHV-1可引起猫的上呼吸道感染，是一种猫常见的急性，高度接触性上呼吸道疾病。临床以角膜结膜炎、上呼吸道感染和流产为特征，但以上呼吸道症状为主。FHV-1属于疱疹病毒科里甲型疱疹病毒亚科成员，为双股DNA病毒，具有疱疹病毒的一般形态特征[5]。随着人们物质和精神生活的不断提高，饲养动物已经成为一些家庭一项既有意义又不可或缺的娱乐活动。但由于犬猫饲养数量的日渐增大，其疾病也开始逐渐增多，且种类复杂。目前门诊上因感染猫疱疹病毒的病例也不少，可是在南京这样一个地方，没有看到有人单独针对临床上猫感染疱疹病毒1型这样一个病例进行一个完善的调查和研究。由此，通过在门诊实习时候采集的所有猫的样品，并详细记录其姓名，品种，年龄，免疫情况，有无呼吸道疾病以及采样时间等数据，进行实验室诊断，对南京地区猫感染疱疹病毒1型的这样一个病例进行系统的调查与统计。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 疫苗
荷兰英特威猫三联弱毒苗（猫温热、猫传染性鼻气管炎和猫杯状病毒）、犬二联弱毒苗（犬瘟热、犬细小病毒）、全四联弱毒苗（犬瘟热、犬细小、副流感和腺病毒）、狂犬弱毒苗。
1．1．2 病料收集
在门诊上（包括大学动物医院，南京狮皇宠物医院，南京科纳宠物医院），利用无菌棉拭子采集猫的鼻涕和唾液，后将棉拭子头直接剪入1.5ml的EP管中（内含10%甘油加生理盐水），最后将装有样品的EP管放入-20℃保存备用。
1．1．3 主要试剂
裂解液（10 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)，0.1 mol/L EDTA (pH8.0)，0.5%(m/v) SDS，20μg/mg无DNase的胰RNase。）、蛋白酶K、Tris饱和酚、醋酸铵、乙醇、TE、2×Taq PCR MasterMix、TAE电泳缓冲，液参照《分子克隆实验指南》（第二版）配制[9]
1．1．4 主要仪器设备
离心机由eppendorf公司生产，Centrifuge 5417R型；PCR仪由Applied Biosystems公司生产，Veriti 96 Well thermal cycler型；电泳仪由南京科宝仪器研究所生产，EPS604型；凝胶成像仪由上海天能科技有限公司生产，Tanon GIS-2500型。
1．2 方法
1．2．1 DNA提取
疫苗DNA提取方法：取疫苗200μL加入2×裂解液200μL，37℃温浴30min。加入蛋白酶K（20 mg/mL）3μL，上下颠倒混匀，置于55℃水浴中1h，中间不时上下颠倒混匀。冷却至室温，加入等体积的Tris饱和酚，振荡混匀，12000r/min离心15min分离两相，将上层水相转移至新的离心管中，用Tris饱和酚再次抽提1次，收集水相。加入0.2倍体积10mol/L醋酸铵和2倍体积的乙醇，上下颠倒混匀，12000r/min离心10min，弃上清。DNA沉淀用70％的乙醇洗涤1次，12000r/min离心15min，弃上清，加入30μL TE 溶解DNA，用Nanodrop测定DNA浓度，分装后-2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
0℃保存备用。
病料DNA提取方法：取采集的病料400μL加入10×裂解液40μL，37℃温浴30min。加入蛋白酶K（20 mg/mL）3μL，上下颠倒混匀，置于55℃水浴中1h，中间不时上下颠倒混匀。冷却至室温，加入等体积的Tris饱和酚，振荡混匀，12000r/min离心15min分离两相，将上层水相转移至新的离心管中，用Tris饱和酚再次抽提1次，收集水相。加入0.2倍体积10mol/L醋酸铵和2倍体积的乙醇，上下颠倒混匀，12000r/min离心10min，弃上清。DNA沉淀用70％的乙醇洗涤1次，12000r/min离心15min，弃上清，加入30μL TE 溶解DNA，用Nanodrop测定DNA浓度，分装后-20℃保存备用。
1．2．2 引物设计
参考文献设计引物[3]，设计引物如下：
上游引物P1：5’-CGCTTGAGGACAGCATAA-3’
下游引物P2：5’-TGGGAAACAGACCAGAGA-3’
该引物对能扩增出FHV-1病毒500 bp的基因片段，引物由英潍捷基（上海）贸易有限公司合成。
1．2．3 PCR检测方法建立
PCR反应体系：2×Taq PCR MasterMix 12.5μL
P1 0.5μL
P2 0.5μL
DNA 5.0μL
H2O 6.5μL
摘要：猫疱疹病毒（FHV-1）是猫传染性鼻气管炎（FR）的病原，可引起猫的上呼吸道感染，是一种猫常见的急性，高度接触性上呼吸道疾病。临床以角膜结膜炎、上呼吸道感染和流产为特征，但以上呼吸道症状为主。FHV只感染猫及猫科动物，发病率可达100%。虽然成年猫感染后大多痊愈，病死率很低，但幼猫感染之后症状明显严重，病死率可达50%，甚至终生带毒排毒，并且可以垂直传播，危害极大。本文通过设计特异性扩增FHV-1的引物，使用猫三联弱毒苗为模板建立了检测FHV-1的PCR诊断方法，并将建立的PCR检测方法对临床样品进行了检测。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
关键字:猫疱疹病毒；PCR；检测
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1.材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1 疫苗 2
1.1.2病料收集2
1.1.3主要试剂2
1.1.4 主要仪器设备2
1.2 方法2
1.2.1 DNA提取2
1.2.2引物设计2
1.2.3 PCR检测方法方法建立 3
1.2.4 PCR产物检测3
2 .结果 3
2.1 疫苗中FHV-1 PCR扩增3
2.2 病料中FHV-1检测4
2.3 临床病史调查4
3 讨论5
3.1 本实验的研究意义5
3．2 PCR条件的优化6
致谢 6
参考文献 7
南京地区猫疱疹病毒的调查
引言
猫疱疹病毒1型（FHV-1）是猫传染性鼻气管炎（FR）的病原，猫的上呼吸道感染性疾病是猫的常见性疾病之一， 主要是由病毒和细菌引起的，可以导致猫的死亡。造成猫上呼吸道感染常见的病原体有猫鼻气管炎病毒、猫杯状病毒、衣原体和支原体等，可直接由感染的病猫传染给健康猫，也可通过患病猫的眼睛、鼻腔分泌物和唾液传播，猫上呼吸道感染大约有40%～45%是由传染性鼻气管炎病毒引起的[1]。FHV-1是1958年由Crandell和Maurer首次从美国患呼吸道疾病的幼猫体内分离鉴定出来，随后在欧洲、亚洲等一些国家也相继报道检测道该病毒。FHV-1只感染猫及猫科动物，发病率可达1 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
00%。虽然成年猫感染后大多痊愈，病死率很低，但幼猫感染之后症状明显严重，病死率可达50%，甚至终生带毒排毒，并且可以垂直传播，危害极大[3]。FHV-1可引起猫的上呼吸道感染，是一种猫常见的急性，高度接触性上呼吸道疾病。临床以角膜结膜炎、上呼吸道感染和流产为特征，但以上呼吸道症状为主。FHV-1属于疱疹病毒科里甲型疱疹病毒亚科成员，为双股DNA病毒，具有疱疹病毒的一般形态特征[5]。随着人们物质和精神生活的不断提高，饲养动物已经成为一些家庭一项既有意义又不可或缺的娱乐活动。但由于犬猫饲养数量的日渐增大，其疾病也开始逐渐增多，且种类复杂。目前门诊上因感染猫疱疹病毒的病例也不少，可是在南京这样一个地方，没有看到有人单独针对临床上猫感染疱疹病毒1型这样一个病例进行一个完善的调查和研究。由此，通过在门诊实习时候采集的所有猫的样品，并详细记录其姓名，品种，年龄，免疫情况，有无呼吸道疾病以及采样时间等数据，进行实验室诊断，对南京地区猫感染疱疹病毒1型的这样一个病例进行系统的调查与统计。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 疫苗
荷兰英特威猫三联弱毒苗（猫温热、猫传染性鼻气管炎和猫杯状病毒）、犬二联弱毒苗（犬瘟热、犬细小病毒）、全四联弱毒苗（犬瘟热、犬细小、副流感和腺病毒）、狂犬弱毒苗。
1．1．2 病料收集
在门诊上（包括大学动物医院，南京狮皇宠物医院，南京科纳宠物医院），利用无菌棉拭子采集猫的鼻涕和唾液，后将棉拭子头直接剪入1.5ml的EP管中（内含10%甘油加生理盐水），最后将装有样品的EP管放入-20℃保存备用。
1．1．3 主要试剂
裂解液（10 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)，0.1 mol/L EDTA (pH8.0)，0.5%(m/v) SDS，20μg/mg无DNase的胰RNase。）、蛋白酶K、Tris饱和酚、醋酸铵、乙醇、TE、2×Taq PCR MasterMix、TAE电泳缓冲，液参照《分子克隆实验指南》（第二版）配制[9]
1．1．4 主要仪器设备
离心机由eppendorf公司生产，Centrifuge 5417R型；PCR仪由Applied Biosystems公司生产，Veriti 96 Well thermal cycler型；电泳仪由南京科宝仪器研究所生产，EPS604型；凝胶成像仪由上海天能科技有限公司生产，Tanon GIS-2500型。
1．2 方法
1．2．1 DNA提取
疫苗DNA提取方法：取疫苗200μL加入2×裂解液200μL，37℃温浴30min。加入蛋白酶K（20 mg/mL）3μL，上下颠倒混匀，置于55℃水浴中1h，中间不时上下颠倒混匀。冷却至室温，加入等体积的Tris饱和酚，振荡混匀，12000r/min离心15min分离两相，将上层水相转移至新的离心管中，用Tris饱和酚再次抽提1次，收集水相。加入0.2倍体积10mol/L醋酸铵和2倍体积的乙醇，上下颠倒混匀，12000r/min离心10min，弃上清。DNA沉淀用70％的乙醇洗涤1次，12000r/min离心15min，弃上清，加入30μL TE 溶解DNA，用Nanodrop测定DNA浓度，分装后-2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
0℃保存备用。
病料DNA提取方法：取采集的病料400μL加入10×裂解液40μL，37℃温浴30min。加入蛋白酶K（20 mg/mL）3μL，上下颠倒混匀，置于55℃水浴中1h，中间不时上下颠倒混匀。冷却至室温，加入等体积的Tris饱和酚，振荡混匀，12000r/min离心15min分离两相，将上层水相转移至新的离心管中，用Tris饱和酚再次抽提1次，收集水相。加入0.2倍体积10mol/L醋酸铵和2倍体积的乙醇，上下颠倒混匀，12000r/min离心10min，弃上清。DNA沉淀用70％的乙醇洗涤1次，12000r/min离心15min，弃上清，加入30μL TE 溶解DNA，用Nanodrop测定DNA浓度，分装后-20℃保存备用。
1．2．2 引物设计
参考文献设计引物[3]，设计引物如下：
上游引物P1：5’-CGCTTGAGGACAGCATAA-3’
下游引物P2：5’-TGGGAAACAGACCAGAGA-3’
该引物对能扩增出FHV-1病毒500 bp的基因片段，引物由英潍捷基（上海）贸易有限公司合成。
1．2．3 PCR检测方法建立
PCR反应体系：2×Taq PCR MasterMix 12.5μL
P1 0.5μL
P2 0.5μL
DNA 5.0μL
H2O 6.5μL
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/dwyx/1036.html
