猪气喘病抗性候选基因ifngr1的鉴定分析
γ干扰素与其受体结合，通过JAK-STAT、Ras-MAPK等信号途径，在抗病毒、抗原呈递、免疫调节等方面扮演着重要角色。IFN-γ受体的α链由IFNGR1基因编码。本试验以苏淮猪为研究对象，从猪气喘病样本RNA测序结果中筛选出IFNGR1基因为候选基因，针对其并全部外显子区域设计引物并进行PCR扩增，利用PCR产物直接测序技术和DNAMAN 8、BioEdit等生物学软件，筛选鉴定出IFNGR1基因一个SNP位点（g.12557，A>G），为下一步研究猪气喘病抗性分子标记辅助育种提供了参考依据。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1．1 实验材料 2
1．1．1 实验动物 2
1．1．2 实验药品和试剂 2
1．1．3 实验仪器 2
1．2 常规溶液及试剂配制 3
1．3 试验方法及步骤 3
1．3．1 引物的合成 3
1．3．2 基因组提取 3
1．3．3 PCR扩增 4
1．3．4 琼脂糖凝胶电泳 4
1．3．5 PCR产物直接测序 5
2 结果与分析 5
2．1 猪支气管黏膜基因组提取结果 5
2．2 PCR扩增结果 5
2．1．1 不同引物的梯度PCR检测 5
2．1．1 不同引物的PCR扩增结果 6
2．3 猪IFNGR1基因多态性检测 8
2．4 实验结论 9
3 讨论 9
致谢 10
参考文献： 10
猪气喘病抗性候选基因IFNGR1的鉴定分析
引言
干扰素（Interferon，IFN）于1957年被发现，目前发现有三类型干扰素，包括I型（α, β, τ，ω)、II型(γ)和III型(λ)，其中，IFNγ在广谱抗病毒，抗原呈递，免疫调节等方面发挥着重要作用。γ干扰素发挥其相应的生物学功能必须首先与其受体相结合，结合后胞外信号转换成为细胞内信号，但由于IF *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
Nγ受体本身没有激酶活性，需要通过JAKSTAT、RasMAPK 等途径进行信号转导，从而启动细胞内基因的转录，诱导细胞大量表达干扰素调节蛋白，产生相应的生物学活性[1][2][3][4]。受体是细胞表面或亚细胞组分、结构各异的一类生物大分子，可以被特异性识别，并与有生物活性的化学信号物质（配体）结合，激活或启动细胞的一系列生物化学反应，最后导致配体特定的生物学效应[5]。IFNγ受体几乎存在于所有除红细胞之外的有核细胞表面，具有严格的种属特异性，作用范围和生物学效应由IFNγ受体的表达和分布决定。RTPCR组织表达谱分析表明，该基因在大部分组织中均表达，其中，脾脏中的表达量最高，淋巴结、扁桃体和肝脏次之[6][7][8]。
IFNγ受体由两条链构成：α链和β链。其中编码α链的分子为IFNGR1（Interferon Gamma Receptor 1, IFNGR1）基因，它也叫 CD119 或 IFNγRα基因，与 IFNγ 二聚体具有高亲和结合能力。 猪IFNGR1基因位于第1号染色体3038840530408868bp区间，（http://asia.ensembl.org/Sus_scrofa/Transcript/Summary?db=core;g=ENSSSCG00000004156;r=1:3038840530408868;t=ENSSSCT00000034018）。基因组序列全长20.46kb，由8个外显子和7个内含子组成，编码470个氨基酸。
猪支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia of swine, MPS），俗称猪气喘病、地方流行性肺炎，该病会引起猪的生长受阻，饲料转化率下降，且流行性广，净化难，增加了养猪的成本，造成经济效益下降[9]。随着集约化生产模式的发展，猪体质和抗病力呈下降趋势[10]。目前，猪气喘病的防治方法主要有加强饲养管理、定期检疫和疫苗药物。但是，养殖过程的大量用药不仅增加了养殖成本，药物残留问题也日趋严重，同时，病原微生物耐药性逐渐增强。所以，提高猪自身免疫力和抗病能力成为当前有效解决的问题的途径。
相关研究表明，IFNγ能有效抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪口蹄疫病毒（FMDV）和非洲猪瘟病毒（ASFV）的繁殖，同时对免疫抑制猪具有良好免疫调节作用[11][12]。但是，截至目前对IFNγ受体的研究相对较少，特别是缺乏对畜禽IFNGR1基因的研究。结合前期猪气喘病RNA测序结果，我们筛选出IFNGR1基因作为抗性候选基因，寻找、鉴定其功能性突变位点，为猪气喘病抗性育种研究提供科学参考依据。
1 材料与方法
1．1 实验材料
1．1．1 实验动物
长白猪样品来自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所昌平实验猪场；苏淮猪样品来自江苏省淮安市淮阴种猪场，包括长白猪50头，苏淮猪48头，共计98头。采集耳组织，此外采集苏淮猪支气管黏膜组织。采集完成后，样品置于冰盒中保存，然后移至?20℃冰箱保存。
1．1．2 实验药品和试剂
血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒：北京天根生物科技公司（TIANGEN）
dNTP Mixture (2.5 mM each)：宝生物工程(大连)有限公司
10×PCR Buffer：宝生物工程(大连)有限公司
Taq (5 units/μL)：宝生物工程(大连)有限公司
DNA Marker（DL2000，DL1000）：宝生物工程(大连)有限公司
6× Loading Buffer：宝生物工程(大连)有限公司
琼脂糖：Gene有限公司
TAE(50×)溶液：北京百泰克生物技术有限公司
Goldview：pbhgv1
其它常规试剂均购自大学物资供应科。
1．1．3 实验仪器
漩涡混合器：Kylinbell Company
梯度PCR仪：BIORAD Company
Tanon1600凝胶成像系统：上海天伦科技有限公司
可调式微量移液器：德国Eppendorf公司
稳压稳流电泳仪：北京君意东方电泳设备有限公司
电热鼓风干燥箱：上海博讯实业有限公司医疗设备厂
数显电子恒温水浴锅：常州国华电器有限公司
电子天平：上海浦春计重仪器有限公司
微波炉：Galanz公司
医用离心机：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司
分光光度计：(Nano) Thermo Company
1．2 常规溶液及试剂配制
TAE(1×)：800ml蒸馏水中加入20ml TAE(50×)。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1．1 实验材料 2
1．1．1 实验动物 2
1．1．2 实验药品和试剂 2
1．1．3 实验仪器 2
1．2 常规溶液及试剂配制 3
1．3 试验方法及步骤 3
1．3．1 引物的合成 3
1．3．2 基因组提取 3
1．3．3 PCR扩增 4
1．3．4 琼脂糖凝胶电泳 4
1．3．5 PCR产物直接测序 5
2 结果与分析 5
2．1 猪支气管黏膜基因组提取结果 5
2．2 PCR扩增结果 5
2．1．1 不同引物的梯度PCR检测 5
2．1．1 不同引物的PCR扩增结果 6
2．3 猪IFNGR1基因多态性检测 8
2．4 实验结论 9
3 讨论 9
致谢 10
参考文献： 10
猪气喘病抗性候选基因IFNGR1的鉴定分析
引言
干扰素（Interferon，IFN）于1957年被发现，目前发现有三类型干扰素，包括I型（α, β, τ，ω)、II型(γ)和III型(λ)，其中，IFNγ在广谱抗病毒，抗原呈递，免疫调节等方面发挥着重要作用。γ干扰素发挥其相应的生物学功能必须首先与其受体相结合，结合后胞外信号转换成为细胞内信号，但由于IF *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
Nγ受体本身没有激酶活性，需要通过JAKSTAT、RasMAPK 等途径进行信号转导，从而启动细胞内基因的转录，诱导细胞大量表达干扰素调节蛋白，产生相应的生物学活性[1][2][3][4]。受体是细胞表面或亚细胞组分、结构各异的一类生物大分子，可以被特异性识别，并与有生物活性的化学信号物质（配体）结合，激活或启动细胞的一系列生物化学反应，最后导致配体特定的生物学效应[5]。IFNγ受体几乎存在于所有除红细胞之外的有核细胞表面，具有严格的种属特异性，作用范围和生物学效应由IFNγ受体的表达和分布决定。RTPCR组织表达谱分析表明，该基因在大部分组织中均表达，其中，脾脏中的表达量最高，淋巴结、扁桃体和肝脏次之[6][7][8]。
IFNγ受体由两条链构成：α链和β链。其中编码α链的分子为IFNGR1（Interferon Gamma Receptor 1, IFNGR1）基因，它也叫 CD119 或 IFNγRα基因，与 IFNγ 二聚体具有高亲和结合能力。 猪IFNGR1基因位于第1号染色体3038840530408868bp区间，（http://asia.ensembl.org/Sus_scrofa/Transcript/Summary?db=core;g=ENSSSCG00000004156;r=1:3038840530408868;t=ENSSSCT00000034018）。基因组序列全长20.46kb，由8个外显子和7个内含子组成，编码470个氨基酸。
猪支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia of swine, MPS），俗称猪气喘病、地方流行性肺炎，该病会引起猪的生长受阻，饲料转化率下降，且流行性广，净化难，增加了养猪的成本，造成经济效益下降[9]。随着集约化生产模式的发展，猪体质和抗病力呈下降趋势[10]。目前，猪气喘病的防治方法主要有加强饲养管理、定期检疫和疫苗药物。但是，养殖过程的大量用药不仅增加了养殖成本，药物残留问题也日趋严重，同时，病原微生物耐药性逐渐增强。所以，提高猪自身免疫力和抗病能力成为当前有效解决的问题的途径。
相关研究表明，IFNγ能有效抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪口蹄疫病毒（FMDV）和非洲猪瘟病毒（ASFV）的繁殖，同时对免疫抑制猪具有良好免疫调节作用[11][12]。但是，截至目前对IFNγ受体的研究相对较少，特别是缺乏对畜禽IFNGR1基因的研究。结合前期猪气喘病RNA测序结果，我们筛选出IFNGR1基因作为抗性候选基因，寻找、鉴定其功能性突变位点，为猪气喘病抗性育种研究提供科学参考依据。
1 材料与方法
1．1 实验材料
1．1．1 实验动物
长白猪样品来自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所昌平实验猪场；苏淮猪样品来自江苏省淮安市淮阴种猪场，包括长白猪50头，苏淮猪48头，共计98头。采集耳组织，此外采集苏淮猪支气管黏膜组织。采集完成后，样品置于冰盒中保存，然后移至?20℃冰箱保存。
1．1．2 实验药品和试剂
血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒：北京天根生物科技公司（TIANGEN）
dNTP Mixture (2.5 mM each)：宝生物工程(大连)有限公司
10×PCR Buffer：宝生物工程(大连)有限公司
Taq (5 units/μL)：宝生物工程(大连)有限公司
DNA Marker（DL2000，DL1000）：宝生物工程(大连)有限公司
6× Loading Buffer：宝生物工程(大连)有限公司
琼脂糖：Gene有限公司
TAE(50×)溶液：北京百泰克生物技术有限公司
Goldview：pbhgv1
其它常规试剂均购自大学物资供应科。
1．1．3 实验仪器
漩涡混合器：Kylinbell Company
梯度PCR仪：BIORAD Company
Tanon1600凝胶成像系统：上海天伦科技有限公司
可调式微量移液器：德国Eppendorf公司
稳压稳流电泳仪：北京君意东方电泳设备有限公司
电热鼓风干燥箱：上海博讯实业有限公司医疗设备厂
数显电子恒温水浴锅：常州国华电器有限公司
电子天平：上海浦春计重仪器有限公司
微波炉：Galanz公司
医用离心机：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司
分光光度计：(Nano) Thermo Company
1．2 常规溶液及试剂配制
TAE(1×)：800ml蒸馏水中加入20ml TAE(50×)。
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