进口种牛副结核分枝杆菌和鹿流行性出血热病毒的血清学检测
牛副结核病（BP）是由副结核分枝杆菌引起的一种人畜共患传染病，其临床症状与病理变化是顽固性腹泻、渐进性消瘦、慢性肉芽肿回肠炎，肠粘膜增厚并形成皱褶。传染源是病畜和带菌畜，反刍动物易感，尤其是奶牛，主要是通过采食被副结核分枝杆菌污染的水和饲料。通过牛奶或奶制品副结核分枝杆菌也可以感染人类。鹿流行性出血热病（EHD）是一种广泛存在于全世界野生和家养有蹄类动物中的虫媒病毒病，由鹿流行性出血热病毒引起，主要由库蠓属吸血昆虫负责传播。易感动物的感染特征是体温升高、呼吸困难、黏膜和浆膜面出血、常处于昏迷状态下死亡。牛和羊也可以感染发病，导致怀孕牛流产、死产。根据进口动物的疫病防控要求，本文对一批在江苏盐城大丰隔离场的澳大利亚进口种牛（2543头）用酶联免疫吸附试验方法进行了牛副结核病和鹿流行性出血热病的检测。结果表明牛副结核病的患病率为0.157%，未发现鹿流行性出血热病。该检测结果为江苏盐城大丰隔离场了解该批澳大利亚进口种牛这两种疫病的流行情况提供了重要的参考数据。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）2
1 材料与方法2
1.1 实验材料 2
1.2实验方法 2
1.3结果判定4
2结果与分析4
2.1实验结果4
2.2实验分析 5
3 讨论 5
（略）
致谢5
参考文献6
表1 副结核分枝杆菌血清学检测结果4
表2鹿流行性出血热病毒血清学检测结果5
江苏省进口种牛副结核分枝杆菌和鹿流行性出血热病毒的血清学检测
引言
牛副结核病（bovine paratuberculosis，BP）是一种人畜共患传染病，其特征是由副结核分枝杆菌引起的慢性增殖性持续性肠炎和进行性消耗[1]。牛副结核病又称副结核性肠炎或Johne病，主要临床症状和病理变化是顽固性腹泻、渐进性消瘦、慢性肉芽肿回肠炎，肠粘膜增厚并形成皱褶。牛副结核病由于潜伏期长，特征性症状不明显，一旦疾病传播得很快，会给地方畜牧业带来较大的经济损失。人类的副结核病又称为克罗恩 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
病，是一种人类过敏性肠综合症，特征为肠道组织发生广泛性炎症反应与肉芽肿，因食用被副结核分枝菌污染的乳或乳制品而引起的溃疡性结肠炎。副结核病严重危害了人民群众的身体健康和生命安全，影响社会与经济的发展[2]。我国辽宁、黑龙江、内蒙古、贵州、陕西、河北等地区也有发生过本病的报道,几乎遍及了东北、西北、华北大部分地区。近年来由于奶牛和肉牛养殖业发展非常迅速，生产规模越来越大，集约化程度越来越高，牛流动范围也越来越广，副结核发病也呈上升趋势[3]。由于目前对牛副结核病尚无有效的治疗方法，只能对牛群进行疫苗免疫，定期进行监测，及时隔离淘汰处于排菌期的副结核感染牛，以及做好畜牧场环境的消毒工作。
鹿流行性出血热病（epizootic hemorrhagic disease of deer，EHD）是一种非接触性传染病，主要由昆虫库蠓属传播，导致野生和家养的反刍动物被感染。鹿流行性出血热病毒（EHDV）属呼肠孤病毒科环状病毒属，与同属的其他成员，如蓝舌病、非洲马瘟等具有相似的病毒形态和结构。世界动物卫生组织（OIE）将EHD列为法定报告传染病。近年来EHD疫情报道的国家与欧洲接壤，EHDV的感染与传播严重影响国家畜牧业及国际贸易的发展[4]。我国内地牛羊血清中也检测到EHDV阳性抗体, 但暂无EHDV暴发记录[5]。对于鹿流行性出血热病，目前主要通过免疫预防接种，对媒介即库蠓属吸血昆虫进行控制，建立疫病的监测来防控该病。
本实验运用北京爱德士元亨生物科技有限公司的副结核分枝杆菌抗体检测试剂盒（美国IDEXX公司生产）和法国IDVET公司的EHDV抗体检测试剂盒对一批从澳大利亚进口的种牛（2543头）进行这两种疾病的检测，防止牛副结核病和鹿流行性出血热病通过该批种牛流入我国的养殖场，进而在我国造成大规模流行。
1 材料与方法
1．1 实验材料
血液样品：采自2017年12月在江苏盐城大丰隔离场隔离的一批从澳大利亚进口的种牛（2543头）。
主要的试剂、仪器：副结核分枝杆菌抗体检测试剂盒（美国IDEXX公司生产，北京爱德士元亨生物科技有限公司经销）、MAP抗原包被板、阳性对照、阴性对照、酶标抗体浓缩液、稀释缓冲液N.12、用于预孵育步骤的未包被微量板、离心机、微量反应板震荡器、洗板机、盖板、具有450 nm滤光片的96孔酶标仪；EHDV抗体检测试剂盒（法国IDVET公司）、VP7包被微孔板、浓缩洗涤液、TMB底物液、终止液、单道微量移液器和多道微量移液器（20 μL，50 μL，100 μL，300 μL）、一次性移液器吸头、蒸馏水或去离子水、手动或自动清洗系统。
1．2 实验方法
2017年12月在江苏盐城大丰隔离场对一批澳大利亚进口种牛（2543头）进行血液采样，每头牛采取2份血液样本，送入冷藏室低温保存。
送检的血液样本用移液器取1 mL上清加入到1.5 mL离心管中，置于离心机中，设置转速为8000 rpm，离心3 min后取出，然后吸取上层血清可以做ELISA试验用，下层余留约200 μL用于核酸提取。所有试剂在使用前需使其恢复至常温，并使其轻晃混匀，每个样品都用单独的吸头。
1．2．1 副结核分枝杆菌的检测
实验原理：将微量反应板孔涂覆有副结核分枝杆菌(MAP)抗原。为了结合非特异性的抗体，样品首先与草分枝杆菌提取物预孵育。将预孵育的样品加入抗原包被的反应板进行孵育。检测样品在包被孔内孵育后，MAP特异性抗体会形成抗原抗体免疫复合物。将未结合的材料洗去，加入抗反刍动物酶标抗体，它会与抗原抗体免疫复合物结合。洗掉未结合的酶标抗体，加入底物液（TMB）。在酶的作用下，TMB底物被氧化成蓝色化合物。加入终止液后，又变为黄色。随后的颜色深浅与检测样品中存在的MAP抗体的量成正比。诊断结果通过样品的光密度值与阳性对照光密度的平均值相比较而得出。
实验步骤：将2543份血清样本分成5组分别进行血清学检测。前4组每组500份血清样本，第5组543份血清样本，初步进行筛选，具体操作步骤如下：
（1）拿出包被的微量反应板，在记录表上记下每一个待检样品的位置。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）2
1 材料与方法2
1.1 实验材料 2
1.2实验方法 2
1.3结果判定4
2结果与分析4
2.1实验结果4
2.2实验分析 5
3 讨论 5
（略）
致谢5
参考文献6
表1 副结核分枝杆菌血清学检测结果4
表2鹿流行性出血热病毒血清学检测结果5
江苏省进口种牛副结核分枝杆菌和鹿流行性出血热病毒的血清学检测
引言
牛副结核病（bovine paratuberculosis，BP）是一种人畜共患传染病，其特征是由副结核分枝杆菌引起的慢性增殖性持续性肠炎和进行性消耗[1]。牛副结核病又称副结核性肠炎或Johne病，主要临床症状和病理变化是顽固性腹泻、渐进性消瘦、慢性肉芽肿回肠炎，肠粘膜增厚并形成皱褶。牛副结核病由于潜伏期长，特征性症状不明显，一旦疾病传播得很快，会给地方畜牧业带来较大的经济损失。人类的副结核病又称为克罗恩 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
病，是一种人类过敏性肠综合症，特征为肠道组织发生广泛性炎症反应与肉芽肿，因食用被副结核分枝菌污染的乳或乳制品而引起的溃疡性结肠炎。副结核病严重危害了人民群众的身体健康和生命安全，影响社会与经济的发展[2]。我国辽宁、黑龙江、内蒙古、贵州、陕西、河北等地区也有发生过本病的报道,几乎遍及了东北、西北、华北大部分地区。近年来由于奶牛和肉牛养殖业发展非常迅速，生产规模越来越大，集约化程度越来越高，牛流动范围也越来越广，副结核发病也呈上升趋势[3]。由于目前对牛副结核病尚无有效的治疗方法，只能对牛群进行疫苗免疫，定期进行监测，及时隔离淘汰处于排菌期的副结核感染牛，以及做好畜牧场环境的消毒工作。
鹿流行性出血热病（epizootic hemorrhagic disease of deer，EHD）是一种非接触性传染病，主要由昆虫库蠓属传播，导致野生和家养的反刍动物被感染。鹿流行性出血热病毒（EHDV）属呼肠孤病毒科环状病毒属，与同属的其他成员，如蓝舌病、非洲马瘟等具有相似的病毒形态和结构。世界动物卫生组织（OIE）将EHD列为法定报告传染病。近年来EHD疫情报道的国家与欧洲接壤，EHDV的感染与传播严重影响国家畜牧业及国际贸易的发展[4]。我国内地牛羊血清中也检测到EHDV阳性抗体, 但暂无EHDV暴发记录[5]。对于鹿流行性出血热病，目前主要通过免疫预防接种，对媒介即库蠓属吸血昆虫进行控制，建立疫病的监测来防控该病。
本实验运用北京爱德士元亨生物科技有限公司的副结核分枝杆菌抗体检测试剂盒（美国IDEXX公司生产）和法国IDVET公司的EHDV抗体检测试剂盒对一批从澳大利亚进口的种牛（2543头）进行这两种疾病的检测，防止牛副结核病和鹿流行性出血热病通过该批种牛流入我国的养殖场，进而在我国造成大规模流行。
1 材料与方法
1．1 实验材料
血液样品：采自2017年12月在江苏盐城大丰隔离场隔离的一批从澳大利亚进口的种牛（2543头）。
主要的试剂、仪器：副结核分枝杆菌抗体检测试剂盒（美国IDEXX公司生产，北京爱德士元亨生物科技有限公司经销）、MAP抗原包被板、阳性对照、阴性对照、酶标抗体浓缩液、稀释缓冲液N.12、用于预孵育步骤的未包被微量板、离心机、微量反应板震荡器、洗板机、盖板、具有450 nm滤光片的96孔酶标仪；EHDV抗体检测试剂盒（法国IDVET公司）、VP7包被微孔板、浓缩洗涤液、TMB底物液、终止液、单道微量移液器和多道微量移液器（20 μL，50 μL，100 μL，300 μL）、一次性移液器吸头、蒸馏水或去离子水、手动或自动清洗系统。
1．2 实验方法
2017年12月在江苏盐城大丰隔离场对一批澳大利亚进口种牛（2543头）进行血液采样，每头牛采取2份血液样本，送入冷藏室低温保存。
送检的血液样本用移液器取1 mL上清加入到1.5 mL离心管中，置于离心机中，设置转速为8000 rpm，离心3 min后取出，然后吸取上层血清可以做ELISA试验用，下层余留约200 μL用于核酸提取。所有试剂在使用前需使其恢复至常温，并使其轻晃混匀，每个样品都用单独的吸头。
1．2．1 副结核分枝杆菌的检测
实验原理：将微量反应板孔涂覆有副结核分枝杆菌(MAP)抗原。为了结合非特异性的抗体，样品首先与草分枝杆菌提取物预孵育。将预孵育的样品加入抗原包被的反应板进行孵育。检测样品在包被孔内孵育后，MAP特异性抗体会形成抗原抗体免疫复合物。将未结合的材料洗去，加入抗反刍动物酶标抗体，它会与抗原抗体免疫复合物结合。洗掉未结合的酶标抗体，加入底物液（TMB）。在酶的作用下，TMB底物被氧化成蓝色化合物。加入终止液后，又变为黄色。随后的颜色深浅与检测样品中存在的MAP抗体的量成正比。诊断结果通过样品的光密度值与阳性对照光密度的平均值相比较而得出。
实验步骤：将2543份血清样本分成5组分别进行血清学检测。前4组每组500份血清样本，第5组543份血清样本，初步进行筛选，具体操作步骤如下：
（1）拿出包被的微量反应板，在记录表上记下每一个待检样品的位置。
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