pcv2rep基因启动子区类gata位点生物学功能的研究
猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2，PCV2）是猪圆环病毒相关性系统疾病（PCV2-systemic disease, PCV2-SD）的主要病原，给养猪业带来了巨大的经济损失。PCV2 rep基因是病毒复制酶的编码基因，软件分析发现在其启动子区存在类GATA位点。本研究构建了类GATA位点突变的rep基因启动子测试载体，利用感染性克隆技术构建了PCV2类GATA位点突变毒株，通过研究此位点对rep基因启动子活性及病毒复制效率的影响两方面探索此类GATA结合位点是否具有生物学功能。启动子活性研究结果显示类GATA结合位点突变后相对荧光素酶活性显著下降，说明此位点对rep基因启动子具有很大的影响。突变毒株免疫过氧化物酶单层细胞试验结果显示感染性克隆并未成功拯救出病毒，此GATA位点是否影响PCV2复制还有待进一步研究。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言（或绪论）3
1 材料与方法4
1.1 PCV2 rep基因启动子区类GATA位点对启动子活性的影响 4
1.1.1 工具酶和生化试剂4
1.1.2 细胞、质粒、菌株、病毒4
1.1.3 主要仪器 4
1.1.4 病毒基因组提取 4
1.1.5 荧光素酶报告基因启动子测试载体的构建 4
1.1.6 rep基因启动子区类GATA位点序列突变 6
1.1.7 质粒的提取6
1.1.8 重组质粒转染PK15细胞6
1.1.9 相对荧光素酶活性测定试验 6
1.2 PCV2 JN株感染性克隆构建、病毒拯救及类GATA位点基因突变毒株的构建7
1.2.1 工具酶和生化试剂7
1.2. 2 病毒、细胞、质粒、菌株 7
1.2.3 类GATA位点基因突变毒株的构建7
1.2.4 质粒的提取 7
1.2.5 PCV2病毒基因组的胶回收纯化7
1．2.7 PCV2环化基因组的纯 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
化7
1.2.8 DNA抽提7
1.2.9 DNA转染PK15细胞7
1.2.1接毒7
1.2.11 免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）8
2 结果与分析8
2.1 PCV2 rep基因启动子区类GATA位点对启动子活性的影响结果 8
2.2 PCV2 感染性克隆的构建、病毒拯救及类GATA位点基因突变毒株构建的结果9
3 讨论 11
致谢11
参考文献12
PCV2 rep基因启动子区类GATA位点的生物学功能研究
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言（或绪论）3
1 材料与方法4
1.1 PCV2 rep基因启动子区类GATA位点对启动子活性的影响 4
1.1.1 工具酶和生化试剂4
1.1.2 细胞、质粒、菌株、病毒4
1.1.3 主要仪器 4
1.1.4 病毒基因组提取 4
1.1.5 荧光素酶报告基因启动子测试载体的构建 4
1.1.6 rep基因启动子区类GATA位点序列突变 6
1.1.7 质粒的提取6
1.1.8 重组质粒转染PK15细胞6
1.1.9 相对荧光素酶活性测定试验 6
1.2 PCV2 JN株感染性克隆构建、病毒拯救及类GATA位点基因突变毒株的构建7
1.2.1 工具酶和生化试剂7
1.2. 2 病毒、细胞、质粒、菌株 7
1.2.3 类GATA位点基因突变毒株的构建7
1.2.4 质粒的提取 7
1.2.5 PCV2病毒基因组的胶回收纯化7
1．2.7 PCV2环化基因组的纯 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
化7
1.2.8 DNA抽提7
1.2.9 DNA转染PK15细胞7
1.2.1接毒7
1.2.11 免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）8
2 结果与分析8
2.1 PCV2 rep基因启动子区类GATA位点对启动子活性的影响结果 8
2.2 PCV2 感染性克隆的构建、病毒拯救及类GATA位点基因突变毒株构建的结果9
3 讨论 11
致谢11
参考文献12
PCV2 rep基因启动子区类GATA位点的生物学功能研究
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