马链球菌兽疫亚种ficsez蛋白对宿主中性粒细胞的影响(附件)【字数：7121】
1Fic结构域蛋白具有催化腺苷酰化的功能，可以调控宿主细胞中与细胞骨架有关的信号通路。已有报道副溶血弧菌的Fic结构域蛋白感染宿主中性粒细胞（PMN）时会导致细胞变圆和肌动蛋白细胞骨架被破坏，马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi ssp.Zooepidemicus，SEZ）中的Fic蛋白（FicSEZ蛋白）是否对宿主PMN具有类似作用尚未见报道。本实验借助依赖pCold-SUMO表达载体的大肠杆菌表达系统对FicSEZ蛋白进行表达，利用亲和层析和分子筛法纯化获得了目的蛋白FicSEZ；培养及诱导HL60细胞分化获得成熟的类中性粒细胞（dHL60细胞），在体外反应体系中验证FicSEZ蛋白对PMN细胞形态的影响。结果表明用FicSEZ蛋白处理PMN会使其产生伪足、细胞变形等细胞形态上的影响，为认识SEZ感染与天然免疫之间的关系和阐明SEZ的致病机理打下基础。
目 录
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
1.1 菌株和细胞 2
1.2 实验试剂 4
1.3 仪器与设备4
1.4 FicSEZ蛋白的分离纯化4
1.4.1 重组质粒诱导表达4
1.4.2 SDSPAGE凝胶电泳及染色5
1.4.3 目的蛋白FicSEZ纯化5
1.4.4 目的蛋白FicSEZ分离5
1.4.5 目的蛋白FicSEZ分离纯化效果检验5
1.5 培养和诱导HL60细胞分化5
1.5.1 HL60细胞的培养5
1.5.2 HL60细胞的诱导分化6
1.6 FicSEZ蛋白处理中性粒细胞6
2 结果与分析6
2.1 FicSEZ蛋白诱导表达及纯化6
2.2 目的蛋白FicSEZ的分离7
2.3 FicSEZ蛋白处理dHL60细胞8
3 讨论 9
致谢9参考文献10
马链球菌兽疫亚种FicSEZ蛋白对宿主中性粒细胞的影响
动物医学专业学生 欧阳雨晴
指导教师 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
马喆
The effects of Streptococcus aureus FicSEZ protein on the Host neutrophils
Animal medicine major Yu qing Ou yang
Tutor Zhe Ma
Abstract：The Fic structure domain protein has the function of catalyzing adenosinylation，which can regulate the signal pathways associated with the cell skeleton in the host cell。It has been reported that it will cause cell rounds and actin cytoskeleton to be destroyed when the Fic domainprotein of Vibrio parahaemolyticus infects host neutrophils （PMN），Whether the Fic protein （FicSEZ protein）in Streptococcus equi ssp.Zooepidemicus （SEZ）has a similar effect on host PMN has not been reported。In this experiment，the expression of FicSEZ protein was expressed by Escherichia coli expression system dependent on pColdSUMO expression vector，the target protein FicSEZ was obtained by affinity chromatography and molecular sieve method；Mature Neutrophils was obtained by Culturing and inducing HL60 cell differentiation，the effect of FicSEZ protein on PMN cell morphology was verified in vitro reaction system。The results showed that the treatment of PMN with FicSEZ protein could induce the morphological effects of pseudopod and cell deformation，and to lay the foundation for understanding the relationship between SEZ infection and natural immunity and clarifying the pathogenesis of SEZ。
Keywords：Mucococcal disease subspecies；FicSEZ protein；Neutrophils
猪链球菌病（Swine streptococcosis，SS）是一种常见的猪传染病，世界各国均有发生，危害严重，也是一直困扰我国养猪业的细菌性传染病之一[13]。随着集约化养猪业的发展，该病在我国的流行又呈上升趋势，特别是猪群发生蓝耳病、非典型性猪瘟等疫病后易继发该病，带来十分严重的经济损失[4]。马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi subsp.zooepidimicus，SEZ）是引起我国猪链球菌病的重要病原之一，人食用被该菌污染的食物或是与患病动物有过密切接触亦会感染[57]。SEZ主要引起猪败血症、脑膜炎、关节炎、肺炎以及突发性死亡等症状[8]。
Fic结构域蛋白具有催化腺苷酰化的功能，可以调控宿主细胞中多条信号通路，包括一些与细胞骨架有关的信号通路[912]。现有报道的病原菌Fic结构域蛋白腺苷酰化的靶蛋白主要属于小G蛋白Rho亚家族（Rho GTPase），这类蛋白属于重要的信号转导蛋白，其成员中参与调节细胞骨架相关信号通路的RhoA、Rac和Cdc42都已发现可被Fic结构域蛋白腺苷酰化修饰。此外，Rho GTPase还在宿主的防御机制中起着至关重要的作用，与细胞吞噬，吞噬体迁移，免疫因子的转录激活以及细胞凋亡等都有关联。该蛋白很容易成为病原微生物攻击的目标，病原微生物可以直接合成影响Rho GTPase功能的毒素或类似物来抑制Rho GTPase的活性，也可以合成一些酶类，通过改变Rho GTPase的构象或是进一步的翻译后修饰来影响其正常功能的发挥。Fic结构域蛋白的腺苷酰化作用正是属于后者的范畴。这一特点使其可能具有影响PMN细胞骨架结构进而影响PMN的细胞形态的作用。已有研究发现结核分枝杆菌中的Fic结构域蛋白感染宿主PMN时可以诱导PMN坏死、趋化能力降低等，PMN的干扰素表达能力也会出现异常[7，1315]。副溶血弧菌的Fic结构域蛋白感染宿主细胞时会导致细胞变圆和肌动蛋白细胞骨架被破坏[16，17]。
目 录
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
1.1 菌株和细胞 2
1.2 实验试剂 4
1.3 仪器与设备4
1.4 FicSEZ蛋白的分离纯化4
1.4.1 重组质粒诱导表达4
1.4.2 SDSPAGE凝胶电泳及染色5
1.4.3 目的蛋白FicSEZ纯化5
1.4.4 目的蛋白FicSEZ分离5
1.4.5 目的蛋白FicSEZ分离纯化效果检验5
1.5 培养和诱导HL60细胞分化5
1.5.1 HL60细胞的培养5
1.5.2 HL60细胞的诱导分化6
1.6 FicSEZ蛋白处理中性粒细胞6
2 结果与分析6
2.1 FicSEZ蛋白诱导表达及纯化6
2.2 目的蛋白FicSEZ的分离7
2.3 FicSEZ蛋白处理dHL60细胞8
3 讨论 9
致谢9参考文献10
马链球菌兽疫亚种FicSEZ蛋白对宿主中性粒细胞的影响
动物医学专业学生 欧阳雨晴
指导教师 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
马喆
The effects of Streptococcus aureus FicSEZ protein on the Host neutrophils
Animal medicine major Yu qing Ou yang
Tutor Zhe Ma
Abstract：The Fic structure domain protein has the function of catalyzing adenosinylation，which can regulate the signal pathways associated with the cell skeleton in the host cell。It has been reported that it will cause cell rounds and actin cytoskeleton to be destroyed when the Fic domainprotein of Vibrio parahaemolyticus infects host neutrophils （PMN），Whether the Fic protein （FicSEZ protein）in Streptococcus equi ssp.Zooepidemicus （SEZ）has a similar effect on host PMN has not been reported。In this experiment，the expression of FicSEZ protein was expressed by Escherichia coli expression system dependent on pColdSUMO expression vector，the target protein FicSEZ was obtained by affinity chromatography and molecular sieve method；Mature Neutrophils was obtained by Culturing and inducing HL60 cell differentiation，the effect of FicSEZ protein on PMN cell morphology was verified in vitro reaction system。The results showed that the treatment of PMN with FicSEZ protein could induce the morphological effects of pseudopod and cell deformation，and to lay the foundation for understanding the relationship between SEZ infection and natural immunity and clarifying the pathogenesis of SEZ。
Keywords：Mucococcal disease subspecies；FicSEZ protein；Neutrophils
猪链球菌病（Swine streptococcosis，SS）是一种常见的猪传染病，世界各国均有发生，危害严重，也是一直困扰我国养猪业的细菌性传染病之一[13]。随着集约化养猪业的发展，该病在我国的流行又呈上升趋势，特别是猪群发生蓝耳病、非典型性猪瘟等疫病后易继发该病，带来十分严重的经济损失[4]。马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi subsp.zooepidimicus，SEZ）是引起我国猪链球菌病的重要病原之一，人食用被该菌污染的食物或是与患病动物有过密切接触亦会感染[57]。SEZ主要引起猪败血症、脑膜炎、关节炎、肺炎以及突发性死亡等症状[8]。
Fic结构域蛋白具有催化腺苷酰化的功能，可以调控宿主细胞中多条信号通路，包括一些与细胞骨架有关的信号通路[912]。现有报道的病原菌Fic结构域蛋白腺苷酰化的靶蛋白主要属于小G蛋白Rho亚家族（Rho GTPase），这类蛋白属于重要的信号转导蛋白，其成员中参与调节细胞骨架相关信号通路的RhoA、Rac和Cdc42都已发现可被Fic结构域蛋白腺苷酰化修饰。此外，Rho GTPase还在宿主的防御机制中起着至关重要的作用，与细胞吞噬，吞噬体迁移，免疫因子的转录激活以及细胞凋亡等都有关联。该蛋白很容易成为病原微生物攻击的目标，病原微生物可以直接合成影响Rho GTPase功能的毒素或类似物来抑制Rho GTPase的活性，也可以合成一些酶类，通过改变Rho GTPase的构象或是进一步的翻译后修饰来影响其正常功能的发挥。Fic结构域蛋白的腺苷酰化作用正是属于后者的范畴。这一特点使其可能具有影响PMN细胞骨架结构进而影响PMN的细胞形态的作用。已有研究发现结核分枝杆菌中的Fic结构域蛋白感染宿主PMN时可以诱导PMN坏死、趋化能力降低等，PMN的干扰素表达能力也会出现异常[7，1315]。副溶血弧菌的Fic结构域蛋白感染宿主细胞时会导致细胞变圆和肌动蛋白细胞骨架被破坏[16，17]。
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