稀释液保存温度及稀释倍数对湖羊精液保存效果的探究
: 3关键词 3Abstract: 3Key words 3引言 31材料和方法 41.1实验动物 41.2药品和仪器 41.3稀释液准备 41.4采精方法 41.5湖羊精液品质检查 41.5.1色泽和气味 41.5.2射精量 51.5.3精子密度计算 51.5.4精子活力测定 51.6精液处理 51.6.1保存温度的筛选 51.6.2稀释倍数的筛选 51.6.3稀释液配方的筛选 51.7效果判定 51.5.2 产气数据分析与处理 52结果与分析 52.1不用保存温度对湖羊精液活力的影响 62.2不同稀释倍数对湖羊精液活力的影响 62.3 5种稀释液中湖羊精液的保存效果 73讨论 74结论 8致谢 8参考文献 8稀释液、保存温度及稀释倍数对湖羊精液保存效果的探究（大学动物科技学院，江苏 南京 210095）本文围绕保存稀释液、保存温度、稀释倍数三个影响因素来探究湖羊精液低温保存的最佳方案。用已预热的Optidyl液对精液进行8倍、15倍、150倍稀释后置于4℃冰箱保存，对比保存效果来确定其最佳的稀释倍数；用已预热的Optidyl液对精液进行8倍稀释后置于4℃、8℃、12℃下保存，对比保存效果来确定其最佳保存温度。用已预热的5种精液稀释液（A、B、C、D、E）对精液进行8倍稀释后置于4℃冰箱内保存，对比其保存效果来筛选出最佳的稀释液配方。研究表明湖羊精液稀释保存的稀释倍数应该控制在8倍，保存温度应该调节在4℃才能取到一个较好的保存效果。本实验筛选的C组精液稀释液配方，可以使湖羊精子在4℃的条件下保持较长的有效存活。
目录
引言
引言
随着现代畜牧业的发展，为加快家畜良种化进程的要求，人工授精技术已被大力推广应用。精液稀释是羊人工授精的一个重要环节，鲜精经过稀释以后，可以扩大精液量，扩大授精母羊数量，提高良种公羊的利用率，在减少企业养殖公羊开支的同时为企业创造最大的价值。目前，在羊人工授精技术中冷配的效果远远比不上鲜配。如何正确高效地使用鲜精，将可以解决当地无优良品种公羊或种公羊不足问题。鲜精精子具有活力高、密度大、受胎率高等优点，但鲜精稀释后，在常温条件下有效存活期短，仅数小时就会失去其应用价值，而绵羊也比较特殊，冷冻的精液存在着解冻后活力差，受胎率低等不利因素。研究表明精液低温保存能延长期有效存活期，同时保证母羊的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
受胎率[1]。湖羊原产于太湖流域，以生长发育快、成熟早、四季发情、多胎高产著称[2]。本实验拟通过对不同温度下，湖羊精液的保存效果进行比较，筛选出最佳的保存温度；通过改变湖羊精液的稀释倍数，比较保存效果，筛选出最佳的稀释倍数；通过对不同稀释液保存效果进行比较，以筛选最佳的稀释液。
1材料与方法
1.1试验动物
试验用精液采自高港西来原羊场所提供的5只优秀的湖羊种公羊。年龄2岁，身体强健无疾病，采精期间每日除常规日粮外，还增喂鲜鸡蛋。
1.2药品和仪器
药品有Optidyl稀释液原液（法国IMV进口的冷冻稀释液）、新鲜卵黄液、葡萄糖、一水葡萄糖、蔗糖、柠檬酸钠、青霉素、EDTA、生理盐水、双蒸水；主要仪器有凡士林、免吹气假阴道、显微镜。
1.3稀释液准备
用蒸馏水对Optidyl稀释液原液（标准稀释液）进行2.5倍稀释后，置于4℃冰箱中备用。试验选择了5种精液稀释液（A、B、C、D、E），具体配方参照图1[38]。按图1中的实验配方称取所需要的物质，溶于蒸馏水或生理盐水中。取干净新鲜鸡蛋，小心敲掉外壳，去掉蛋清，将蛋黄置于干净的容器中，备用，根据配方需求，用无菌的去针头的注射针刺破卵黄膜抽取需要的卵黄加入上述溶液中，摇匀，置于4℃冰箱备用。
成分/稀释液
A
B
C
D
E
无水葡萄糖g
3
3
3
一水葡萄糖/g
2
蔗糖/g
1.84
EDTA/g
0.59
柠檬酸钠/g
2.7
1.01
O.59
1.4
1.4
新鲜卵黄/ml
10
10
10
20
青霉素钾/万u
10
10
10
生理盐水/ml
到100
双蒸水/ml
到100
到100
到100
到100
图1
1.4采精方法
首先对人工采精的器械进行严格消毒。采精前公羊外阴部及周围用0.1%高猛酸钾溶液冲洗消毒，并用毛巾擦干。采精人员提前戴好无菌手套。其次应该注意假阴道的正确使用，假阴道内的温度应该控制在48℃左右为宜。假阴道注水调节压力，以假阴道内胎口呈Y形，即呈三个饱满瓣状表示压力合适，将凡士林涂抹至其表面及假阴道1/31/2处，以保证其润滑度[9]。
采精一般用发情母羊作为活畜台。将母羊固定于采精架后，将经训练调教的种公羊赶入采精现场，不要急于采精，让公羊爬跨台畜后，将其牵下，反复几次，可提高其射精量。采精员位于台畜右侧，右手持假阴道与台畜平行，假阴道开口应与公羊阴茎伸出方向倾斜度一致。在公羊爬跨台畜向前做“冲跃”动作时，采精员左手四指并拢握住包皮，将阴茎导入假阴道。待射精完毕，将采精杯一端竖立向上，先放去假阴道胎内空气，然后取下采精杯，送往处理室做精液品质检查。
公羊采精频率在配种季节每天可采12次，每周采510次，每周让羊休息12天[9]。
1.5湖羊精液品质检查
1.5.1色泽和气味
正常的精液应该是白色或淡黄色，无味或略带腥味，凡呈红褐色、绿色或含大块凝固物质的精液不能使用,低倍镜下观察刚采集的精液呈翻滚的云雾状[9]。假如采集的精液色泽气味不正常，应放弃使用该精液，给公羊打上标记，另采一头。
1.5.2 射精量
湖羊射精量为0.52.0ml,一般情况下为1.0ml[10]。
1.5.3精子密度计算
将原精液用3%的NaCl溶液稀释至200倍，用血球板计数法计算其密度大小。1ml湖羊精液内的精子数量大约为20亿30亿[10]。假如采集的精液过于稀疏，将影响试验结果，应该给公羊打上标记，另采一头。
1.5.4 精子活力测定
精子活力指直线运动中的精子数占视野中精子数的百分比[11]。检测活力为0.8以上的才可以使用，不合格的精液不予使用，给公羊打上标记，另采一头。
1.6精液处理
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引言
引言
随着现代畜牧业的发展，为加快家畜良种化进程的要求，人工授精技术已被大力推广应用。精液稀释是羊人工授精的一个重要环节，鲜精经过稀释以后，可以扩大精液量，扩大授精母羊数量，提高良种公羊的利用率，在减少企业养殖公羊开支的同时为企业创造最大的价值。目前，在羊人工授精技术中冷配的效果远远比不上鲜配。如何正确高效地使用鲜精，将可以解决当地无优良品种公羊或种公羊不足问题。鲜精精子具有活力高、密度大、受胎率高等优点，但鲜精稀释后，在常温条件下有效存活期短，仅数小时就会失去其应用价值，而绵羊也比较特殊，冷冻的精液存在着解冻后活力差，受胎率低等不利因素。研究表明精液低温保存能延长期有效存活期，同时保证母羊的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
受胎率[1]。湖羊原产于太湖流域，以生长发育快、成熟早、四季发情、多胎高产著称[2]。本实验拟通过对不同温度下，湖羊精液的保存效果进行比较，筛选出最佳的保存温度；通过改变湖羊精液的稀释倍数，比较保存效果，筛选出最佳的稀释倍数；通过对不同稀释液保存效果进行比较，以筛选最佳的稀释液。
1材料与方法
1.1试验动物
试验用精液采自高港西来原羊场所提供的5只优秀的湖羊种公羊。年龄2岁，身体强健无疾病，采精期间每日除常规日粮外，还增喂鲜鸡蛋。
1.2药品和仪器
药品有Optidyl稀释液原液（法国IMV进口的冷冻稀释液）、新鲜卵黄液、葡萄糖、一水葡萄糖、蔗糖、柠檬酸钠、青霉素、EDTA、生理盐水、双蒸水；主要仪器有凡士林、免吹气假阴道、显微镜。
1.3稀释液准备
用蒸馏水对Optidyl稀释液原液（标准稀释液）进行2.5倍稀释后，置于4℃冰箱中备用。试验选择了5种精液稀释液（A、B、C、D、E），具体配方参照图1[38]。按图1中的实验配方称取所需要的物质，溶于蒸馏水或生理盐水中。取干净新鲜鸡蛋，小心敲掉外壳，去掉蛋清，将蛋黄置于干净的容器中，备用，根据配方需求，用无菌的去针头的注射针刺破卵黄膜抽取需要的卵黄加入上述溶液中，摇匀，置于4℃冰箱备用。
成分/稀释液
A
B
C
D
E
无水葡萄糖g
3
3
3
一水葡萄糖/g
2
蔗糖/g
1.84
EDTA/g
0.59
柠檬酸钠/g
2.7
1.01
O.59
1.4
1.4
新鲜卵黄/ml
10
10
10
20
青霉素钾/万u
10
10
10
生理盐水/ml
到100
双蒸水/ml
到100
到100
到100
到100
图1
1.4采精方法
首先对人工采精的器械进行严格消毒。采精前公羊外阴部及周围用0.1%高猛酸钾溶液冲洗消毒，并用毛巾擦干。采精人员提前戴好无菌手套。其次应该注意假阴道的正确使用，假阴道内的温度应该控制在48℃左右为宜。假阴道注水调节压力，以假阴道内胎口呈Y形，即呈三个饱满瓣状表示压力合适，将凡士林涂抹至其表面及假阴道1/31/2处，以保证其润滑度[9]。
采精一般用发情母羊作为活畜台。将母羊固定于采精架后，将经训练调教的种公羊赶入采精现场，不要急于采精，让公羊爬跨台畜后，将其牵下，反复几次，可提高其射精量。采精员位于台畜右侧，右手持假阴道与台畜平行，假阴道开口应与公羊阴茎伸出方向倾斜度一致。在公羊爬跨台畜向前做“冲跃”动作时，采精员左手四指并拢握住包皮，将阴茎导入假阴道。待射精完毕，将采精杯一端竖立向上，先放去假阴道胎内空气，然后取下采精杯，送往处理室做精液品质检查。
公羊采精频率在配种季节每天可采12次，每周采510次，每周让羊休息12天[9]。
1.5湖羊精液品质检查
1.5.1色泽和气味
正常的精液应该是白色或淡黄色，无味或略带腥味，凡呈红褐色、绿色或含大块凝固物质的精液不能使用,低倍镜下观察刚采集的精液呈翻滚的云雾状[9]。假如采集的精液色泽气味不正常，应放弃使用该精液，给公羊打上标记，另采一头。
1.5.2 射精量
湖羊射精量为0.52.0ml,一般情况下为1.0ml[10]。
1.5.3精子密度计算
将原精液用3%的NaCl溶液稀释至200倍，用血球板计数法计算其密度大小。1ml湖羊精液内的精子数量大约为20亿30亿[10]。假如采集的精液过于稀疏，将影响试验结果，应该给公羊打上标记，另采一头。
1.5.4 精子活力测定
精子活力指直线运动中的精子数占视野中精子数的百分比[11]。检测活力为0.8以上的才可以使用，不合格的精液不予使用，给公羊打上标记，另采一头。
1.6精液处理
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