不同粒度载锌凹凸棒石对大肠杆菌k88的抑菌效果研究
摘 要本研究旨在通过体外抑菌试验，测定不同载锌时间制备的不同粒度载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC），比较不同粒度和时间条件下载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的抑菌效果。结果表明载锌时间为2 h时，200目、1000目和2000目载锌凹凸棒石的MIC分别为30 mg/mL、40 mg/mL和20 mg/mL，MBC分别为40 mg/mL、50 mg/mL和30 mg/mL。载锌时间为3 h时，200目、1000目和2000目载锌凹凸棒石的MIC分别为10 mg/mL、5 mg/mL和20 mg/mL，MBC分别为20 mg/mL、10 mg/mL、和30 mg/mL。用杀菌浓度的载锌凹凸棒石溶液培养细菌，杀菌效果明显，2 h杀菌率均达到99.9%以上，结果提示不同粒度以及不同载锌时间对载锌凹凸棒石的抑菌效果有一定影响。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1试验原材料与主要仪器设备 2
1.2试验设计与方法 2
1.2.1菌种活化................2
1.2.2不同粒度固相载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的MIC和MBC研究3
1.2.3细菌悬液制备3
1.2.4不同粒度载锌凹凸棒石不同时间对大肠杆菌K88的杀菌率研究3
2结果与分析3
2.1不同粒度载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的MIC的研究3
2.2不同粒度载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的MBC的研究4
2.3不同粒度载锌凹凸棒石在不同时间对大肠杆菌K88的杀菌率研究5
3讨论.......5
3.1 不同粒度载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的MIC以及MBC研究. 5
3.2不同粒度凹凸棒石在不同时间对大肠杆菌K88杀菌率研究7
4小结7
致谢7
参考文献7
不同粒度载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的抑菌效果研究
引言
现代规模化养猪生产中，多采用仔猪早期断奶 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
技术，断奶时仔猪消化系统发育不完善，断奶应激和肠道微生物失衡导致其肠道功能受损，引起腹泻，死淘率升高，生产性能下降，对养猪业造成巨大损失。引起仔猪腹泻的原因较多，由病原微生物引起的主要是某些大肠杆菌、轮状杆菌和传染性肠胃炎冠状病毒[1]，其中影响最大的是大肠杆菌K88，据统计，腹泻导致仔猪死亡率达11.5%~29.5%，其中由大肠杆菌K88引起的发病率和死亡率达56.2%和24.7%[2]。李海花[3]研究显示，大肠杆菌K88感染仔猪后能够引起机体发烧，血液白细胞数量增多，同时伴有多种促炎性细胞因子的生成及肠系膜淋巴出血、肿大和肠炎。目前养殖业主要依赖疫苗和药物防治此类疾病，疫苗并不能完全保证动物不受病原菌感染，存在一定风险；使用抗生素不仅抑制和杀灭有害菌，也会对有益菌群生抑制、杀灭等作用，有些病原菌会对其产生抗药性，使抗生素效力下降，甚至猪肉中存在药物残留，影响食品安全等。随着社会进步和人民生活水平的提高，高品质、绿色、无残留的动物产品将是消费者的首选。饲料中限制使用或禁止使用抗生素已成为必然趋势[45]。寻找和开发新型的绿色、高效、无残留的抗生素类替代品已成为目前的研究热点之一，对保证猪免受细菌感染和健康生长具有重要意义。
无机抗菌剂作为一种抗生素替代品日渐受到广泛关注，无机抗菌剂主要是利用银、铜、锌等金属本身所具有的抗菌能力，通过物理吸附或离子交换等方法，将银、铜、锌等金属（或其离子）固定于沸石、硅胶等多孔材料的表面或孔道内制得的抗菌剂[6]。与其他抗生素或抗菌剂相比，有安全性高、抗菌活性持久、广谱抗菌性、不产生耐药性、稳定性高，在饲料加工中不易失活等优点[7]，特别是金属离子型无机抗菌剂具有缓释性能好、吸附和杀灭细菌、吸附毒素等多种效果[8]。无机抗菌剂已引起广泛关注，目前在饲料中的应用研究尚处于起步阶段[9]。
凹凸棒石又名坡缕石，是一种具有链层状结构、含水镁铝硅酸盐矿物，即两层硅氧四面片夹一层镁氧八面体。其晶体形状为针状，形似中空管道。这种特殊结构导致凹凸棒石具有很强的吸附性和离子交换性[10]。动物摄入添加凹凸棒石的饲料后，饲料中大分子蛋白质、多肽与凹凸棒石在胃肠液中发生作用，易于被肠道黏膜吸收[11]。凹凸棒石进入动物胃肠道后还可促进小肠绒毛的生长[12]，抑制动物胃肠道内的病毒、细菌，吸附其所产生的毒素等有害物质，改善肠道微生态环境，增强动物抗病能力[13]。锌是动物生长、繁殖、食欲、免疫、激素激活的必需元素，仔猪饲粮中需要额外添加锌。研究表明，在日粮中添加载锌凹凸棒石可以提高生长速度和改善饲料转化率，降低仔猪腹泻率和死亡率[14]。
载锌凹凸棒石的抑菌或杀菌机理是：由载锌凹凸棒石表面或孔道缓释出的Zn2+穿透带负电荷的微生物细胞膜，破坏细胞合成酶的活性，干扰DNA合成，造成微生物丧失分裂增殖能力并死亡[1516]。目前有关载锌凹凸棒石抑菌性能的研究已有报道，但是不同粒度载锌凹凸棒石在抑菌效果方面差异的研究尚未见报道。超微粉碎凹凸棒石比表面积增大，具有更好的分散性，可能吸附能力和载锌能力增加，解吸速度加快，抑菌杀菌效果更强。本试验选用200目、1000目和2000目三种粒度凹凸棒石在不同时间条件下固相载锌制得的载锌凹凸棒石，进行体外抑菌试验，旨在研究不同粒度载锌凹凸棒石抑菌效果的差别，为提高载锌凹凸棒石的抑菌及杀菌效果提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验原材料与主要试验设备
原料：试验所用载锌凹凸棒石采用固相载锌方法制备，分别为200目、载锌2h（1#），1000目、载锌2h（2#），2000目、载锌2h（3#），200目、载锌3h（4#），1000目、载锌3h（5#）和2000目、载锌3h（6#），载锌量分别为24.80 mg/g、12.03 mg/g、12.70mg/g、21.79 mg/g、26.80 mg/g和29.08 mg/g。大肠杆菌K88菌种购于国家兽医微生物菌种保藏中心。
试剂：液体LuriaBertani （LB）培养基按如下步骤进行配制：称取酵母提取物5 g、胰蛋白胨10 g和氯化钠10 g溶解于1000 mL蒸馏水中，将pH调至7.0，在121℃高压灭菌20 min备用。麦康凯培养基（Maconkey Agar Medium，MAC）购于青岛海博生物技术有限公司。生理盐水实验室自配后121℃高压灭菌20 min备用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1试验原材料与主要仪器设备 2
1.2试验设计与方法 2
1.2.1菌种活化................2
1.2.2不同粒度固相载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的MIC和MBC研究3
1.2.3细菌悬液制备3
1.2.4不同粒度载锌凹凸棒石不同时间对大肠杆菌K88的杀菌率研究3
2结果与分析3
2.1不同粒度载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的MIC的研究3
2.2不同粒度载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的MBC的研究4
2.3不同粒度载锌凹凸棒石在不同时间对大肠杆菌K88的杀菌率研究5
3讨论.......5
3.1 不同粒度载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的MIC以及MBC研究. 5
3.2不同粒度凹凸棒石在不同时间对大肠杆菌K88杀菌率研究7
4小结7
致谢7
参考文献7
不同粒度载锌凹凸棒石对大肠杆菌K88的抑菌效果研究
引言
现代规模化养猪生产中，多采用仔猪早期断奶 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
技术，断奶时仔猪消化系统发育不完善，断奶应激和肠道微生物失衡导致其肠道功能受损，引起腹泻，死淘率升高，生产性能下降，对养猪业造成巨大损失。引起仔猪腹泻的原因较多，由病原微生物引起的主要是某些大肠杆菌、轮状杆菌和传染性肠胃炎冠状病毒[1]，其中影响最大的是大肠杆菌K88，据统计，腹泻导致仔猪死亡率达11.5%~29.5%，其中由大肠杆菌K88引起的发病率和死亡率达56.2%和24.7%[2]。李海花[3]研究显示，大肠杆菌K88感染仔猪后能够引起机体发烧，血液白细胞数量增多，同时伴有多种促炎性细胞因子的生成及肠系膜淋巴出血、肿大和肠炎。目前养殖业主要依赖疫苗和药物防治此类疾病，疫苗并不能完全保证动物不受病原菌感染，存在一定风险；使用抗生素不仅抑制和杀灭有害菌，也会对有益菌群生抑制、杀灭等作用，有些病原菌会对其产生抗药性，使抗生素效力下降，甚至猪肉中存在药物残留，影响食品安全等。随着社会进步和人民生活水平的提高，高品质、绿色、无残留的动物产品将是消费者的首选。饲料中限制使用或禁止使用抗生素已成为必然趋势[45]。寻找和开发新型的绿色、高效、无残留的抗生素类替代品已成为目前的研究热点之一，对保证猪免受细菌感染和健康生长具有重要意义。
无机抗菌剂作为一种抗生素替代品日渐受到广泛关注，无机抗菌剂主要是利用银、铜、锌等金属本身所具有的抗菌能力，通过物理吸附或离子交换等方法，将银、铜、锌等金属（或其离子）固定于沸石、硅胶等多孔材料的表面或孔道内制得的抗菌剂[6]。与其他抗生素或抗菌剂相比，有安全性高、抗菌活性持久、广谱抗菌性、不产生耐药性、稳定性高，在饲料加工中不易失活等优点[7]，特别是金属离子型无机抗菌剂具有缓释性能好、吸附和杀灭细菌、吸附毒素等多种效果[8]。无机抗菌剂已引起广泛关注，目前在饲料中的应用研究尚处于起步阶段[9]。
凹凸棒石又名坡缕石，是一种具有链层状结构、含水镁铝硅酸盐矿物，即两层硅氧四面片夹一层镁氧八面体。其晶体形状为针状，形似中空管道。这种特殊结构导致凹凸棒石具有很强的吸附性和离子交换性[10]。动物摄入添加凹凸棒石的饲料后，饲料中大分子蛋白质、多肽与凹凸棒石在胃肠液中发生作用，易于被肠道黏膜吸收[11]。凹凸棒石进入动物胃肠道后还可促进小肠绒毛的生长[12]，抑制动物胃肠道内的病毒、细菌，吸附其所产生的毒素等有害物质，改善肠道微生态环境，增强动物抗病能力[13]。锌是动物生长、繁殖、食欲、免疫、激素激活的必需元素，仔猪饲粮中需要额外添加锌。研究表明，在日粮中添加载锌凹凸棒石可以提高生长速度和改善饲料转化率，降低仔猪腹泻率和死亡率[14]。
载锌凹凸棒石的抑菌或杀菌机理是：由载锌凹凸棒石表面或孔道缓释出的Zn2+穿透带负电荷的微生物细胞膜，破坏细胞合成酶的活性，干扰DNA合成，造成微生物丧失分裂增殖能力并死亡[1516]。目前有关载锌凹凸棒石抑菌性能的研究已有报道，但是不同粒度载锌凹凸棒石在抑菌效果方面差异的研究尚未见报道。超微粉碎凹凸棒石比表面积增大，具有更好的分散性，可能吸附能力和载锌能力增加，解吸速度加快，抑菌杀菌效果更强。本试验选用200目、1000目和2000目三种粒度凹凸棒石在不同时间条件下固相载锌制得的载锌凹凸棒石，进行体外抑菌试验，旨在研究不同粒度载锌凹凸棒石抑菌效果的差别，为提高载锌凹凸棒石的抑菌及杀菌效果提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验原材料与主要试验设备
原料：试验所用载锌凹凸棒石采用固相载锌方法制备，分别为200目、载锌2h（1#），1000目、载锌2h（2#），2000目、载锌2h（3#），200目、载锌3h（4#），1000目、载锌3h（5#）和2000目、载锌3h（6#），载锌量分别为24.80 mg/g、12.03 mg/g、12.70mg/g、21.79 mg/g、26.80 mg/g和29.08 mg/g。大肠杆菌K88菌种购于国家兽医微生物菌种保藏中心。
试剂：液体LuriaBertani （LB）培养基按如下步骤进行配制：称取酵母提取物5 g、胰蛋白胨10 g和氯化钠10 g溶解于1000 mL蒸馏水中，将pH调至7.0，在121℃高压灭菌20 min备用。麦康凯培养基（Maconkey Agar Medium，MAC）购于青岛海博生物技术有限公司。生理盐水实验室自配后121℃高压灭菌20 min备用。
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