禽用生物发酵饲料工艺参数测定和质量评估
发酵饲料是利用微生物对一般饲料原料进行发酵而生产具有绿色、安全以及营养价值高的饲料，而且其在促进动物生长、替代抗生素、减少有机物排放特点。本试验评价禽用生物发酵饲料加工工艺参数和产品营养价值成分，为生产优质生物发酵饲料提供参考依据。
目录
摘要 1
引言
引言国外养殖中发酵饲料的使用相当普遍且以发酵液体饲料为主。目前，法国约有15%的猪场使用发酵液体饲料；丹麦有30%以上的母猪饲用发酵饲料，而在泌乳期则有70%以上的母猪使用；英国家畜委员会下属有25%以上的猪场应用液体发酵饲料饲喂[1]。国内以固态发酵饲料为主，且我国大部分发酵饲料厂采用没消毒的原料进行发酵，目前的发酵饲料产业尚处于起步阶段。由于传统的谷物和蛋白原料成本不断上升，采用替代性原料降低饲料成本已成为全球饲料加工企业和养殖企业的新常态。面对此种状况[2]，低成本、高营养的发酵饲料被越来越多的养殖企业接受和采纳，并逐步增加发酵饲料的使用量，因此发酵饲料的开发和应用是畜牧行业的发展趋势，具有较大的市场发展空间。生物饲料是指以饲料和饲料添加剂为对象，以基因工程、蛋白质工程、发酵工程等现代生物技术为手段，利用微生物工程发酵开发的新型饲料资源和饲料添加剂的总称。目前，最常见的发酵饲料主要包括木薯渣、秸秆加工饲料、饼粕类饲料(如棕榈粕、豆粕、棉粕、菜籽粕、油茶籽饼等)、酒糟、青贮饲料、生物蛋白与肽、米糠统糠等。在畜牧生产业中使用生物饲料可以有效地降低畜禽粪氮、粪磷的排放量，减轻养殖业造成的环境污染，减少抗生素等饲料添加剂的使用，并且有利于节约粮食，减缓人畜争粮的问题，为饲料的开源节流提供一种新的有效途径。发酵饲料能有效地抑制消化道中的大肠杆菌、沙门氏菌及一些致病性细菌与病原体的繁殖与生长，消除饲料原料中的抗营养因子，同时提高畜禽的免疫力及抗病能力，更大程度地提高动物的生产性能。许丽惠等[3]在黄羽肉鸡生长前期用9%发酵豆粕替代部分普通豆粕能够提高肉鸡体增重，改善料重比，并降低盲肠大肠杆菌数量，增加乳酸菌数量，改善肠道微环境。朱立国[4]的试验结果表明，发酵饲料可以提高饲料适口性和肉鸭的屠宰性能、降低饲料成本和肉鸭的料肉比等。Missotten等[5]研究发现，发酵饲料饲喂肉鸡，饲料转化率高、肠道内的菌群组成优异。Heres等[6]指出，发酵饲料饲喂肉鸡抑制沙门氏菌， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
显著增加回肠和盲肠中的乳酸菌和米曲霉的数量，显著降低大肠杆菌的数量。本试验通过对禽用生物发酵饲料加工工艺参数和产品营养价值成分作出评价，为生产优质生物发酵饲料提供参考依据。
1 材料与方法
1．1 试验地点
南京新九洲农牧科技有限公司、大学。
1．2 试验材料
试验用发酵饲料由南京新九洲农牧科技有限公司生产，由玉米、豆粕等产物，添加乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌等等有益微生物发酵而成。
1．3 试剂和主要仪器
无水乳酸锂（分析纯）、对羟基联苯（分析纯）、五水硫酸铜（分析纯）、柠檬酸（分析纯）、对羟基联苯、钨酸钠；FOSS凯氏定氮仪、紫外可见光分光光度计、离心机、恒温水浴锅、电子分析天平、电炉、电压式恒温烘箱、自动温度传感器、PHS25 pH计。
1．4 试验方法
采集发酵时间为0 h、6 h、24 h、30 h、48 h、54 h、72 h的适量发酵样和成品样，密封保存，用于测定保质期；抽出适量样品，一部分用于水分测定，一部分用于测定pH，测完pH后所剩滤液于10 mL试管中密封，冷藏保存，用于测试蛋白质和酸指标，每个试验均设置 3个重复。
1.4.1 发酵饲料加工过程中pH值的测定
在发酵时间0 h、6 h、24 h、30 h、48 h、54 h、72 h时间点及成品时分别称取10 g发酵饲料，分别溶于50 mL蒸馏水中。用PHS25酸度计，测定发酵0 h、6 h、24 h、30 h、48 h、54 h、72 h时间点及成品的pH值，重复测定三组，测定完成后液体保存备用。
1.4.2 发酵饲料加工过程中柠檬酸含量的测定
标准曲线的绘制：配制0、50、100、150、200、250 mg/L的柠檬酸标准溶液，在试管中依次加入4 mL 0.1 mol/L Fe(NO3)3溶液、1 mL 0.1 mol/L HNO3溶液，然后依次加入柠檬酸标准溶液2 mL，摇匀后放入冰水浴中静置10 min，在日光照条件下显色20 min，再移至阴凉处静置30 min，于490 nm处进行比色测定，绘制标准曲线，如图2所示。
图1 柠檬酸标准曲线
样品测定：先进行预处理，移取发酵0 h、6 h、24 h、30 h、48 h、54 h、72 h时间点时1.4.1中的上清液2 mL，用2 mL钨酸处理进行处理,处理好后经10 000 r离心机离心10 min，取离心后试管中的上清液1 mL定容到100 mL。再按柠檬酸标准曲线测定方法，测定发酵样品中柠檬酸含量（%），重复测定三组。
1.4.3 发酵饲料加工过程中乳酸含量的测定
标准曲线的绘制：分别配置乳酸标准液0、5、10、15、20、25、30 μg/mL，在比色管中分别加入乳酸标准液0.5 mL、4.0 %硫酸铜溶液0.05 mL，再加入浓硫酸6 mL，沸水浴反应5 min，取出后迅速置于冰水浴中冷却至20℃以下，再分别于各比色管中加入1mL蒸馏水和1.5 %碱溶性对羟基联苯溶液0.11 mL，混合均匀，在30℃下水浴显色30 min后再沸水浴90 s后，立即放入冰水浴中，在570 nm下进行比色测定，绘制出标准曲线。
图2 乳酸标准曲线
样品测定：先进行预处理，方法同发酵样品中柠檬酸的处理方法，处理好后再按乳酸标准曲线测定方法，测定发酵样品中乳酸含量（%），重复测定三组。
1.4.4 发酵饲料加工过程中总酸含量的测定
测定发酵0 h、6 h、24 h、30 h、48 h、54 h、72 h时间点的发酵饲料中的总酸含量，重复测定三组。取样品液体1 mL，稀释10倍，加入酚酞指示剂3滴，用0.01 mol/L的氢氧化钠标准溶液滴定至淡紫色，30 s内不褪色为终点。
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摘要 1
引言
引言国外养殖中发酵饲料的使用相当普遍且以发酵液体饲料为主。目前，法国约有15%的猪场使用发酵液体饲料；丹麦有30%以上的母猪饲用发酵饲料，而在泌乳期则有70%以上的母猪使用；英国家畜委员会下属有25%以上的猪场应用液体发酵饲料饲喂[1]。国内以固态发酵饲料为主，且我国大部分发酵饲料厂采用没消毒的原料进行发酵，目前的发酵饲料产业尚处于起步阶段。由于传统的谷物和蛋白原料成本不断上升，采用替代性原料降低饲料成本已成为全球饲料加工企业和养殖企业的新常态。面对此种状况[2]，低成本、高营养的发酵饲料被越来越多的养殖企业接受和采纳，并逐步增加发酵饲料的使用量，因此发酵饲料的开发和应用是畜牧行业的发展趋势，具有较大的市场发展空间。生物饲料是指以饲料和饲料添加剂为对象，以基因工程、蛋白质工程、发酵工程等现代生物技术为手段，利用微生物工程发酵开发的新型饲料资源和饲料添加剂的总称。目前，最常见的发酵饲料主要包括木薯渣、秸秆加工饲料、饼粕类饲料(如棕榈粕、豆粕、棉粕、菜籽粕、油茶籽饼等)、酒糟、青贮饲料、生物蛋白与肽、米糠统糠等。在畜牧生产业中使用生物饲料可以有效地降低畜禽粪氮、粪磷的排放量，减轻养殖业造成的环境污染，减少抗生素等饲料添加剂的使用，并且有利于节约粮食，减缓人畜争粮的问题，为饲料的开源节流提供一种新的有效途径。发酵饲料能有效地抑制消化道中的大肠杆菌、沙门氏菌及一些致病性细菌与病原体的繁殖与生长，消除饲料原料中的抗营养因子，同时提高畜禽的免疫力及抗病能力，更大程度地提高动物的生产性能。许丽惠等[3]在黄羽肉鸡生长前期用9%发酵豆粕替代部分普通豆粕能够提高肉鸡体增重，改善料重比，并降低盲肠大肠杆菌数量，增加乳酸菌数量，改善肠道微环境。朱立国[4]的试验结果表明，发酵饲料可以提高饲料适口性和肉鸭的屠宰性能、降低饲料成本和肉鸭的料肉比等。Missotten等[5]研究发现，发酵饲料饲喂肉鸡，饲料转化率高、肠道内的菌群组成优异。Heres等[6]指出，发酵饲料饲喂肉鸡抑制沙门氏菌， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
显著增加回肠和盲肠中的乳酸菌和米曲霉的数量，显著降低大肠杆菌的数量。本试验通过对禽用生物发酵饲料加工工艺参数和产品营养价值成分作出评价，为生产优质生物发酵饲料提供参考依据。
1 材料与方法
1．1 试验地点
南京新九洲农牧科技有限公司、大学。
1．2 试验材料
试验用发酵饲料由南京新九洲农牧科技有限公司生产，由玉米、豆粕等产物，添加乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌等等有益微生物发酵而成。
1．3 试剂和主要仪器
无水乳酸锂（分析纯）、对羟基联苯（分析纯）、五水硫酸铜（分析纯）、柠檬酸（分析纯）、对羟基联苯、钨酸钠；FOSS凯氏定氮仪、紫外可见光分光光度计、离心机、恒温水浴锅、电子分析天平、电炉、电压式恒温烘箱、自动温度传感器、PHS25 pH计。
1．4 试验方法
采集发酵时间为0 h、6 h、24 h、30 h、48 h、54 h、72 h的适量发酵样和成品样，密封保存，用于测定保质期；抽出适量样品，一部分用于水分测定，一部分用于测定pH，测完pH后所剩滤液于10 mL试管中密封，冷藏保存，用于测试蛋白质和酸指标，每个试验均设置 3个重复。
1.4.1 发酵饲料加工过程中pH值的测定
在发酵时间0 h、6 h、24 h、30 h、48 h、54 h、72 h时间点及成品时分别称取10 g发酵饲料，分别溶于50 mL蒸馏水中。用PHS25酸度计，测定发酵0 h、6 h、24 h、30 h、48 h、54 h、72 h时间点及成品的pH值，重复测定三组，测定完成后液体保存备用。
1.4.2 发酵饲料加工过程中柠檬酸含量的测定
标准曲线的绘制：配制0、50、100、150、200、250 mg/L的柠檬酸标准溶液，在试管中依次加入4 mL 0.1 mol/L Fe(NO3)3溶液、1 mL 0.1 mol/L HNO3溶液，然后依次加入柠檬酸标准溶液2 mL，摇匀后放入冰水浴中静置10 min，在日光照条件下显色20 min，再移至阴凉处静置30 min，于490 nm处进行比色测定，绘制标准曲线，如图2所示。
图1 柠檬酸标准曲线
样品测定：先进行预处理，移取发酵0 h、6 h、24 h、30 h、48 h、54 h、72 h时间点时1.4.1中的上清液2 mL，用2 mL钨酸处理进行处理,处理好后经10 000 r离心机离心10 min，取离心后试管中的上清液1 mL定容到100 mL。再按柠檬酸标准曲线测定方法，测定发酵样品中柠檬酸含量（%），重复测定三组。
1.4.3 发酵饲料加工过程中乳酸含量的测定
标准曲线的绘制：分别配置乳酸标准液0、5、10、15、20、25、30 μg/mL，在比色管中分别加入乳酸标准液0.5 mL、4.0 %硫酸铜溶液0.05 mL，再加入浓硫酸6 mL，沸水浴反应5 min，取出后迅速置于冰水浴中冷却至20℃以下，再分别于各比色管中加入1mL蒸馏水和1.5 %碱溶性对羟基联苯溶液0.11 mL，混合均匀，在30℃下水浴显色30 min后再沸水浴90 s后，立即放入冰水浴中，在570 nm下进行比色测定，绘制出标准曲线。
图2 乳酸标准曲线
样品测定：先进行预处理，方法同发酵样品中柠檬酸的处理方法，处理好后再按乳酸标准曲线测定方法，测定发酵样品中乳酸含量（%），重复测定三组。
1.4.4 发酵饲料加工过程中总酸含量的测定
测定发酵0 h、6 h、24 h、30 h、48 h、54 h、72 h时间点的发酵饲料中的总酸含量，重复测定三组。取样品液体1 mL，稀释10倍，加入酚酞指示剂3滴，用0.01 mol/L的氢氧化钠标准溶液滴定至淡紫色，30 s内不褪色为终点。
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