鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留检测方法研究
本研究建立了同时检测鸡蛋中氧氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星6种氟喹诺酮类药物残留的高效液相色谱荧光检测方法(HPLC-FLD)。鸡蛋样品用纯水提取，加入氯化钠，加热冷冻净化，正己烷脱脂，采用0.5%甲酸水-乙腈体系作为流动相，荧光激发波长280 nm，发射波长450 nm。方法的线性范围为0-250μg/kg（OFL为0-1000μg/kg，DAN为0-50μg/kg），相关系数大于0.9958，检出限为0.2-5μg/kg，定量限为1-20μg/kg，平均回收率为80.52%-101.1%；相对标准偏差为2.99%-10.40%。该方法简单、实用、环保，可以满足鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留检测的需要。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1仪器和试剂 2
1.2试液配置3
1.3试验方法3
1.3.1样品的配置3
1.3.2样品前处理3
1.3.3 色谱条件3
1.3.4 检测限和定量限的测定3
1.3.5 添加回收率与变异系数的测定3
1.3.6标准曲线绘制3
1.4色谱条件3
2结果与讨论3
2.1样品前处理条件的优化3
2.1.1提取液的选择4
2.1.2不同盐类及含量盐析效果影响4
2.1.3加热、冷冻温度及时间影响4
2.2 色谱条件的选择和优化 5
2.2.1流动相的选择5
2.2.2复溶液的选择5
2.2.3波长的选择5
2.2.4流速与柱温5
2.3 方法学参数和回收率 6
2.3.1 线性范围、相关参数、检出限及定量限 6
2.3.2 回收率和变异系数6
2.4 实际样品检测 8
3小结9
致谢9
参考文献9
图1 6种氟喹诺酮类药物的化学结构式2
图2 不同盐类盐析效果对 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
比4
图3 不同含量氯化钠盐析效果对比4
图4 加热温度对提取液澄清程度影响5
图5 加热时间对提取液澄清程度影响5
图6 冷冻温度对提取液澄清程度影响5
图7 冷冻时间对提取液澄清程度影响5
图8 6种氟喹诺酮类药物标准溶液液相色谱图6
图9 空白鸡蛋色谱图7
图10 鸡蛋中添加5μg/kg药物的色谱图7
表1 本方法与国家标准方法对比6
表2 标准曲线方程及线性回归常数6
表 3 HPLC法检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物的回收率及变异系数7
表4 欧盟、农业部、国家质监局对于准确度与精密度的要求8
表5 实测样品中氟喹诺酮类药物检测结果8 鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留检测方法研究
引言
我国是世界上的养鸡大国，自1985年来鸡蛋产量一直位居世界第一，占世界鸡蛋总产量的比重约为40%[1]。但由于有兽药残留等问题存在，所以在国际出口上常受到阻碍。因此，研究兽药在鸡蛋中的残留限量及检测方法，对于保障人体健康，确保出口贸易的顺利进行，具有直接的经济效益和社会效益。
喹诺酮类（Quinolones,QNs）药物是一类发展快、品种多的抗菌药物，通过抑制DNA 回旋酶的活性，阻碍DNA的正常复制，从而杀死细菌[2]。其对革兰氏阴性菌、支原体和一些革兰氏阳性菌具有强大的杀灭作用，可用于肺炎链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等引起的组织感染。20世纪80年代以来出现了抗菌作用更强的第三代喹诺酮类药物，其共同特点是喹啉环（个别为萘啶环）的C6位上含氟原子，C7位上连接哌嗪基或吡咯基，故又称氟喹诺酮类（Fluoroquinolones，FQs）。因其组织渗透能力强，毒副作用低，目前已成为兽医临床中最重要的抗感染药物之一，被大量用于治疗、预防和促生长。
氟喹诺酮类药物在动物体内代谢缓慢，使用时超过标准规定剂量会导致畜产品中药物残留，引起人体的不良反应，如损害神经系统（眩晕、头痛）、消化系统（呕吐、腹泻），对心脏、肝脏造成损伤，产生潜在“三致”（致癌、致畸、致突变）作用等[3]。因此，其在动物性食品中的残留问题逐渐引起人们重视。欧盟、美国、日本和我国均已制定喹诺酮类药物在各动物组织中的残留限量(MRL)[47]，对于产蛋鸡禁用CIP、DAN、ENR、SAR，鸡蛋中噁喹酸的MRL为50μg/kg。OFL和PEF在235公告中没有规定，但在《绿色食品 兽药使用准则》[8]属于生产A级绿色食品不应使用的药物。
氟喹诺酮类药物发展较晚，残留水平低，因此残留分析更多使用了高灵敏和较新的分析技术，目前的检测方法[910]有薄层色谱法（TLC）、毛细管电泳测定法（CE）、高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱串联质谱法（LC/MS）、ELISA等。反相高效液相色谱法因其操作简单、使用水溶液有机改性剂体系作流动相，已成为氟喹诺酮类药物残留最主要的分析方法。但由于分离柱常使用硅胶基反相键合相（如C8、C18），其固定相表面存在酸性位点（游离的硅醇基），可通过氢键、离子交换作用吸附氟喹诺酮类中解离的叔胺基和羧基，导致色谱峰拖尾、保留值过长、分离度下降等情况出现[11]。优化流动相的组成比例以及pH是控制保留值最有效的方法之一。
样品前处理的方法涉及的因素很多，操作复杂，方法灵活。由于氟喹诺酮类药物与蛋白质有较强的结合作用[12]，这种作用会影响鸡蛋中氟喹诺酮类药物的提取效率，故前处理方法直接影响残留检测水平。目前样品前处理技术大多采用溶剂提取固相萃取净化技术[1319]，其前处理步骤复杂繁琐，样品处理时间长，且使用大量具有毒害作用的有机溶剂，也对分析者的身体造成伤害，不符合现代分析技术倡导的“绿色环保、对分析者无毒无害”的理念。因此，环境友好样品前处理技术逐渐成为众人关注的热点。其目标是尽量不用或少用有毒害的化学试剂，最低程度污染环境，且最低程度伤害分析者健康[2021]。
本研究优化了前处理及液相色谱方法，建立了一种能够同时检测6种氟喹诺酮类多残留的高效液相色谱法。该法操作简单，成本低，环保，且准确度和精密度均满足国家要求，非常适合大批量样品的处理和检测。
氧氟沙星（OFL） 培氟沙星(PEF) 环丙沙星(CIP)
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1仪器和试剂 2
1.2试液配置3
1.3试验方法3
1.3.1样品的配置3
1.3.2样品前处理3
1.3.3 色谱条件3
1.3.4 检测限和定量限的测定3
1.3.5 添加回收率与变异系数的测定3
1.3.6标准曲线绘制3
1.4色谱条件3
2结果与讨论3
2.1样品前处理条件的优化3
2.1.1提取液的选择4
2.1.2不同盐类及含量盐析效果影响4
2.1.3加热、冷冻温度及时间影响4
2.2 色谱条件的选择和优化 5
2.2.1流动相的选择5
2.2.2复溶液的选择5
2.2.3波长的选择5
2.2.4流速与柱温5
2.3 方法学参数和回收率 6
2.3.1 线性范围、相关参数、检出限及定量限 6
2.3.2 回收率和变异系数6
2.4 实际样品检测 8
3小结9
致谢9
参考文献9
图1 6种氟喹诺酮类药物的化学结构式2
图2 不同盐类盐析效果对 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
比4
图3 不同含量氯化钠盐析效果对比4
图4 加热温度对提取液澄清程度影响5
图5 加热时间对提取液澄清程度影响5
图6 冷冻温度对提取液澄清程度影响5
图7 冷冻时间对提取液澄清程度影响5
图8 6种氟喹诺酮类药物标准溶液液相色谱图6
图9 空白鸡蛋色谱图7
图10 鸡蛋中添加5μg/kg药物的色谱图7
表1 本方法与国家标准方法对比6
表2 标准曲线方程及线性回归常数6
表 3 HPLC法检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物的回收率及变异系数7
表4 欧盟、农业部、国家质监局对于准确度与精密度的要求8
表5 实测样品中氟喹诺酮类药物检测结果8 鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留检测方法研究
引言
我国是世界上的养鸡大国，自1985年来鸡蛋产量一直位居世界第一，占世界鸡蛋总产量的比重约为40%[1]。但由于有兽药残留等问题存在，所以在国际出口上常受到阻碍。因此，研究兽药在鸡蛋中的残留限量及检测方法，对于保障人体健康，确保出口贸易的顺利进行，具有直接的经济效益和社会效益。
喹诺酮类（Quinolones,QNs）药物是一类发展快、品种多的抗菌药物，通过抑制DNA 回旋酶的活性，阻碍DNA的正常复制，从而杀死细菌[2]。其对革兰氏阴性菌、支原体和一些革兰氏阳性菌具有强大的杀灭作用，可用于肺炎链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等引起的组织感染。20世纪80年代以来出现了抗菌作用更强的第三代喹诺酮类药物，其共同特点是喹啉环（个别为萘啶环）的C6位上含氟原子，C7位上连接哌嗪基或吡咯基，故又称氟喹诺酮类（Fluoroquinolones，FQs）。因其组织渗透能力强，毒副作用低，目前已成为兽医临床中最重要的抗感染药物之一，被大量用于治疗、预防和促生长。
氟喹诺酮类药物在动物体内代谢缓慢，使用时超过标准规定剂量会导致畜产品中药物残留，引起人体的不良反应，如损害神经系统（眩晕、头痛）、消化系统（呕吐、腹泻），对心脏、肝脏造成损伤，产生潜在“三致”（致癌、致畸、致突变）作用等[3]。因此，其在动物性食品中的残留问题逐渐引起人们重视。欧盟、美国、日本和我国均已制定喹诺酮类药物在各动物组织中的残留限量(MRL)[47]，对于产蛋鸡禁用CIP、DAN、ENR、SAR，鸡蛋中噁喹酸的MRL为50μg/kg。OFL和PEF在235公告中没有规定，但在《绿色食品 兽药使用准则》[8]属于生产A级绿色食品不应使用的药物。
氟喹诺酮类药物发展较晚，残留水平低，因此残留分析更多使用了高灵敏和较新的分析技术，目前的检测方法[910]有薄层色谱法（TLC）、毛细管电泳测定法（CE）、高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱串联质谱法（LC/MS）、ELISA等。反相高效液相色谱法因其操作简单、使用水溶液有机改性剂体系作流动相，已成为氟喹诺酮类药物残留最主要的分析方法。但由于分离柱常使用硅胶基反相键合相（如C8、C18），其固定相表面存在酸性位点（游离的硅醇基），可通过氢键、离子交换作用吸附氟喹诺酮类中解离的叔胺基和羧基，导致色谱峰拖尾、保留值过长、分离度下降等情况出现[11]。优化流动相的组成比例以及pH是控制保留值最有效的方法之一。
样品前处理的方法涉及的因素很多，操作复杂，方法灵活。由于氟喹诺酮类药物与蛋白质有较强的结合作用[12]，这种作用会影响鸡蛋中氟喹诺酮类药物的提取效率，故前处理方法直接影响残留检测水平。目前样品前处理技术大多采用溶剂提取固相萃取净化技术[1319]，其前处理步骤复杂繁琐，样品处理时间长，且使用大量具有毒害作用的有机溶剂，也对分析者的身体造成伤害，不符合现代分析技术倡导的“绿色环保、对分析者无毒无害”的理念。因此，环境友好样品前处理技术逐渐成为众人关注的热点。其目标是尽量不用或少用有毒害的化学试剂，最低程度污染环境，且最低程度伤害分析者健康[2021]。
本研究优化了前处理及液相色谱方法，建立了一种能够同时检测6种氟喹诺酮类多残留的高效液相色谱法。该法操作简单，成本低，环保，且准确度和精密度均满足国家要求，非常适合大批量样品的处理和检测。
氧氟沙星（OFL） 培氟沙星(PEF) 环丙沙星(CIP)
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