展示ev71中和表位sp70的重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

为了克服近年来由小RNA病毒科肠道病毒属的相关病毒引起的在婴幼儿群体中常见的一种病毒性疾病—手足口病（HFMD）的暴发流行，本研究应用黑猩猩来源的腺病毒作为重组病毒疫苗载体，构建基于AdC68头节区（Fiber）展示手足口病主要病原—肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）中和表位SP70片段的重组腺病毒AdC68-Fiber-3SP70，并以小鼠为动物模型，设置不同免疫途径即肌肉注射和滴鼻免疫，分别以重组病毒AdC68-Fiber-3SP70和AdC68-eGFP在第1天和第15天两次免疫小鼠以进行重组腺病毒免疫原性研究。结果显示， pAdC68-Fiber-3SP70构建成功，并包装出具有感染性的病毒颗粒。ELISA鉴定表明该重组病毒能正确表达目的片段。肌肉注射重组腺病毒AdC68-Fiber-3SP70后产生的特异性抗体IgG显著（P<0.05）高于其余各组。第二次肌肉注射AdC68-Fiber-3SP70组IgG2a、IgG2b水平显著（P<0.05）高于其余各组；各组IgG1水平差异不显著（P>0.05）。肌肉注射AdC68-Fiber-3SP70组小鼠产生的中和抗体滴度最高达1:32。两次免疫后，各组小鼠肺灌洗液中，肌肉注射重组腺病毒AdC68-Fiber-3SP70后产生的特异性抗体IgG显著（P<0.05）高于其余各组；各组 IgA水平差异不显著（P>0.05）。结果表明，3SP70能成功构建在黑猩猩腺病毒的Fiber区并能稳定表达，以其获得的重组腺病毒具有良好的免疫原性，可作为手足口病的候选疫苗。
目录
摘要 1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引言1
1材料与方法3
1.1细胞系、菌株、载体质粒3
1.2主要试剂和材料3
1.3主要实验仪器3
1.4插入目的片段3SP70的合成4
1.5重组腺病毒的获得4
1.6重组腺病毒的免疫原性研究5
1.7数据处理6
2结果6
2.1重组腺病毒载体pAdC68Fiber3SP70的酶切鉴定6
2.2重组腺病毒AdC68Fiber3SP70的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$ 
包装7
2.3纯化后重组腺病毒的滴度8
2.4重组腺病毒中3SP70的表达8
2.5各组小鼠血清中特异性IgG水平的变化8
2.6各组小鼠血清中IgG亚型IgG1、IgG2a、 IgG2b水平的变化9
2.7各组小鼠肺灌洗液特异性IgG、IgA水平的变化9
2.8小鼠血清中和抗体水平检测10
3讨论 10
3.1 展示中和表位SP70重组腺病毒的构建 10
3.2展示中和表位SP70重组腺病毒的免疫原性 11
致谢 11
参考文献 12
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