日本血吸虫重组多表位蛋白bsjrad232bsj23bsjrad231的原核表达及初步应用
：日本血吸虫病是由日本血吸虫（Schistosoma japonicum）入侵机体而引起的一种人畜共患寄生虫病。血清学诊断是目前家畜血吸虫病诊断常用的方法。单分子重组抗原作为诊断抗原往往敏感性较低，多表位重组抗原有可能提高重组抗原的敏感性。日本血吸虫重组多表位蛋白BSjRAD23-2-BSj23-BSjRAD23-1（分子量约为40 kD）是在原有的pET28a(+)-BSjRAD23-2-BSj23重组多表位质粒基础上，插入基因片段BSjRAD23-1（233 bp），将重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，经异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达得到蛋白，利用亲和层析法对目的蛋白进行纯化，应用间接酶联免疫吸附实验（ELISA）对感染日本血吸虫病水牛和山羊血清进行检测。双酶切结果显示BSjRAD23-1成功插入质粒中；聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示重组蛋白在大肠杆菌中成功表达，大小与预期相符，重组蛋白纯化后浓度为1.4925 mg/mL；以该重组蛋白检测山羊和水牛日本血吸虫病的阳性符合率为86.7 % （72/83）和31.2 % （25/80），阴性符合率为100 %（78/78）和100 %（74/74）。 因此，以该重组蛋白作为诊断抗原检测山羊血吸虫病具有较高的阴、阳性符合率，但不适合作为诊断抗原检测水牛血吸虫病。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 2
引言 2
1 材料与方法 2
1.1材料 2
1.2方法 4
1.2.1重组诊断抗原的制备 4
1.2.2 酶联免疫吸附实验评估重组蛋白的诊断价值 7
2 结果与分析 8
2.1目的基因BSjRAD231的扩增及克隆 8
2.2重组表达质粒的构建及鉴定 8
2.3 重组蛋白BSjRAD232BSj23BSjRAD231的原核诱导表达 9
2.4 酶联免疫吸附实验对重组蛋白的诊断价值评估 11
3 讨论 12
致谢 13
参考文献 13
图1 目的基因的核酸电泳分析
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
9
图2 重组质粒的双酶切鉴定 9
图3 重组蛋白诱导表达的时相分析 9
图4 SDSPAGE分析重组蛋白诱导表达情况 10
图5 纯化重组蛋白的SDSPAGE分析 10
图6 BCA蛋白标准曲线 11
图7 重组蛋白诊断山羊日本血吸虫病效果评估 12
图8 重组蛋白诊断水牛日本血吸虫病效果评估 12
表1 50 μL PCR反应体系 4
表2 PCR 反应程序 5
表3 50μL双酶切体系 5
表4 20 μL连接体系 6
表5 BCA法测蛋白浓度OD562吸光值 11
表6 重组蛋白BSjRAD232BSj23BSjRAD231作诊断抗原检测山羊、水牛日本血吸虫病血清的阴、阳性符合率 11
日本血吸虫重组多表位蛋白BSjRAD232BSj23BSjRAD231 的原核表达及初步应用
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 2
引言 2
1 材料与方法 2
1.1材料 2
1.2方法 4
1.2.1重组诊断抗原的制备 4
1.2.2 酶联免疫吸附实验评估重组蛋白的诊断价值 7
2 结果与分析 8
2.1目的基因BSjRAD231的扩增及克隆 8
2.2重组表达质粒的构建及鉴定 8
2.3 重组蛋白BSjRAD232BSj23BSjRAD231的原核诱导表达 9
2.4 酶联免疫吸附实验对重组蛋白的诊断价值评估 11
3 讨论 12
致谢 13
参考文献 13
图1 目的基因的核酸电泳分析
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
9
图2 重组质粒的双酶切鉴定 9
图3 重组蛋白诱导表达的时相分析 9
图4 SDSPAGE分析重组蛋白诱导表达情况 10
图5 纯化重组蛋白的SDSPAGE分析 10
图6 BCA蛋白标准曲线 11
图7 重组蛋白诊断山羊日本血吸虫病效果评估 12
图8 重组蛋白诊断水牛日本血吸虫病效果评估 12
表1 50 μL PCR反应体系 4
表2 PCR 反应程序 5
表3 50μL双酶切体系 5
表4 20 μL连接体系 6
表5 BCA法测蛋白浓度OD562吸光值 11
表6 重组蛋白BSjRAD232BSj23BSjRAD231作诊断抗原检测山羊、水牛日本血吸虫病血清的阴、阳性符合率 11
日本血吸虫重组多表位蛋白BSjRAD232BSj23BSjRAD231 的原核表达及初步应用
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