猪o型口蹄疫免疫增强剂cvc1302安全性试验研究
本试验旨在研究猪O型口蹄疫免疫增强剂CVC1302安全性评价。选取40日龄健康仔猪随机分为7组，每组6头单剂量接种CVC1302佐剂（+）试验组、单剂量接种CVC1302佐剂（-）对照组；单剂量重复接种CVC1302佐剂（+）试验组、单剂量重复接种CVC1302佐剂（-）对照组；超剂量（2倍剂量）接种CVC1302佐剂（+）试验组、超剂量（2倍剂量）接种CVC1302佐剂（-）对照组与空白对照组。所有受试仔猪免疫后，仔细观察其临床变化，包括体温、采食、精神状况、局部刺激等，连续观察7天。同时对仔猪试验期内生长性能进行评价。免疫后28天、56天，每组各剖检3头，取接种部位肌肉组织分别进行眼观与组织学观察。结果显示在给药期间，试验组和对照组仔猪均无明显临床变化，采食、精神状况均良好；个别猪体温变化呈一过性升高，随即恢复正常；给药部位无突起、红斑、溃烂等异常表现。首免后28天、56天大体解剖，接种部位均无肉眼可见异常表现，疫苗吸收情况良好；其它各脏器未见明显异常。结果表明，猪O型口蹄疫免疫增强剂CVC1302安全性良好。本研究可为CVC1302的临床使用提供试验依据。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1.1 试剂 2
1.1.1佐剂 2
1.1.2 CVC1302配置 2
1.1.3猪O型口蹄疫灭活疫苗 3
1.1.4疫苗的配制 3
1.1.5 化学试剂 3
1.1.6 其它化学试剂 3
1.2 试验动物 3
1.3 方法 3
1.3.1组织切片制作 3
1.4数据处理与分析 4
2 结果 4
2.1 CVC1302配伍口蹄疫疫苗对仔猪的局部刺激 4
2.2 CVC1302配伍口蹄疫疫苗对仔猪临床表现的影响 4
2.3 CVC1302配伍口蹄疫疫苗对仔猪生长性能的影响 5
2.4 CVC1302配伍口蹄疫疫苗注射部位吸收情况 6
3.讨论 7
致谢 7
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
/> 参考文献 8
猪O型口蹄疫免疫增强剂CVC1302安全性试验研究
引言
口蹄疫（Foot and moush disease, FMD）是由口蹄疫病毒（FootandMouth Disease Virus, FMDV）引起的一种使偶蹄类动物发生的急性、热性高度接触性的传染病。目前世界上很多国家都有这种疾病的流行，对畜牧业造成极大地经济损失。而且该病的隐性感染可以使患病动物的生产能力下降，造成巨大的经济损失，我国将其列为第一类动物疾病。目前，国际上在口蹄疫的防控上主要采取两种措施：紧急捕杀和免疫预防。在我国主要采取强制免疫预防，而对于急性爆发区采取封锁捕杀政策。疫苗的免疫注射是我国目前预防口蹄疫的主要措施，但现在使用的口蹄疫疫苗主要以灭活疫苗为主，当前口蹄疫疫苗在使用中存在疫苗免疫后抗体产生慢、抗体水平低、抗体持续期短及对变异毒株保护力差的缺点[1,2]。
本课题组在前期研究中从40多种不同免疫增强剂，优选出1种具有显著免疫增强作用的佐剂组方：CVC1302。研究发现，CVC1302不管是伴侣形式添加或共同乳化配伍猪O型口蹄疫疫苗免疫仔猪，均能显著提高猪O型口蹄疫疫苗免疫后的抗体效价（提高4个滴度），单次免疫抗体合格持续期达到4个月。
疫苗佐剂能够提高机体对抗原的免疫应答，在疫苗的研发应用中具有重要作用。由于佐剂有其自身的药理学特征，可能会影响疫苗抗原的免疫原性和安全性, 因此，有必要对佐剂进行全面的安全性评价。免疫增强剂属于疫苗佐剂，同样需要开展临床前安全性评价[3]。CVC1302的免疫增强作用已在多次试验中得到证实，但临床前安全性评价尚未系统研究。因此，本试验重点研究CVC1302的安全性评价，根据农业部第442号公告要求，开展包括单剂量接种、单剂量重复接种、超剂量接种三种安全性试验。本研究结果可为该增强剂的临床应用提供试验依据。
1 材料与方法
1.1 试剂
1.1.1佐剂，注射用白油为ExxonMobil公司产品；吐温80、司本80为广东省肇庆市超能实业有限公司产品。
1.1.2 CVC1302本试验室自行配置。（专利号：2013100429830）
①配制水相溶液：将含有单磷酰脂质A （MPL）、胞壁酰二肽（MDP）和β葡聚糖的母液与吐温80混合，得到成水相溶液；
②配制油相溶液：将白油和司盘80混合，得到油相溶液；
③将所述水相溶液与油相溶液混合乳化后，得免疫增强剂CVC1302。
CVC1302含有2mg/mL的MPL、20mg/mL的MDP和0.4 mg/mL的β葡聚糖，溶剂为蒸馏水
1.1.3猪O型口蹄疫灭活疫苗（O/GX097株+O/XJ/1011株），购于新疆天康畜牧生物技术股份有限公司。
1.1.4疫苗的配制
将CVC1302与灭活的猪O型口蹄疫病毒液按照体积比为1:3混合制备水相溶液。先将ISA206和水相溶液分别放置于室温，大约30分钟。将ISA206放入乳化罐中，在200转/分，将水相溶液放入乳化罐中，搅拌均匀；在2000转/分搅拌10分钟，得到疫苗。其中水相溶液与ISA206的体积比为46:54。疫苗中MPL浓度为0.23mg/mL，MDP浓度为2.3mg/mL，β葡聚糖浓度为0.046mg/mL。
1.1.5 化学试剂，苏木精、伊红为美国Sigma公司产品。
1.1.6 其它化学试剂，酒精、二甲苯、树胶等均购于国药集团。
1.2 试验动物
40日龄仔猪购于镇江市丹徒区云力牧业有限公司。
1.3 方法[46]
将CVC1302白油乳剂以伴侣的形式，在免疫前与商品化的猪O型口蹄疫疫苗混合，进行免疫接种。参照442号公告中对疫苗安全性评价试验的要求，40日龄健康仔猪随机分为7组，每组6头：单剂量接种CVC1302佐剂（+）试验组、单剂量接种CVC1302佐剂（）对照组；单剂量重复接种CVC1302佐剂（+）试验组、单剂量重复接种CVC1302佐剂（）对照组；超剂量（2倍剂量）接种CVC1302佐剂（+）试验组、超剂量（2倍剂量）接种CVC1302佐剂（）对照组与空白对照组。
仔猪免疫：颈部肌肉注射2mL/头，单剂量重复接种间隔2周。
所有受试仔猪每次免疫后，仔细观察其临床变化，包括体温、采食、精神状况、局部刺激等，连续观察7天。免疫当天所有仔猪称重，并于免疫后28d、56d分别称重，计算个体相对日增重。个体相对日增重=（接种后体重接种当日体重）÷天数÷接种当日体重。免疫后28天、56天，每组各剖检3头，进行常规病理学临床检查，重点对免疫系统相关组织器官，包括胸腺、脾、颌下淋巴结、肠系膜淋巴结、腋窝淋巴结、腹股沟淋巴结等进行检查，若发生明显病变器官则进行组织学观察。取接种部位肌肉组织进行组织学观察。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1.1 试剂 2
1.1.1佐剂 2
1.1.2 CVC1302配置 2
1.1.3猪O型口蹄疫灭活疫苗 3
1.1.4疫苗的配制 3
1.1.5 化学试剂 3
1.1.6 其它化学试剂 3
1.2 试验动物 3
1.3 方法 3
1.3.1组织切片制作 3
1.4数据处理与分析 4
2 结果 4
2.1 CVC1302配伍口蹄疫疫苗对仔猪的局部刺激 4
2.2 CVC1302配伍口蹄疫疫苗对仔猪临床表现的影响 4
2.3 CVC1302配伍口蹄疫疫苗对仔猪生长性能的影响 5
2.4 CVC1302配伍口蹄疫疫苗注射部位吸收情况 6
3.讨论 7
致谢 7
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
/> 参考文献 8
猪O型口蹄疫免疫增强剂CVC1302安全性试验研究
引言
口蹄疫（Foot and moush disease, FMD）是由口蹄疫病毒（FootandMouth Disease Virus, FMDV）引起的一种使偶蹄类动物发生的急性、热性高度接触性的传染病。目前世界上很多国家都有这种疾病的流行，对畜牧业造成极大地经济损失。而且该病的隐性感染可以使患病动物的生产能力下降，造成巨大的经济损失，我国将其列为第一类动物疾病。目前，国际上在口蹄疫的防控上主要采取两种措施：紧急捕杀和免疫预防。在我国主要采取强制免疫预防，而对于急性爆发区采取封锁捕杀政策。疫苗的免疫注射是我国目前预防口蹄疫的主要措施，但现在使用的口蹄疫疫苗主要以灭活疫苗为主，当前口蹄疫疫苗在使用中存在疫苗免疫后抗体产生慢、抗体水平低、抗体持续期短及对变异毒株保护力差的缺点[1,2]。
本课题组在前期研究中从40多种不同免疫增强剂，优选出1种具有显著免疫增强作用的佐剂组方：CVC1302。研究发现，CVC1302不管是伴侣形式添加或共同乳化配伍猪O型口蹄疫疫苗免疫仔猪，均能显著提高猪O型口蹄疫疫苗免疫后的抗体效价（提高4个滴度），单次免疫抗体合格持续期达到4个月。
疫苗佐剂能够提高机体对抗原的免疫应答，在疫苗的研发应用中具有重要作用。由于佐剂有其自身的药理学特征，可能会影响疫苗抗原的免疫原性和安全性, 因此，有必要对佐剂进行全面的安全性评价。免疫增强剂属于疫苗佐剂，同样需要开展临床前安全性评价[3]。CVC1302的免疫增强作用已在多次试验中得到证实，但临床前安全性评价尚未系统研究。因此，本试验重点研究CVC1302的安全性评价，根据农业部第442号公告要求，开展包括单剂量接种、单剂量重复接种、超剂量接种三种安全性试验。本研究结果可为该增强剂的临床应用提供试验依据。
1 材料与方法
1.1 试剂
1.1.1佐剂，注射用白油为ExxonMobil公司产品；吐温80、司本80为广东省肇庆市超能实业有限公司产品。
1.1.2 CVC1302本试验室自行配置。（专利号：2013100429830）
①配制水相溶液：将含有单磷酰脂质A （MPL）、胞壁酰二肽（MDP）和β葡聚糖的母液与吐温80混合，得到成水相溶液；
②配制油相溶液：将白油和司盘80混合，得到油相溶液；
③将所述水相溶液与油相溶液混合乳化后，得免疫增强剂CVC1302。
CVC1302含有2mg/mL的MPL、20mg/mL的MDP和0.4 mg/mL的β葡聚糖，溶剂为蒸馏水
1.1.3猪O型口蹄疫灭活疫苗（O/GX097株+O/XJ/1011株），购于新疆天康畜牧生物技术股份有限公司。
1.1.4疫苗的配制
将CVC1302与灭活的猪O型口蹄疫病毒液按照体积比为1:3混合制备水相溶液。先将ISA206和水相溶液分别放置于室温，大约30分钟。将ISA206放入乳化罐中，在200转/分，将水相溶液放入乳化罐中，搅拌均匀；在2000转/分搅拌10分钟，得到疫苗。其中水相溶液与ISA206的体积比为46:54。疫苗中MPL浓度为0.23mg/mL，MDP浓度为2.3mg/mL，β葡聚糖浓度为0.046mg/mL。
1.1.5 化学试剂，苏木精、伊红为美国Sigma公司产品。
1.1.6 其它化学试剂，酒精、二甲苯、树胶等均购于国药集团。
1.2 试验动物
40日龄仔猪购于镇江市丹徒区云力牧业有限公司。
1.3 方法[46]
将CVC1302白油乳剂以伴侣的形式，在免疫前与商品化的猪O型口蹄疫疫苗混合，进行免疫接种。参照442号公告中对疫苗安全性评价试验的要求，40日龄健康仔猪随机分为7组，每组6头：单剂量接种CVC1302佐剂（+）试验组、单剂量接种CVC1302佐剂（）对照组；单剂量重复接种CVC1302佐剂（+）试验组、单剂量重复接种CVC1302佐剂（）对照组；超剂量（2倍剂量）接种CVC1302佐剂（+）试验组、超剂量（2倍剂量）接种CVC1302佐剂（）对照组与空白对照组。
仔猪免疫：颈部肌肉注射2mL/头，单剂量重复接种间隔2周。
所有受试仔猪每次免疫后，仔细观察其临床变化，包括体温、采食、精神状况、局部刺激等，连续观察7天。免疫当天所有仔猪称重，并于免疫后28d、56d分别称重，计算个体相对日增重。个体相对日增重=（接种后体重接种当日体重）÷天数÷接种当日体重。免疫后28天、56天，每组各剖检3头，进行常规病理学临床检查，重点对免疫系统相关组织器官，包括胸腺、脾、颌下淋巴结、肠系膜淋巴结、腋窝淋巴结、腹股沟淋巴结等进行检查，若发生明显病变器官则进行组织学观察。取接种部位肌肉组织进行组织学观察。
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