滴鼻枯草芽孢杆菌对鸡黏膜免疫功能的影响
：已有研究报道枯草芽孢杆菌作为佐剂以滴鼻方式免疫小鼠后能有效刺激机体产生特异性黏膜免疫应答[8]，但针对枯草芽孢杆菌对鸡的黏膜免疫作用研究还比较少。因此，本试验以聚肌胞为阳性对照组，PBS为阴性对照组，拟初步探究滴鼻枯草芽孢杆菌对鸡黏膜免疫功能的影响。结果显示：滴鼻枯草芽孢杆菌能有效促进机体呼吸道和消化道黏膜处IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ等细胞因子和分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的分泌，提高血清中免疫球蛋白A（IgA）的水平，初步说明滴鼻枯草芽孢杆菌能有效提高鸡呼吸道、消化道黏膜的局部免疫功能。
目录
摘要1
关键词1
Abstract 1
Key words 1
引言1
1 材料与方法2
1.1 菌株 2
1.2 试验动物 2
1.3 仪器设备 2
1.4 试剂耗材 2
1.5试验方法 2
1.5.1 试验设计 2
1.5.2 饲养管理 2
1.5.3 样品采集 2
1.5.4 测定指标和方法 3
1.5.4.1 细胞因子（IL6、IL10、IL12、IFN(）3
1.5.4.2 分泌型免疫球蛋白A（sIgA)3
1.5.4.3 免疫球蛋白A（IgA）3
1.6 统计分析 3
2 结果和分析3
2.1枯草芽孢杆菌促进鼻腔、气管和空肠组织细胞因子的分泌3
2.2枯草芽孢杆菌提高局部sIgA水平 5
2.3枯草芽孢杆菌提高血清IgA水平 8
3讨论 8
致谢9
参考文献 10
滴鼻枯草芽孢杆菌对鸡黏膜免疫功能的影响
引言
引言
对枯草芽孢杆菌的早期研究主要集中于生物防治领域，尤其在植物病害的防治中发挥了十分重要的作用。随着研究方向的逐渐拓宽，其有益的生态效应和独特的作用方式使枯草芽孢杆菌被广泛地应用于医疗、食品、畜禽和水产养殖等不同领域。枯草芽孢杆菌可以产生70多种抗菌素和多种酶类，在不利环境条件中能够以芽孢的形式存
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
在。芽孢在饲料制备、贮存过程及胃酸环境中仍能保持较高的活性，具有抗干燥、耐热、便于使用和运输等优点，在改善畜禽的生产性能、提高消化率、维持肠道菌群的平衡与稳定等方面均有较好的效果[1]。近年来枯草芽孢杆菌在防御动物疾病方面的作用也成为了研究热点之一，主要体现在拮抗病原菌、促进机体免疫反应和作为有效的疫苗载体系统或免疫佐剂以促进黏膜疫苗的发展等方面[2]。枯草芽孢杆菌在动物肠道中生存，可有效刺激机体释放分泌型免疫球蛋白A（sIgA），促进肠道黏膜的局部免疫功能，从而进一步增强机体的免疫力[3]。黏膜免疫系统是机体整个免疫网络不可或缺的重要组成部分之一，同时又是一个独立的具有独特结构和功能的的免疫体系，黏膜表面与外界抗原（比如病原微生物、食物等）直接接触，是机体抵抗感染的第一道防线，在抵抗感染方面有极其重要的作用。因此，提高黏膜免疫功能是增强机体免疫力的重要途径之一。
聚肌胞（polyinosinic:polycytidylicacid, polyI:C）是人工合成的dsRNA，常被用作Ⅰ型干扰素的诱生剂。研究发现， 聚肌胞还可促进巨噬细胞、T细胞、NK细胞、树突状细胞等免疫细胞的成熟与分化， 诱导分泌IL6、IL12 和TNFα等多种细胞因子，增强机体的细胞免疫和体液免疫[4]。
本试验以白来航蛋鸡为研究对象，以滴鼻聚肌胞为阳性对照组，滴鼻PBS为阴性对照组，拟初步探究滴鼻枯草芽孢杆菌对鸡黏膜免疫系统的影响，旨在为枯草芽孢杆菌提高动物机体黏膜免疫功能的研究和广泛应用奠定基础。
1. 材料和方法
1.1 菌株 枯草芽孢杆菌WB800（Bacillus subtilis WB800），活菌数为2×109CFU/ml，由本实验室提供。
1.2 试验动物 100羽1日龄SPF级白来航蛋鸡，购自山东斯帕法斯家禽公司。
1.3 仪器设备 全自动超净工作台，江苏苏州净化设备有限公司；全自动吸光度/荧光多功能酶标仪，美国Biotek公司； 4℃高速离心机，德国Eppendorf仪器制造公司；数字分析天平，德国Sartorius集团；水平摇床，江苏省太仓实验仪器有限公司；全自动恒温水浴锅，中国无锡科隆公司。
1.4 试剂耗材 鸡IL6酶联免疫分析（ELISA）试剂盒，鸡IL10 ELISA试剂盒，鸡IL12 ELISA试剂盒，鸡IFNγ ELISA试剂盒，鸡sIgA试剂盒，鸡IgA试剂盒，均购自南京森贝伽生物有限公司。
1.5 试验方法
1.5.1 试验设计 选用1日龄白来航蛋鸡72羽，平均体重为（38.20±3.03）g，随机分为阴性对照组、阳性对照组和试验组，每组24只。分别于3和10日龄滴鼻0.01M PBS缓冲液（50μL/只）、聚肌胞液 （50μg/只）、枯草芽孢杆菌菌液（1.0×108 CFU/只)。
1.5.2 饲养管理 试验期为38天，试验蛋鸡饲养于动物房隔离器中（南京天邦生物技术有限公司提供），自由饮水和采食；12小时光照；隔离器中温度在第一周保持为33℃，此后每周平均下降2℃。
1.5.3 样品采集 于10、13、17、24、31、38日龄在阴性对照组、阳性对照组和试验组中各随机取6羽鸡采血。于13、24、38日龄在阴性对照组、阳性对照组和试验组中各随机取6羽鸡剖杀，取鼻腔、气管和空肠的组织和涮洗液、口腔拭子和泄殖腔拭子。血液样品离心后取血清分装到PCR管中；鼻腔、气管和空场的涮洗液离心后取上清分装到PCR管中；泄殖腔拭子和口腔拭子每管加250μl 0.01M PBS溶液，离心后取上清分装到PCR管。处理得到的样品均于20℃保存待检。
1.5.4 测定指标和方法
1.5.4.1 细胞因子 参考文献[5]中检测方法，严格按照试剂盒说明测定13日龄鸡鼻腔、气管和空肠组织中IL6、IL10、IL12、IFNγ含量。
1.5.4.2 分泌型免疫球蛋白A和免疫球蛋白A 对鼻腔、气管、空肠涮洗液；泄殖腔、口腔拭子等处理样品中sIgA和血清中IgA的检测均严格按照试剂盒说明进行。
1.6 统计分析 数据采用SPSS17.0统计软件处理，并采用单因子方差（OneWay ANOVA）检验法，以P<0.05作为差异显著性判断标准，P<0.01作为差异极显著性判断标准。用GraphPad Prism 6和Photoshop作图。
2. 结果和分析
2.1 芽孢杆菌促进鼻腔、气管和空肠处细胞因子的分泌
由图1可见，试验组和阳性对照组鼻腔组织中的IL6含量都极显著高于阴性对照组（P<0.01），气管和空肠组织中的IL6含量也都显著高于阴性对照组（P<0.05）。说明滴鼻枯草芽孢杆菌能够显著促进鼻腔、气管、空肠黏膜组织中IL6的分泌。
目录
摘要1
关键词1
Abstract 1
Key words 1
引言1
1 材料与方法2
1.1 菌株 2
1.2 试验动物 2
1.3 仪器设备 2
1.4 试剂耗材 2
1.5试验方法 2
1.5.1 试验设计 2
1.5.2 饲养管理 2
1.5.3 样品采集 2
1.5.4 测定指标和方法 3
1.5.4.1 细胞因子（IL6、IL10、IL12、IFN(）3
1.5.4.2 分泌型免疫球蛋白A（sIgA)3
1.5.4.3 免疫球蛋白A（IgA）3
1.6 统计分析 3
2 结果和分析3
2.1枯草芽孢杆菌促进鼻腔、气管和空肠组织细胞因子的分泌3
2.2枯草芽孢杆菌提高局部sIgA水平 5
2.3枯草芽孢杆菌提高血清IgA水平 8
3讨论 8
致谢9
参考文献 10
滴鼻枯草芽孢杆菌对鸡黏膜免疫功能的影响
引言
引言
对枯草芽孢杆菌的早期研究主要集中于生物防治领域，尤其在植物病害的防治中发挥了十分重要的作用。随着研究方向的逐渐拓宽，其有益的生态效应和独特的作用方式使枯草芽孢杆菌被广泛地应用于医疗、食品、畜禽和水产养殖等不同领域。枯草芽孢杆菌可以产生70多种抗菌素和多种酶类，在不利环境条件中能够以芽孢的形式存
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
在。芽孢在饲料制备、贮存过程及胃酸环境中仍能保持较高的活性，具有抗干燥、耐热、便于使用和运输等优点，在改善畜禽的生产性能、提高消化率、维持肠道菌群的平衡与稳定等方面均有较好的效果[1]。近年来枯草芽孢杆菌在防御动物疾病方面的作用也成为了研究热点之一，主要体现在拮抗病原菌、促进机体免疫反应和作为有效的疫苗载体系统或免疫佐剂以促进黏膜疫苗的发展等方面[2]。枯草芽孢杆菌在动物肠道中生存，可有效刺激机体释放分泌型免疫球蛋白A（sIgA），促进肠道黏膜的局部免疫功能，从而进一步增强机体的免疫力[3]。黏膜免疫系统是机体整个免疫网络不可或缺的重要组成部分之一，同时又是一个独立的具有独特结构和功能的的免疫体系，黏膜表面与外界抗原（比如病原微生物、食物等）直接接触，是机体抵抗感染的第一道防线，在抵抗感染方面有极其重要的作用。因此，提高黏膜免疫功能是增强机体免疫力的重要途径之一。
聚肌胞（polyinosinic:polycytidylicacid, polyI:C）是人工合成的dsRNA，常被用作Ⅰ型干扰素的诱生剂。研究发现， 聚肌胞还可促进巨噬细胞、T细胞、NK细胞、树突状细胞等免疫细胞的成熟与分化， 诱导分泌IL6、IL12 和TNFα等多种细胞因子，增强机体的细胞免疫和体液免疫[4]。
本试验以白来航蛋鸡为研究对象，以滴鼻聚肌胞为阳性对照组，滴鼻PBS为阴性对照组，拟初步探究滴鼻枯草芽孢杆菌对鸡黏膜免疫系统的影响，旨在为枯草芽孢杆菌提高动物机体黏膜免疫功能的研究和广泛应用奠定基础。
1. 材料和方法
1.1 菌株 枯草芽孢杆菌WB800（Bacillus subtilis WB800），活菌数为2×109CFU/ml，由本实验室提供。
1.2 试验动物 100羽1日龄SPF级白来航蛋鸡，购自山东斯帕法斯家禽公司。
1.3 仪器设备 全自动超净工作台，江苏苏州净化设备有限公司；全自动吸光度/荧光多功能酶标仪，美国Biotek公司； 4℃高速离心机，德国Eppendorf仪器制造公司；数字分析天平，德国Sartorius集团；水平摇床，江苏省太仓实验仪器有限公司；全自动恒温水浴锅，中国无锡科隆公司。
1.4 试剂耗材 鸡IL6酶联免疫分析（ELISA）试剂盒，鸡IL10 ELISA试剂盒，鸡IL12 ELISA试剂盒，鸡IFNγ ELISA试剂盒，鸡sIgA试剂盒，鸡IgA试剂盒，均购自南京森贝伽生物有限公司。
1.5 试验方法
1.5.1 试验设计 选用1日龄白来航蛋鸡72羽，平均体重为（38.20±3.03）g，随机分为阴性对照组、阳性对照组和试验组，每组24只。分别于3和10日龄滴鼻0.01M PBS缓冲液（50μL/只）、聚肌胞液 （50μg/只）、枯草芽孢杆菌菌液（1.0×108 CFU/只)。
1.5.2 饲养管理 试验期为38天，试验蛋鸡饲养于动物房隔离器中（南京天邦生物技术有限公司提供），自由饮水和采食；12小时光照；隔离器中温度在第一周保持为33℃，此后每周平均下降2℃。
1.5.3 样品采集 于10、13、17、24、31、38日龄在阴性对照组、阳性对照组和试验组中各随机取6羽鸡采血。于13、24、38日龄在阴性对照组、阳性对照组和试验组中各随机取6羽鸡剖杀，取鼻腔、气管和空肠的组织和涮洗液、口腔拭子和泄殖腔拭子。血液样品离心后取血清分装到PCR管中；鼻腔、气管和空场的涮洗液离心后取上清分装到PCR管中；泄殖腔拭子和口腔拭子每管加250μl 0.01M PBS溶液，离心后取上清分装到PCR管。处理得到的样品均于20℃保存待检。
1.5.4 测定指标和方法
1.5.4.1 细胞因子 参考文献[5]中检测方法，严格按照试剂盒说明测定13日龄鸡鼻腔、气管和空肠组织中IL6、IL10、IL12、IFNγ含量。
1.5.4.2 分泌型免疫球蛋白A和免疫球蛋白A 对鼻腔、气管、空肠涮洗液；泄殖腔、口腔拭子等处理样品中sIgA和血清中IgA的检测均严格按照试剂盒说明进行。
1.6 统计分析 数据采用SPSS17.0统计软件处理，并采用单因子方差（OneWay ANOVA）检验法，以P<0.05作为差异显著性判断标准，P<0.01作为差异极显著性判断标准。用GraphPad Prism 6和Photoshop作图。
2. 结果和分析
2.1 芽孢杆菌促进鼻腔、气管和空肠处细胞因子的分泌
由图1可见，试验组和阳性对照组鼻腔组织中的IL6含量都极显著高于阴性对照组（P<0.01），气管和空肠组织中的IL6含量也都显著高于阴性对照组（P<0.05）。说明滴鼻枯草芽孢杆菌能够显著促进鼻腔、气管、空肠黏膜组织中IL6的分泌。
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/dwyx/934.html
