多聚核苷酸与h9亚型禽流感灭活疫苗联合使用的免疫效果研究(附件)【字数：7207】
中文1Abstract1引言11材料与方法21.1试验动物21.2主要试剂与器材21.3技术路线31.4疫苗的配制31.4.1抗原处理31.4.2白油佐剂的配制31.5 SPF鸡免疫试验31.6抗体效价的检测41.6.1 1%鸡红细胞的制备41.6.2 4单位抗原的制备41.5.3 血凝(HA)试验(微量法) 41.6.4血凝抑制(HI)试验(微量法) 41.7免疫后血清中IL-2、IL-4、IFN-γ的含量检测41.8 数据处理52 结果与分析52.1聚肌胞作为免疫佐剂提高SPF鸡免疫后血清的HI抗体效价52.2聚肌胞作为免疫佐剂对血清中IL-2、IL-4、IFN-γ含量的影响53.讨论7致谢8参考文献9表1 血凝试验结果判读标准4图1技术路线3图2 SPF鸡免疫后血清的HI效价5图3 SPF鸡免疫后血清中IL-2含量变化6图4 SPF鸡免疫后血清中IL-4含量变化6图5 SPF鸡免疫后血清中IFN-g含量变化7多聚核苷酸与H9亚型禽流感灭活疫苗联合使用的免疫效果研究 动物医学专业学生 陈杨指导教师 吕英军为研究聚肌胞加强鸡免疫效力的机理，将鸡分别接种禽流感灭活疫苗、含佐剂的禽流感灭活疫苗，同时设立空白对照。监测血清白细胞介素-2、白细胞介素-4和干扰素-γ等细胞因子含量及血清HI抗体效价。接种SPF鸡后3周，含不同剂量免疫佐剂H9灭活疫苗HI抗体效价均超过7log2,而且聚肌胞还能够诱导白细胞介素-2以及干扰素-γ的分泌。免疫佐剂（聚肌胞）能提升禽流感灭活疫苗对SPF鸡的免疫效果，具备良好的临床应用前景。
目 录
Effects of Poly I:C Associated with H9 Subtype Avian Influenza Inactivated Vaccine On Broiler Immunity
Student majoring in veterinary medicine Chen Yang
Tutor Lv Yingjun
Abstract: The aim of this study is to explore the immunological mechanism of immunological adjuvant PoIyI:C( *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
polyinosinicpolycytidylic acid ) in improving the immune response of specific pathogen Free (SPF) chickens. SPF chickens were challenged with the inactivated H9 subtype vaccine, the H9 avian influenza vaccines containing different doses of adjuvant,and notreatment control respectively .The contents of Interleukin2,Interleukin4 and Interferon γ from sera and the HI antibody titer were tested. The results showed that HI antibody titer of the H9 avian influenza vaccines containing different doses of adjuvant were all exceeded 7log2 when injected SPF chicken after 3 weeks, and the Poly I:C induced high secretions of IL2 and IFNg. The adjuvant can improve the efficacy on H9 avian influenza in chicken, and shows prospect in clinical application.
Key words: adjuvant;Poly I:C;avian influenza inactivated vaccine;cytokine;antibody of hemagglutinin inhibition
在现有H9亚型禽流感油乳剂灭活疫苗的基础上,添加聚肌胞作为佐剂，免疫SPF鸡。通过监测血清HI抗体效价、细胞因子含量，从体液免疫和细胞免疫两方面来评价聚肌胞的免疫增强作用，为研制出一种新的高效广谱禽流感H9N2灭活疫苗，筛选出一种新方法。
禽流感是由禽流感病毒传染家禽后，诱发的一种从呼吸道症状到严重全身败血性疾病等的各种综合征。该病是如今存在于大型规模化养鸡场的主要疫病，世界上很多国家都有过流行。禽流感不仅危害公共卫生安全，而且给养殖业带来了很大的财产损失。禽流感甚至还会破坏到社会的稳定和谐。客观上来看，禽流感病毒的毒力逐年增强，其抗原也在频繁变异，使得疫苗株的选育变得尤为困难，是困扰医学领域的难题之一。
禽流感病毒（AIV）的抗原性频繁变异。目前有研究显示，H9N2禽流感病毒的变异在加快，禽流感病毒可因血凝素基因变异而导致毒力和抗原性变异的流行性强毒株的出现，并可跨越种属界限而直接感染给人[1]。2013年3月，华东地区爆发人类感染禽流感疫情，引发本次疫情的病毒血清型是H7N9。这与以往熟知的禽流感病毒不尽相同。H7N9由于其高致病性及超强的扩散能力而受到民众关注，其中H5和H7两种亚型被认为是高致病性禽流感病毒。禽流感的调查进行到今天，早已进入分子水平，对病毒的致病性研究也有了很大的突破。禽流感病毒要想攻击宿主细胞，首先要看血凝素能否被裂解为血凝素1、血凝素2。冯爱娟[2]在研究中指出，禽流感病毒的毒力是多基因互作的产物，血凝素（HA）在其中的扮演的角色十分重要。因为血凝素的切割功能比较广泛，所以其诱发的病变很严重，产生的死亡率也比较高。但是低致病性和无致病性禽流感病毒血凝素切割位点通常位于呼吸、消化道，其只含一个碱性氨基酸，即精氨酸。所以血凝素切割点碱性氨基酸序列能作为判别高致病毒株的遗传标记之一[3]。
商品鸡因为其发育周期短且生长迅速的特殊生理特性，所以其对各类传染病的抗性很差。正因如此，传染病防控起来难度很大。商品鸡养殖中禽流感、大肠杆菌和新城疫时常发生混合性感染，使得肉鸡养殖的传染病防控更是难上加难。根据当前禽流感防治的实际结果来看，采用灭活疫苗进行免疫预防依旧是目前用来避免这种传染病暴发的主要方法。经过长时间调查研究表明，在禽流感的实际防控过程中，H9亚型禽流感多表现出重度的呼吸系统问题，同时其发病率也呈上升的趋势，死亡率甚至可超过10%以上。因此寻找一套科学、有效的防控禽流感的方法，是在鸡规模化养殖过程中的不可忽视的因素之一[4]。
目 录
Effects of Poly I:C Associated with H9 Subtype Avian Influenza Inactivated Vaccine On Broiler Immunity
Student majoring in veterinary medicine Chen Yang
Tutor Lv Yingjun
Abstract: The aim of this study is to explore the immunological mechanism of immunological adjuvant PoIyI:C( *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
polyinosinicpolycytidylic acid ) in improving the immune response of specific pathogen Free (SPF) chickens. SPF chickens were challenged with the inactivated H9 subtype vaccine, the H9 avian influenza vaccines containing different doses of adjuvant,and notreatment control respectively .The contents of Interleukin2,Interleukin4 and Interferon γ from sera and the HI antibody titer were tested. The results showed that HI antibody titer of the H9 avian influenza vaccines containing different doses of adjuvant were all exceeded 7log2 when injected SPF chicken after 3 weeks, and the Poly I:C induced high secretions of IL2 and IFNg. The adjuvant can improve the efficacy on H9 avian influenza in chicken, and shows prospect in clinical application.
Key words: adjuvant;Poly I:C;avian influenza inactivated vaccine;cytokine;antibody of hemagglutinin inhibition
在现有H9亚型禽流感油乳剂灭活疫苗的基础上,添加聚肌胞作为佐剂，免疫SPF鸡。通过监测血清HI抗体效价、细胞因子含量，从体液免疫和细胞免疫两方面来评价聚肌胞的免疫增强作用，为研制出一种新的高效广谱禽流感H9N2灭活疫苗，筛选出一种新方法。
禽流感是由禽流感病毒传染家禽后，诱发的一种从呼吸道症状到严重全身败血性疾病等的各种综合征。该病是如今存在于大型规模化养鸡场的主要疫病，世界上很多国家都有过流行。禽流感不仅危害公共卫生安全，而且给养殖业带来了很大的财产损失。禽流感甚至还会破坏到社会的稳定和谐。客观上来看，禽流感病毒的毒力逐年增强，其抗原也在频繁变异，使得疫苗株的选育变得尤为困难，是困扰医学领域的难题之一。
禽流感病毒（AIV）的抗原性频繁变异。目前有研究显示，H9N2禽流感病毒的变异在加快，禽流感病毒可因血凝素基因变异而导致毒力和抗原性变异的流行性强毒株的出现，并可跨越种属界限而直接感染给人[1]。2013年3月，华东地区爆发人类感染禽流感疫情，引发本次疫情的病毒血清型是H7N9。这与以往熟知的禽流感病毒不尽相同。H7N9由于其高致病性及超强的扩散能力而受到民众关注，其中H5和H7两种亚型被认为是高致病性禽流感病毒。禽流感的调查进行到今天，早已进入分子水平，对病毒的致病性研究也有了很大的突破。禽流感病毒要想攻击宿主细胞，首先要看血凝素能否被裂解为血凝素1、血凝素2。冯爱娟[2]在研究中指出，禽流感病毒的毒力是多基因互作的产物，血凝素（HA）在其中的扮演的角色十分重要。因为血凝素的切割功能比较广泛，所以其诱发的病变很严重，产生的死亡率也比较高。但是低致病性和无致病性禽流感病毒血凝素切割位点通常位于呼吸、消化道，其只含一个碱性氨基酸，即精氨酸。所以血凝素切割点碱性氨基酸序列能作为判别高致病毒株的遗传标记之一[3]。
商品鸡因为其发育周期短且生长迅速的特殊生理特性，所以其对各类传染病的抗性很差。正因如此，传染病防控起来难度很大。商品鸡养殖中禽流感、大肠杆菌和新城疫时常发生混合性感染，使得肉鸡养殖的传染病防控更是难上加难。根据当前禽流感防治的实际结果来看，采用灭活疫苗进行免疫预防依旧是目前用来避免这种传染病暴发的主要方法。经过长时间调查研究表明，在禽流感的实际防控过程中，H9亚型禽流感多表现出重度的呼吸系统问题，同时其发病率也呈上升的趋势，死亡率甚至可超过10%以上。因此寻找一套科学、有效的防控禽流感的方法，是在鸡规模化养殖过程中的不可忽视的因素之一[4]。
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