高通量筛选TRPP2PKD1复合物的小分子激动剂
高通量筛选TRPP2PKD1复合物的小分子激动剂[20200507184511]
摘要：常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)是人类最常见的一种遗传病，患病率约占世界人口的千分之一。ADPKD大多是由两个多囊蛋白基因之一，PKD1 或 PKD2，发生突变所致。在肾脏上皮细胞纤毛中，PKD1和TRPP2直接结合形成受体－通道复合物。目前已获得丰富而新颖的TRPP2/PKD1复合物装配的分子和结构基础方面的信息，由于缺乏此复合物的激活剂，未能进一步阐明TRPP2/PKD1复合物及其突变体的功能特征。本实验通过构建稳定表达PKD1和TRPP2/PKD1离子通道细胞株，利用生姜、野山参和金银花进行液相分离得到的活性物质作用于离子通道，筛选TRPP2/PKD1复合物的小分子激动剂，结果表明，生姜组分13可以特异性激活PKD1和TRPP2/PKD1离子通道，其他组分无特异性激活作用，其中生姜组分13-2和13-3对离子通道有特异性激活作用。野山参和金银花并未发现有特异性激活作用。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
关键字:多囊肾;TRPP2/PKD1；激动剂；生姜
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1 实验材料4
1.1主要试剂4
1.2 主要仪器4
1.3 液相分离的中草药4
1.4 实验用细胞4
2 实验方法4
2.1 稳定表达TRPP2/PKD1和PKD1离子通道细胞株 4
2.1.1 HEK293细胞的培养4
2.1. 2 G418 筛选抗生素剂量－反应分析 4
2.1.3 Lipofectin 2000 试剂盒进行瞬时转染5
2.1.4 抗G418 克隆筛选及挑选单克隆5
2.1.5扩大培养与冻存5
2.2 活性成分对通道的作用5
3实验结果5
3.1 稳定表达PKD1和PKD1/TRPP2钾通道HEK293细胞株的建立5
3.2中草药作用于通道的结果6
4 讨论8
4.1 离子通道载体的构建8
4.2中草药的筛选8
致谢9
参考文献9
高通量筛选TRPP2/PKD1复合物的小分子激动剂
摘要：常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)是人类最常见的一种遗传病，患病率约占世界人口的千分之一。ADPKD大多是由两个多囊蛋白基因之一，PKD1 或 PKD2，发生突变所致。在肾脏上皮细胞纤毛中，PKD1和TRPP2直接结合形成受体－通道复合物。目前已获得丰富而新颖的TRPP2/PKD1复合物装配的分子和结构基础方面的信息，由于缺乏此复合物的激活剂，未能进一步阐明TRPP2/PKD1复合物及其突变体的功能特征。本实验通过构建稳定表达PKD1和TRPP2/PKD1离子通道细胞株，利用生姜、野山参和金银花进行液相分离得到的活性物质作用于离子通道，筛选TRPP2/PKD1复合物的小分子激动剂，结果表明，生姜组分13可以特异性激活PKD1和TRPP2/PKD1离子通道，其他组分无特异性激活作用，其中生姜组分13-2和13-3对离子通道有特异性激活作用。野山参和金银花并未发现有特异性激活作用。
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关键字:多囊肾;TRPP2/PKD1；激动剂；生姜
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关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1 实验材料4
1.1主要试剂4
1.2 主要仪器4
1.3 液相分离的中草药4
1.4 实验用细胞4
2 实验方法4
2.1 稳定表达TRPP2/PKD1和PKD1离子通道细胞株 4
2.1.1 HEK293细胞的培养4
2.1. 2 G418 筛选抗生素剂量－反应分析 4
2.1.3 Lipofectin 2000 试剂盒进行瞬时转染5
2.1.4 抗G418 克隆筛选及挑选单克隆5
2.1.5扩大培养与冻存5
2.2 活性成分对通道的作用5
3实验结果5
3.1 稳定表达PKD1和PKD1/TRPP2钾通道HEK293细胞株的建立5
3.2中草药作用于通道的结果6
4 讨论8
4.1 离子通道载体的构建8
4.2中草药的筛选8
致谢9
参考文献9
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